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      細(xì)胞膜

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      細(xì)胞膜范文第1篇

       

      紅細(xì)胞直接作為載體,用于運(yùn)載小分子藥物和蛋白質(zhì)、核酸等大分子藥物的研究已廣泛展開(kāi)。此外,制備保持完整功能的紅細(xì)胞膜包封納米粒作為藥物載體的研究也取得了一定進(jìn)展。本文綜述了紅細(xì)胞作為運(yùn)載工具輸送藥物的研究情況,另外,著重介紹兩種新型的紅細(xì)胞膜載藥系統(tǒng)---紅細(xì)胞膜包裹納米粒( RBC-NP) 和紅細(xì)胞膜納米海綿的最新研究進(jìn)展。

       

      1 紅細(xì)胞作為藥物載體的發(fā)展歷程

       

      早在 1953 年,已有科學(xué)家嘗試用紅細(xì)胞運(yùn)載化學(xué)物質(zhì)。隨后有人成功將相對(duì)分子質(zhì)量 10 ~250 kD 的右旋糖酐類(lèi)載入紅細(xì)胞。而直到 1973年,科學(xué)家們才開(kāi)始采用紅細(xì)胞做為藥物載體,并于 1979 年首次以紅細(xì)胞載體( carrier erythrocytes)來(lái)描述運(yùn)載藥物的紅細(xì)胞[4].最先應(yīng)用紅細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)的是各種酶類(lèi),如乙醛脫氫酶[5]、谷氨酸脫氫酶[6]等。經(jīng)過(guò) 30 多年發(fā)展,紅細(xì)胞已應(yīng)用于輸送不同性質(zhì)的藥物,用于治療腫瘤、心腦血管疾病、各類(lèi)炎癥等。

       

      2 紅細(xì)胞作為藥物載體的特點(diǎn)

       

      紅細(xì)胞作為藥物載體主要有以下優(yōu)勢(shì): 降解不會(huì)產(chǎn)生有毒或有害物質(zhì),紅細(xì)胞的粒徑及形狀相同,提供相對(duì)穩(wěn)定的內(nèi)環(huán)境,各種化學(xué)物質(zhì)和酶都可包裹在紅細(xì)胞膜內(nèi),防止內(nèi)源物質(zhì)降解運(yùn)載的藥物,可調(diào)整藥物的藥代動(dòng)力學(xué)和藥效學(xué),保持血漿內(nèi)藥物濃度的穩(wěn)定,延長(zhǎng)藥物的全身作用時(shí)間,減少藥物的不良反應(yīng)等[7].

       

      2. 1 延長(zhǎng)藥物在體內(nèi)的半衰期

       

      正常紅細(xì)胞的壽命為 120 d 左右,其體內(nèi)循環(huán)時(shí)間遠(yuǎn)高于普通藥物載體。將藥物用紅細(xì)胞負(fù)載后可顯著延長(zhǎng)其體內(nèi)半衰期,提高藥物療效。將抗腫瘤藥物長(zhǎng)春新堿( MTX) 、甲氨蝶呤( VCR) 采用紅細(xì)胞單一負(fù)載或復(fù)合負(fù)載后,可顯著提高藥物抗腫瘤活性,延長(zhǎng)藥物作用時(shí)間。其中 MTX + VCR 的雙載紅細(xì)胞對(duì) K562 細(xì)胞 48 h的抑制率為( 68. 63 ± 2. 76) % ,顯著高于 MTX 或VCR 單載紅細(xì)胞( P < 0. 05)[8-10].連燕舒[11]以紅細(xì)胞運(yùn)載嗎啡( M-RBC) 用于手術(shù)后鎮(zhèn)痛,實(shí)驗(yàn)組術(shù)后無(wú)痛時(shí)間為( 15. 7 ± 5. 6) h,遠(yuǎn)高于對(duì)照組( 3. 2 ±2. 3) h,明顯延長(zhǎng)了嗎啡的鎮(zhèn)痛時(shí)效,且 M-RBC 半衰期為( 6. 48 ± 1. 56) h,與文獻(xiàn)報(bào)道嗎啡體內(nèi)半衰期 2. 5 ~3 h 相比顯著增加。核磁共振檢查一般采用超順磁氧化鐵顆粒( SPIO) 和超小型超順磁氧化鐵顆粒 ( USPIO) 作為對(duì)比劑。Antonelli等[12]用紅細(xì)胞運(yùn)載 SPIO 作對(duì)比劑,注射后 24 h血液內(nèi)鐵離子濃度仍接近檢測(cè)限,該對(duì)比劑血液中壽命可被延長(zhǎng)至 12 d.

       

      2. 2 良好的生物相容性和可降解性,減少不良反應(yīng)。

       

      天然紅細(xì)胞為機(jī)體固有成分,可通過(guò)代謝完全降解為無(wú)毒產(chǎn)物,作為運(yùn)載體在體內(nèi)不會(huì)引起其他不良反應(yīng)。聚氧乙烯蓖麻油( Cremophor) 常添加于紫杉醇注射液中作增溶劑,但易引起感染、過(guò)敏等不良反應(yīng)。Harisa 等[13]嘗試以紅細(xì)胞作為藥物載體運(yùn)載紫衫醇,替代 Cremophor 的使用。載藥的紅細(xì)胞各種生理特性并無(wú)顯著差異,可作為紫衫醇的藥物靶向輸送載體。

       

      2. 3 增加藥物在體內(nèi)的穩(wěn)定性,降低免疫原性。

       

      紅細(xì)胞可形成一個(gè)隔離空間以保護(hù)運(yùn)載的物質(zhì),使藥物不受內(nèi)源性因素的影響而過(guò)早失活和降解,提高藥物在體內(nèi)的穩(wěn)定性。此外,亦可減少外源性大分子( 如基因物質(zhì)、蛋白等) 引起的免疫反應(yīng),是運(yùn)載大分子藥物的理想工具[14].

       

      2. 4 增加藥物的靶向性

       

      紅細(xì)胞因衰老或其他原因造成膜表面性質(zhì)變化,經(jīng)過(guò)脾和肝時(shí)可被網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)( RES) 的巨噬細(xì)胞識(shí)別、吞噬,因此紅細(xì)胞可作為天然的 RES 靶向給藥載體。已有研究將干擾素 α-2b 用紅細(xì)胞擔(dān)載后用于 RES 靶向給藥[15].為增加紅細(xì)胞被識(shí)別能力,Chiarantini 等[16]將反義肽核酸載入紅細(xì)胞后,誘導(dǎo)紅細(xì)胞表面的帶三蛋白凝集并固定化,使之成為自體免疫球蛋白 G( IgG) 的識(shí)別、結(jié)合位點(diǎn),從而被巨噬細(xì)胞內(nèi)吞,最終抑制了巨噬細(xì)胞內(nèi)一氧化氮合酶( iNOS) 和環(huán)氧化酶 2( COX-2) 的表達(dá)。

       

      除 RES 靶向外,紅細(xì)胞載體還可實(shí)現(xiàn)其他部位靶向?;熕幬镌谡=M織器官的分布積累是導(dǎo)致其不良反應(yīng)的重要原因,磁化紅細(xì)胞載體是解決這一問(wèn)題的新手段。有報(bào)道將氧化鐵納米粒通過(guò)生物素-親和素方法偶聯(lián)到紅細(xì)胞表面,或?qū)⑺难趸F納米粒載入紅細(xì)胞內(nèi),制成紅細(xì)胞磁化載體來(lái)運(yùn)載多柔比星[17-18].磁化紅細(xì)胞本身生理特性并無(wú)明顯改變,但在外磁場(chǎng)的控制下可將藥物準(zhǔn)確輸送到腫瘤部位。Cinti 等[19]將超順磁納米粒載入紅細(xì)胞內(nèi),并以病毒血凝素糖蛋白對(duì)紅細(xì)胞膜表面進(jìn)行修飾,構(gòu)建一種新型紅細(xì)胞磁化載體。該磁化載體到達(dá)靶部位后能高效地與腫瘤細(xì)胞融合并釋放藥物,用其運(yùn)載地西他濱,給藥劑量?jī)H為常規(guī)化療劑量的 10%.

       

      2. 5 延長(zhǎng)藥物釋放時(shí)間,保持血藥濃度穩(wěn)定

       

      紅細(xì)胞膜是具有生物活性的半透膜,藥物被載入紅細(xì)胞后可實(shí)現(xiàn)緩慢持續(xù)釋放,與傳統(tǒng)給藥方式相比,能明顯減少血藥濃度的波動(dòng)。Alanazi 等[20]用紅細(xì)胞負(fù)載伯氨喹用于瘧疾的治療,載藥后的紅細(xì)胞可實(shí)現(xiàn) 48 h 的藥物持續(xù)釋放,但膜上谷胱甘肽( GSH) 的含量顯著降低,使載藥后的紅細(xì)胞更易被氧化。Bossa 等[21]將地塞米松的前藥地塞米松-21-磷酸鹽( DEX 21-P) 載入紅細(xì)胞內(nèi),DEX 21-P先在酶的作用下去磷酸化生成地塞米松,再通過(guò)自由擴(kuò)散作用釋放到紅細(xì)胞外,如此給藥一次便可維持 3 ~4 周的治療濃度。

       

      2. 6 負(fù)載各類(lèi)物質(zhì)進(jìn)行遞送

       

      紅細(xì)胞載體適用范圍廣,無(wú)論是大分子藥物還是小分子藥物,大多可被紅細(xì)胞運(yùn)載,在適當(dāng)?shù)妮d藥條件下可較大程度地保持紅細(xì)胞的活性和功能。Harisa 等[22]用紅細(xì)胞負(fù)載降血脂藥物普伐他汀,探究不同包封條件對(duì)紅細(xì)胞載藥率及其生理特性的影響,結(jié)果顯示在 0. 6% NaCl、普伐他汀質(zhì)量濃度為 10 mg/mL 下孵育60 min 可得到最大載藥率,且紅細(xì)胞的生理特性基本無(wú)變化。Favretto 等[23]則研究了用 3 種方法將不同相對(duì)分子質(zhì)量的酶載入紅細(xì)胞的情況,結(jié)果顯示,氯丙嗪浸泡法和脂質(zhì)體融合法,相較于低滲透析法,可提高載藥率減少不良反應(yīng)。Shi 等[24]利用二硬脂酸磷脂酰乙酰胺將 IgG 連接于紅細(xì)胞膜上,這種方法可顯著提高整個(gè)紅細(xì)胞載體的穩(wěn)定性,且有利于藥物的靶向運(yùn)輸。

       

      3 紅細(xì)胞載體的制備

       

      3. 1 紅細(xì)胞載體的來(lái)源

       

      紅細(xì)胞及紅細(xì)胞膜的來(lái)源與提取相對(duì)簡(jiǎn)單,一般通過(guò)離心方法得到血液中的紅細(xì)胞,采用低滲溶血的方式取得紅細(xì)胞膜,也有化學(xué)合成仿生的紅細(xì)胞膜[25].

       

      3. 2 紅細(xì)胞載體的載藥方式

       

      3. 2. 1 將藥物連接在紅細(xì)胞膜上 若藥物( 酶或其他藥物) 必須同紅細(xì)胞膜外不能穿膜的底物直接作用才能產(chǎn)生治療效果,則常用不同的連接方法將藥物連接于紅細(xì)胞膜上。其中親和素-生物素方法是膜與藥物( 特別是生物藥物) 結(jié)合的最常用技術(shù)[30].哺乳動(dòng)物紅細(xì)胞膜生物素?;赏ㄟ^(guò)生物素 N-溴代琥珀酰亞胺酯( NHS-biotin) 引入氨基,也可生物氧化紅細(xì)胞膜的醛基。Magnani 等[31]比較了這些方法,發(fā)現(xiàn)通過(guò) NHS-biotin 生物素酰化的細(xì)胞活性最好,每 1 個(gè)紅細(xì)胞膜連接約 1 000 個(gè)生物素,在體內(nèi) 24 h 的活性不受影響。

       

      3. 2. 2 將藥物包載入紅細(xì)胞內(nèi) 目前,人們運(yùn)用一系列技術(shù)將治療成分包裹入紅細(xì)胞內(nèi),常用的有低滲法、化學(xué)法、電穿孔、胞吞法和脂質(zhì)融合法等[26-28].對(duì)于可自由擴(kuò)散的小分子藥物,常將其前藥或其藥物結(jié)合蛋白包載入紅細(xì)胞內(nèi),通過(guò)前藥的代謝或結(jié)合蛋白對(duì)小分子藥物的親和力實(shí)現(xiàn)藥物的緩慢釋放。大分子蛋白例如一些酶類(lèi)( 其作用底物可穿過(guò)紅細(xì)胞膜進(jìn)入胞內(nèi)的) 可直接包載入紅細(xì)胞內(nèi),如此既可保持藥物本身的穩(wěn)定性,亦可實(shí)現(xiàn)緩慢催化作用[29].

       

      4 基于紅細(xì)胞載藥系統(tǒng)的最新進(jìn)展

       

      紅細(xì)胞載藥的優(yōu)勢(shì)主要依靠紅細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)及功能實(shí)現(xiàn),且紅細(xì)胞膜提取分離較簡(jiǎn)單,因此許多研究者提取單純紅細(xì)胞膜來(lái)考察其藥物輸送作用。例如 Gupta 等[32]提取純凈紅細(xì)胞膜經(jīng)擠壓制成直徑為 100 ~200 nm 的納米紅細(xì)胞小體,運(yùn)載法舒地爾治療肺動(dòng)脈高血壓。紅細(xì)胞膜包裹納米粒( RBC-NP) 以及紅細(xì)胞膜納米海綿這兩種新型紅細(xì)胞膜載體的研究進(jìn)展介紹如下。

       

      4. 1 紅細(xì)胞膜包裹納米粒( RBC-NP)

       

      RBC-NP 藥物載體是將納米粒內(nèi)核和紅細(xì)胞膜結(jié)合,既能彌補(bǔ)納米粒體內(nèi)清除速度快及紅細(xì)胞載體釋藥缺乏可控性的缺點(diǎn),又能發(fā)揮這兩類(lèi)藥物載體的各自?xún)?yōu)勢(shì),是一種十分具有發(fā)展前景的新型藥物載體。

       

      4. 1. 1 RBC-NP 的制備、載藥和釋藥方式 制備RBC-NP 一般采用低滲透析擠壓法。制備基本原理如圖 1 所示,在低滲環(huán)境下紅細(xì)胞膜孔打開(kāi)將內(nèi)容物釋出,得到的紅細(xì)胞膜經(jīng)納米膜擠壓形成納米紅細(xì)胞小體,再將納米紅細(xì)胞小體和納米粒經(jīng)反復(fù)擠壓形成 RBC-NP( 直徑約80 nm) .通過(guò)透射電鏡( TEM) 觀察以及蛋白酶消化等試驗(yàn)證明,合成的RBC-NP 能夠穩(wěn)定存在,且膜包裹的方向?yàn)榧t細(xì)胞膜的外側(cè)朝外,膜內(nèi)側(cè)鄰納米粒內(nèi)核。Luk 等[33]探究了納米粒內(nèi)核的表面電性、曲率半徑等因素對(duì)紅細(xì)胞膜包裹納米粒的影響。結(jié)果顯示,紅細(xì)胞膜可包封粒徑為 65 ~ 340 nm 納米粒,負(fù)電性?xún)?nèi)核與負(fù)電性紅細(xì)胞膜間的靜電作用是能包裹并保持穩(wěn)定的主要原因。

       

      RBC-NP 主要是通過(guò)納米粒內(nèi)核載藥,目前常使用 PLGA,載藥方式分為物理包封和化學(xué)鍵接。有研究通過(guò)這兩種方式將多柔比星載入 RBC-NP,得到的 RBC-NP 在 PBS 緩沖液中具有近似的高穩(wěn)定性,且藥效均高于單純多柔比星給藥,但化學(xué)鍵接載藥的 RBC-NP 藥物釋放更加持久[34].

       

      RBC-NP 的釋藥方式主要有被細(xì)胞吞噬后膜破裂釋藥和通過(guò)細(xì)胞膜擴(kuò)散或特殊的轉(zhuǎn)運(yùn)體系釋藥[35].Gao 等[36]研 究 發(fā) 現(xiàn),將 脂 質(zhì) 體 中 裝 載NH4HCO3,溫度上升至 42 ℃時(shí)產(chǎn)生二氧化碳?xì)馀萜茐闹|(zhì)體膜,可釋放出藥物。如此實(shí)現(xiàn)溫度敏感性釋藥,且無(wú)有害化學(xué)成分殘留。除了內(nèi)部作用,也可通過(guò)外界觸發(fā)釋藥。Delcea 等[37]發(fā)現(xiàn),金納米粒附于紅細(xì)胞膜上,用激光照射后金納米粒聚集處的膜性質(zhì)改變,可形成孔道釋放膜內(nèi)的藥物,這些成果為日后進(jìn)一步發(fā)展 RBC-NP 釋藥技術(shù)提供了新思路。

       

      4. 1. 2 RBC-NP 作為藥物載體的特點(diǎn)及應(yīng)用RBC-NP 與普通藥物載體相比,可顯著延長(zhǎng)藥物的體內(nèi)循環(huán)時(shí)間。Hu 等[38]將 RBC-NP( PLGA 為內(nèi)核) 、PEG 修飾的 PLGA 納米粒( PEG-PLGA NP) 以及 PLGA 納米粒( PLGA NP) 3 種藥物載體進(jìn)行熒光染色后,尾靜脈注射入小鼠體內(nèi),按一定時(shí)間眼眶取血進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果顯示,在 24 和 48 h 后,RBC-NP 在血液中的殘留量分別為 29% 和 16% ,顯著高于 PEG-PLGA NP 組( 11% 和 2%) 和 PLGANP 組( 2 min 后基本不存在) .

       

      RBC-NP 可穩(wěn)定持續(xù)釋放藥物,增加給藥靶向性。Aryal 等[34]將多柔比星載入 RBC-NP 進(jìn)行體外藥物釋放研究,發(fā)現(xiàn) 72 h 內(nèi)藥物釋放率僅為20% ,約為對(duì)照組 ( PEG 修飾的 PLGA 納米粒) 釋放速率的二分之一。為使 RBC-NP 具有更好的功能性和靶向性,F(xiàn)ang 等[39]將兩種配體即葉酸( 相對(duì)分子質(zhì)量約 441) 和核仁素配體 AS1411( Mr約9 000) 以磷脂分子為連接劑對(duì)紅細(xì)胞膜進(jìn)行修飾。

       

      結(jié)果顯示葉酸修飾的 RBC-NP 在 KB 細(xì)胞中攝取量提高了 8 倍,AS1411 修飾的 RBC-NP 在 MCF-7細(xì)胞中攝取量提高了 2 倍。此外,采用這種脂質(zhì)植入的修飾方式避免了普通化學(xué)修飾造成的膜蛋白變性、功能損害等問(wèn)題。受到 RBC-NP 啟發(fā),F(xiàn)ang等[40]采用腫瘤細(xì)胞膜包裹納米粒制成新型腫瘤靶向載體( CC-NP) ,通過(guò)細(xì)胞-細(xì)胞之間的相互作用,CC-NP 在腫瘤細(xì)胞的攝取量可達(dá) PLGA 納米粒的20 倍。

       

      本課題組目前基于 RBC-NP 展開(kāi)小干擾 RNA( siRNA) 的主動(dòng)靶向輸送研究。siRNA 類(lèi)藥物存在快速降解的風(fēng)險(xiǎn)[41],在前期篩選獲得高效、低毒氨酯類(lèi)聚乙烯亞胺衍生物( PEI-Et) 材料的工作基礎(chǔ)上,將 PEI-Et 復(fù)合 siRNA,得到穩(wěn)定的載體核心納米粒( PEP)[42-43]; 將半乳糖修飾的紅細(xì)胞膜包裹 PEP 作為新型輸送系統(tǒng)( Gal-RBC-PEP NPs) ,實(shí)現(xiàn) siRNA 的穩(wěn)定包封。本課題組將考察該系統(tǒng)輸送 siRNA 的長(zhǎng)效、靶向、安全性,以此探索構(gòu)建具有長(zhǎng)效、主動(dòng)靶向功能的新型紅細(xì)胞膜類(lèi) siRNA輸送載體。

       

      4. 2 紅細(xì)胞膜納米海綿

       

      RBC-NP 的紅細(xì)胞膜可捕獲體內(nèi)毒素并使其被清除掉,從而對(duì)抗細(xì)菌感染,這種本身可吸收細(xì)菌毒素的特性 RBC-NP 被稱(chēng)作紅細(xì)胞膜納米海綿。

       

      4. 2. 1 作為解毒劑 Hu 等[44]通過(guò)研究發(fā)現(xiàn),PL-GA 為內(nèi)核的納米海綿,可特定吸收成孔毒素類(lèi)( PFTs) ,顯著降低其毒性。在注射納米海綿的情況下再給予小鼠致死劑量的 α-毒素,小鼠存活率可達(dá) 80% ( 存活時(shí)間超過(guò) 360 h) .通過(guò)與 PEG-PLGA NP、PEG-Lipid NP、納米紅細(xì)胞小體的試驗(yàn)對(duì)比,證實(shí) PLGA 納米粒內(nèi)核與紅細(xì)胞膜對(duì)于吸收PFTs 缺一不可。PFTs 普遍具有細(xì)胞膜穿孔能力,納米海綿的紅細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)可作為該毒素作用底物吸引 PFTs 嵌入膜內(nèi),但在納米粒的穩(wěn)定作用下不發(fā)生溶血,且能在體內(nèi)長(zhǎng)時(shí)間循環(huán)繼續(xù)吸收毒素,如此納米海綿可將絕大部分毒素帶離其靶細(xì)胞。當(dāng)被巨噬細(xì)胞吞噬后,納米海綿也可增強(qiáng)溶酶體對(duì)毒素蛋白的消化作用,最終可通過(guò)肝臟安全代謝。

       

      研究者緊接著進(jìn)行了鏈球菌及蜂毒肽等其他 PFTs解毒試驗(yàn),結(jié)果均可顯著減輕毒素對(duì)動(dòng)物的傷害,說(shuō)明紅細(xì)胞膜納米海綿的抗菌解毒作用具有普適性,可應(yīng)用于各種 PFTs 的解毒治療,克服了普通解毒治療中不同的病毒必須采用不同解毒藥物的缺點(diǎn)。

       

      4. 2. 2 治療免疫系統(tǒng)疾病 納米海綿在治療Ⅱ型超敏反應(yīng)類(lèi)疾病方面也有了新的研究進(jìn)展。抗體誘導(dǎo)型貧血癥的致病機(jī)制是患者體內(nèi)產(chǎn)生了可與自體紅細(xì)胞膜表面抗原結(jié)合的病理性抗體,正常的紅細(xì)胞與之結(jié)合后被吞噬細(xì)胞吞噬而導(dǎo)致貧血。

       

      4. 2. 3 作為抗毒疫苗 除了用納米海綿直接進(jìn)行解毒治療外,也可將抗原蛋白嵌入納米海綿的紅細(xì)胞膜中制成抗毒素疫苗。Hu 等[45]將 PFTs 嵌入納米海綿的膜上,PFTs 在納米海綿的限制下不會(huì)對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生毒性,且仍能保持原有結(jié)構(gòu)形態(tài),通過(guò)皮下注射后隨淋巴循環(huán)可被有效運(yùn)輸?shù)矫庖呦到y(tǒng)。

       

      被漿細(xì)胞吞噬后,能產(chǎn)生大量與毒素特異性結(jié)合的IgG.與通過(guò)加熱或化學(xué)手段滅活的疫苗相比,這種疫苗產(chǎn)生的抗體數(shù)量更多,親和力更強(qiáng),且不會(huì)引發(fā)其他針對(duì)輸藥載體的免疫并發(fā)癥。在體內(nèi)循環(huán)過(guò)程中,對(duì)正常細(xì)胞亦沒(méi)有危害。

       

      Copp 等[46]的最新研究發(fā)現(xiàn),納米海綿膜上的相應(yīng)抗原能夠保持裸露并與該病理性抗體特異性結(jié)合,可作為誘餌大量中和病理性抗體,然后經(jīng)吞噬細(xì)胞作用將其清除,最終使病理性抗體不能與正常紅細(xì)胞結(jié)合,從而大大緩解自身免疫性溶血反應(yīng)或藥物誘導(dǎo)的貧血癥。納米海綿可吸收各型病理性抗體,這為解決免疫疾病治療中藥物不能普遍適用的問(wèn)題[47]提供了思路。

       

      5 展 望

       

      紅細(xì)胞載藥體系具有極高的生物相容性和可降解性,在延長(zhǎng)體內(nèi)循環(huán)時(shí)間、提高靶向性和穩(wěn)定性、提高藥物效果等方面也具有其他傳統(tǒng)藥物載體不可比擬的優(yōu)勢(shì) [48-49].相比于單純的紅細(xì)胞載藥,復(fù)合型紅細(xì)胞膜載藥體系可實(shí)現(xiàn)更多的功能( 靶向性等)[39].目前,已有紅細(xì)胞載體進(jìn)入臨床試驗(yàn)階段[29].其中,地塞米松紅細(xì)胞載體治療潰瘍性結(jié)腸炎已完成臨床Ⅱ期試驗(yàn); L-天門(mén)冬酰胺酶紅細(xì)胞載體治療急性淋巴細(xì)胞白血病復(fù)發(fā)正在進(jìn)行臨床Ⅲ期試驗(yàn)。

       

      但對(duì)于大規(guī)模生產(chǎn)和使用,紅細(xì)胞藥物載體的來(lái)源和儲(chǔ)存仍是阻礙其應(yīng)用的主要問(wèn)題。與其他藥物載體相比,紅細(xì)胞源于生物體,不同來(lái)源的載體本身就具有較大的差異性,且制備過(guò)程缺少統(tǒng)一控制標(biāo)準(zhǔn)。在紅細(xì)胞的提取和載藥過(guò)程中如何減少污染、降低對(duì)膜功能的損害,如何儲(chǔ)存紅細(xì)胞載體并保持其生物活性等,都是亟待解決的問(wèn)題。對(duì)于新型 RBC-NP 的研究才剛起步,接下來(lái)應(yīng)進(jìn)一步探明紅細(xì)胞膜與不同納米粒內(nèi)核的作用機(jī)制和原理,研究如何將較大粒徑的納米粒包裹入紅細(xì)胞膜內(nèi)且盡量減少對(duì)紅細(xì)胞膜的損害。紅細(xì)胞膜納米海綿在抗菌解毒治療上將有著極為廣闊的發(fā)展前景,在其他臨床應(yīng)用方面也存在一定潛力,值得深入研究。最后,基于紅細(xì)胞的載藥體系還需通過(guò)各種科學(xué)優(yōu)化,進(jìn)一步提高藥物的包封率、靶向性和控釋性。隨著相關(guān)研究不斷深入,相信在不遠(yuǎn)的將來(lái)就會(huì)掀起一場(chǎng)臨床藥物載體的新變革。

       

      參 考 文 獻(xiàn)

       

      [1] Alabi CA,Love KT,Sahay G,et al. Multiparametric approach forthe evaluation of lipid nanoparticles for siRNA delivery[J]. ProcNatl Acad Sci U S A,2013,110( 32) : 12881 - 12886.

       

      [2] Bhateria M,Rachumallu R,Singh R,et al. Erythrocytes-basedsynthetic delivery systems: transition from conventional to novelengineering strategies[J]. Expert Opin Drug Deliv,2014,11( 8) :1219 - 1236.

       

      [3] Yoo JW,Irvine DJ,Discher DE,et al. Bio-inspired,bioengineeredand biomimetic drug delivery carriers[J]. Nat Rev Drug Discov,2011,710( 7) : 521 - 535.

      細(xì)胞膜范文第2篇

      “細(xì)胞膜――系統(tǒng)的邊界”是人教版必修1第3章第1節(jié)的內(nèi)容,是在學(xué)習(xí)了細(xì)胞的多樣性和統(tǒng)一性以及組成細(xì)胞的化合物之后,開(kāi)始對(duì)細(xì)胞的基本結(jié)構(gòu)進(jìn)行學(xué)習(xí),主要介紹細(xì)胞膜的成分和功能,是細(xì)胞結(jié)構(gòu)不可分割的一部分,同時(shí)為后面第4章的進(jìn)一步學(xué)習(xí)奠定基礎(chǔ),起到承上啟下的作用.

      二、學(xué)情分析

      學(xué)生在前兩章已學(xué)過(guò)組成細(xì)胞的化合物以及初中學(xué)過(guò)有關(guān)細(xì)胞的基礎(chǔ)知識(shí),這些都是學(xué)習(xí)本節(jié)知識(shí)的基礎(chǔ).另外高中生非常喜歡動(dòng)手做實(shí)驗(yàn),通過(guò)實(shí)驗(yàn)來(lái)調(diào)動(dòng)學(xué)生的積極性和參與度.同時(shí)為了滿足高中生的表現(xiàn)欲望和維持學(xué)習(xí)熱情,本節(jié)課運(yùn)用“活動(dòng)單導(dǎo)學(xué)”模式,并建立小組評(píng)價(jià)激勵(lì)機(jī)制.

      三、教學(xué)目標(biāo)

      1.知識(shí)目標(biāo):簡(jiǎn)述細(xì)胞膜的成分和功能;體驗(yàn)制備細(xì)胞膜的方法.

      2.能力目標(biāo):培養(yǎng)學(xué)生動(dòng)手實(shí)驗(yàn)、觀察分析的能力;小組合作學(xué)習(xí)的能力.

      3.情感態(tài)度與價(jià)值觀目標(biāo) 認(rèn)同細(xì)胞膜作為系統(tǒng)的邊界,對(duì)于細(xì)胞這個(gè)生命系統(tǒng)的重要意義;培養(yǎng)學(xué)生合作意識(shí)和團(tuán)隊(duì)精神.

      4.教學(xué)重難點(diǎn)

      細(xì)胞膜的成分和功能;細(xì)胞膜對(duì)于細(xì)胞這個(gè)生命系統(tǒng)的重要意義.

      5.教學(xué)準(zhǔn)備

      課前準(zhǔn)備:PPT教學(xué)課件、實(shí)驗(yàn)視頻、活動(dòng)單、實(shí)物投影儀、組牌(搶答器)、大拇指貼畫(huà)、小組點(diǎn)贊積分榜、相關(guān)實(shí)驗(yàn)器材等.

      六、教學(xué)過(guò)程

      1.新課導(dǎo)入

      師:今天很高興能有機(jī)會(huì)和大家一起學(xué)習(xí),初次見(jiàn)面,老師特地為大家準(zhǔn)備了好多驚喜,其中含有一部分獎(jiǎng)品,用于獎(jiǎng)勵(lì)今天表現(xiàn)好的個(gè)人和小組(老師手指著積分榜),想不想贏得獎(jiǎng)品?

      生:想(齊聲喊)

      師:想要就一起來(lái)為自己加加油吧!(師生一起高喊“加油”,同時(shí)做出加油的手勢(shì))

      設(shè)計(jì)意圖:由于借班上課,師生之間顯得較陌生,所以通過(guò)師生互動(dòng),營(yíng)造課堂氛圍、緩和學(xué)生的緊張情緒,從而在最短的時(shí)間內(nèi)縮短師生間的心理距離.同時(shí)滲透小組評(píng)價(jià)機(jī)制,調(diào)動(dòng)學(xué)生的熱情度和參與度,為接下來(lái)的學(xué)生活動(dòng)做熱身.

      2.演示實(shí)驗(yàn),感知細(xì)胞膜的存在

      師:請(qǐng)看老師準(zhǔn)備的第一件物品(將一個(gè)放有雞蛋的玻璃容器置于實(shí)物投影儀下)

      生:……(雞蛋)

      老師將雞蛋殼打開(kāi),把內(nèi)容物倒入玻璃容器內(nèi)并呈現(xiàn)在大屏幕上,讓學(xué)生觀察現(xiàn)象.

      師:請(qǐng)哪個(gè)小組描述一下你們看到的現(xiàn)象?

      生:(主動(dòng)站起回答)……其中蛋清和蛋黃之間的界限非常清晰,涇渭分明.

      師:觀察很仔細(xì),老師為你的勇敢和精彩回答點(diǎn)贊.(老師豎起大拇指同時(shí)在該小組對(duì)應(yīng)欄貼上一張大拇指貼畫(huà))

      師:為什么蛋清和蛋黃能如此分布?我們繼續(xù)來(lái)探究.

      老師用牙簽扎進(jìn)蛋清中并輕輕挑起,讓學(xué)生觀察;然后老師將蛋清與蛋黃分離開(kāi),讓容器中只剩蛋黃,觀察現(xiàn)象.接著老師用食指輕輕觸摸完整的蛋黃表面,并邀請(qǐng)部分學(xué)生來(lái)觸摸蛋黃,感受其存在和它的彈性.最后老師用牙簽扎進(jìn)蛋黃中并劃開(kāi)一道口子,瞬間黃色的漿液迅速流淌出來(lái).此時(shí)所有學(xué)生齊聲:哇……

      師:實(shí)際上,蛋清和蛋黃被一層膜分隔開(kāi),這層膜就是卵細(xì)胞膜,卵細(xì)胞膜成為這個(gè)系統(tǒng)的邊界.

      設(shè)計(jì)意圖:讓學(xué)生親身從宏觀上感受細(xì)胞膜的存在,從而激發(fā)其對(duì)細(xì)胞膜微觀知識(shí)學(xué)習(xí)的欲望.通過(guò)對(duì)主動(dòng)回答問(wèn)題的同學(xué)進(jìn)行激勵(lì),點(diǎn)燃了全體學(xué)生主動(dòng)參與的熱情.同時(shí)明確本堂課的學(xué)習(xí)內(nèi)容,起到點(diǎn)題的效果.

      3.活動(dòng)一體驗(yàn)制備細(xì)胞膜的方法

      師:剛才我們已經(jīng)真真切切地感受到細(xì)胞膜的存在和破裂,但沒(méi)有真正地將細(xì)胞膜提取出來(lái).如果要提取,就要做實(shí)驗(yàn),實(shí)驗(yàn)?zāi)芊癯晒ΓP(guān)鍵在于選材和方法.請(qǐng)同學(xué)們按照要求嘗試到活動(dòng)一中尋找答案.

      活動(dòng)一活動(dòng)要求:自主學(xué)習(xí)(獨(dú)立完成下列內(nèi)容)――合作探究(小組內(nèi)合作解決遇到的問(wèn)題)――展示交流(在黑板展示合作學(xué)習(xí)的成果或存在的問(wèn)題)

      1.仔細(xì)對(duì)比下列三種材料,小組討論得出哪一種細(xì)胞比較適合提取較純凈的細(xì)胞膜?并嘗試寫(xiě)出你選擇的理由.

      2.根據(jù)下列圖形信息,你認(rèn)為獲取細(xì)胞膜的方法是[CD#3].

      [TP9GH18.TIF,BP#][HJ1.2mm]

      師生共同對(duì)各小組的成果展示進(jìn)行點(diǎn)評(píng),并對(duì)答案正確的小組給予點(diǎn)贊.在找到好的實(shí)驗(yàn)材料和實(shí)驗(yàn)方法之后,大屏幕播放制備細(xì)胞膜的實(shí)驗(yàn)視頻.

      設(shè)計(jì)意圖:設(shè)置問(wèn)題情境,激發(fā)學(xué)生探究的熱情,并養(yǎng)成獨(dú)立思考、自主答疑的習(xí)慣.小組合作,鍛煉了學(xué)生大膽交流、表達(dá)的能力,又強(qiáng)化了學(xué)生的合作意識(shí)與團(tuán)隊(duì)精神.借助視頻讓學(xué)生不僅進(jìn)一步感受細(xì)胞膜的存在,而且掌握一套提取細(xì)胞膜的方法,進(jìn)而激起學(xué)生的好奇心――提取到的細(xì)胞膜的成分是什么?

      4.活動(dòng)二了解細(xì)胞膜的成分

      活動(dòng)二要求同上

      根據(jù)下面提供的資料,判斷細(xì)胞膜的成分.

      資料1:科學(xué)家在實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn):凡是易溶于脂質(zhì)的物質(zhì),也容易優(yōu)先通過(guò)細(xì)胞膜,反之,不容易溶于脂質(zhì)的物質(zhì),也不容易通過(guò)細(xì)胞膜.

      資料2:科學(xué)家對(duì)細(xì)胞膜化學(xué)成分深層分析發(fā)現(xiàn),細(xì)胞膜會(huì)被蛋白酶分解.(提示:蛋白酶是只對(duì)蛋白質(zhì)分解起催化作用的物質(zhì)).

      (1)資料1說(shuō)明細(xì)胞膜中含有[CD#3];

      (2)資料2說(shuō)明細(xì)胞膜中含有[CD#3];

      資料3:研究發(fā)現(xiàn),細(xì)胞膜中除了上述物質(zhì)外,還有少量的糖類(lèi)(約占2%~10%),而資料1中所指的成分約占50%,資料2中所指的成分約占40%,請(qǐng)根據(jù)以上信息用柱形圖的形式呈現(xiàn)細(xì)胞膜中各成分的比例.

      資料4:幾種常見(jiàn)細(xì)胞的細(xì)胞膜成分及含量比較(其中心肌細(xì)胞膜的功能最復(fù)雜)

      [HT6][BG(!]

      [BHDFG2,WK5,K6,K6,K6W]

      成分[]紅細(xì)胞膜[]肝細(xì)胞膜[]心肌細(xì)胞膜

      [BHD]磷脂[]55%[]40%[]24%

      [BH]蛋白質(zhì)[]約40%[]約59%[]75%

      [BH]糖類(lèi)[]5%[]微量[]微量[BG)F]

      上述表格中的數(shù)據(jù)表明,細(xì)胞膜的功能越復(fù)雜,[CD#3]的種類(lèi)和含量越多.

      師生共同對(duì)各小組的成果展示進(jìn)行點(diǎn)評(píng),并對(duì)答案正確的小組給予點(diǎn)贊.

      設(shè)計(jì)意圖:培養(yǎng)學(xué)生閱讀材料、分析推理、繪圖解題的能力.通過(guò)繪制直觀的圖表既讓學(xué)生強(qiáng)化了知識(shí)點(diǎn)的理解,又進(jìn)一步豐富了學(xué)生的感性認(rèn)識(shí).并通過(guò)資料4水到渠成地過(guò)渡到細(xì)胞膜的功能.

      5.活動(dòng)三理解細(xì)胞膜的功能

      先進(jìn)行學(xué)生分組實(shí)驗(yàn),再完成活動(dòng)三的第一部分內(nèi)容

      實(shí)驗(yàn)一:(每小組的一半同學(xué)做實(shí)驗(yàn)一)

      1.從所給材料中取一定數(shù)量煮熟的玉米粒,用小刀沿種子胚的中心線縱切開(kāi),放入標(biāo)有“熟”字的小燒杯中;取等量的生玉米粒,用同樣方法切開(kāi)后放入標(biāo)有“生”字的小燒杯中.

      2.向標(biāo)有“生”“熟”的小燒杯中加入等量的紅墨水.

      3. 2 min后用鑷子輕輕捏起玉米粒放入盛有清水的大燒杯中,洗去表面的紅墨水,再用吸水紙將玉米粒擦干.

      4. 觀察并比較兩組玉米粒切面的顏色變化情況.

      實(shí)驗(yàn)二:(每小組的另外一半同學(xué)做實(shí)驗(yàn)二)

      1.將紫甘藍(lán)葉片撕成一定大?。孕∮诒酌娣e)的小塊,分成2等份,分別放于兩個(gè)燒杯中.

      2.向兩個(gè)燒杯中分別加入等體積的冷水和沸水.

      3.一段時(shí)間后,觀察并比較兩個(gè)燒杯中水的顏色變化情況.

      活動(dòng)三要求同上

      第一部分根據(jù)教師演示實(shí)驗(yàn)和學(xué)生分組實(shí)驗(yàn),完善細(xì)胞膜的功能一和二:

      功能一:演示實(shí)驗(yàn)中卵細(xì)胞膜能將蛋黃和外面的蛋清明顯分開(kāi),這說(shuō)明細(xì)胞膜能夠?qū)⒓?xì)胞與外界環(huán)境[CD#3].

      功能二:

      1.實(shí)驗(yàn)一可得出細(xì)胞膜能控制物質(zhì)[CD#3](填“進(jìn)”或“出”)細(xì)胞;

      2.實(shí)驗(yàn)二可得出細(xì)胞膜能控制物質(zhì)[CD#3](填“進(jìn)”或“出”)細(xì)胞.

      3.綜上所述,細(xì)胞膜能[CD#3].

      師:在當(dāng)今人類(lèi)社會(huì)中,人與人之間的溝通交流顯得格外重要,你們都知道有哪些人與人交流的方式?

      生:……

      師:大家所講的方式中常見(jiàn)的有這3種:寄信、面對(duì)面交流、打電話(QQ、微信等等).而在微觀世界中的細(xì)胞也有類(lèi)似的信息交流方式,那就請(qǐng)大家?guī)兔⑺鼈儗?duì)號(hào)入座.

      第二部分連連看

      [TP9GH20.TIF,BP#]

      功能三:根據(jù)以上圖示可以得出細(xì)胞膜能進(jìn)行[CD#3]

      設(shè)計(jì)意圖:讓學(xué)生在親自操作實(shí)驗(yàn)中體會(huì)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的兩大基本原則,再利用直觀的實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象,豐富學(xué)生的感性認(rèn)識(shí),從而有效地突出重點(diǎn)、突破難點(diǎn).利用學(xué)生熟悉的“生活化”資源,[JP3]幫助學(xué)生拓展思維空間,變抽象為形象,進(jìn)而化解教材中的難點(diǎn).[JP]

      6.活動(dòng)反饋――“我說(shuō)你猜”游戲

      大屏幕顯示游戲規(guī)則:

      每小組選擇一名代表作為搶答者,手拿組牌“搶答器”面朝大家站到前面的講臺(tái)前.

      其余同學(xué)作為表演者或觀眾,坐在原位,除表演者以外的所有人不得發(fā)出任何聲音或提示.

      表演者要求:看到題板上的詞語(yǔ)后自己主動(dòng)站起,速度最快者描述.描述時(shí)可用手勢(shì)等肢體語(yǔ)言或用與本堂課生物學(xué)知識(shí)有關(guān)的語(yǔ)言描述出現(xiàn)的詞語(yǔ),但描述的語(yǔ)言中不能有該詞語(yǔ)或其中的字,若有則為失敗.

      搶答者要求:搶答以舉牌示意的先后為準(zhǔn),最快者報(bào)出自己認(rèn)為的答案.若回答錯(cuò)誤則只失去本題的答題機(jī)會(huì),由其他選手繼續(xù)搶答;若回答正確則該小組獲得點(diǎn)贊,結(jié)束本題,進(jìn)入下一題.

      在了解游戲規(guī)則之后,讓所有的搶答者按要求站好(保持一定的間距,以免舉牌時(shí)誤傷到相鄰的人).為集中搶答者的注意力和適應(yīng)比賽節(jié)奏,老師特地安排一個(gè)“測(cè)試搶答器靈敏度”環(huán)節(jié)――當(dāng)老師發(fā)出“開(kāi)始搶答”的信號(hào)后,所有的搶答者齊刷刷地舉起“搶答器”.接著老師宣布“游戲正式開(kāi)始”,題板上依次出現(xiàn)與本堂課有關(guān)的詞語(yǔ),如:紅細(xì)胞、脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、信息交流、糖類(lèi)、細(xì)胞膜等等.老師在每一題完成后分別對(duì)成功的表演者和搶答者進(jìn)行點(diǎn)贊,然后將題板上這一頁(yè)撕掉,揭曉下一題.

      設(shè)計(jì)意圖:以游戲的形式重現(xiàn)本堂課的核心知識(shí)點(diǎn),激發(fā)起學(xué)生的熱情,掀起了課堂的.既讓學(xué)生在輕松愉快的游戲中鞏固消化知識(shí),也是對(duì)本堂課學(xué)習(xí)效果的診斷和反饋.

      7.結(jié)課環(huán)節(jié)

      師:最后讓我們用一首詩(shī)來(lái)結(jié)束本堂課的學(xué)習(xí)內(nèi)容吧.請(qǐng)同學(xué)們有感情地齊聲朗誦這首贊美細(xì)胞膜的詩(shī),真切地感受細(xì)胞膜的功能.

      是誰(shuí),隔開(kāi)了原始海洋的動(dòng)蕩.是誰(shuí),奏鳴了生命的交響.

      是誰(shuí),為我日夜守邊防.是誰(shuí),為我傳信報(bào)安康.

      啊,偉大的細(xì)胞膜呀!沒(méi)有你,我會(huì)是何等模樣!

      設(shè)計(jì)意圖:學(xué)生氣勢(shì)磅礴的朗誦,營(yíng)造出一個(gè)“余音繞梁”、“言有盡而意無(wú)窮”的結(jié)課,給教學(xué)活動(dòng)一個(gè)圓滿的結(jié)局.

      [BP(]8.課堂評(píng)價(jià)激勵(lì)

      師生共同統(tǒng)計(jì)各小組的點(diǎn)贊數(shù),對(duì)點(diǎn)贊數(shù)前3名的小組成員分別獎(jiǎng)勵(lì)不等的獎(jiǎng)品.同時(shí),老師建議所有的同學(xué)都豎起大拇指為自己的出色表現(xiàn)點(diǎn)贊.

      設(shè)計(jì)意圖:評(píng)價(jià)激勵(lì)機(jī)制有助于提高學(xué)生展示的積極性,同時(shí)滿足學(xué)生的成就感和集體榮譽(yù)感,為下節(jié)課的學(xué)習(xí)注入了興奮劑.[BP)]

      細(xì)胞膜范文第3篇

      1、磷脂分子中脂肪酸鏈的不飽和程度:飽和脂肪酸鏈呈直線形,鏈間排列緊密,相互作用大,膜的流動(dòng)性小。而不飽和脂肪酸鏈呈彎曲形,使磷脂分子中兩條脂肪碳鏈尾部難以相互靠攏,彼此排列疏松,膜的流動(dòng)性大;

      2、卵磷脂與鞘磷脂在膜中含量的比例:鞘磷脂的粘度比卵磷脂大6倍,因此鞘磷脂含量高則流動(dòng)性低;

      3、膽固醇的影響:膽固醇在生理?xiàng)l件下可對(duì)細(xì)胞膜的流動(dòng)性進(jìn)行一定的調(diào)節(jié)。細(xì)胞膜要維持適當(dāng)?shù)牧鲃?dòng)性,還必需隨環(huán)境的溫度而波動(dòng),并通過(guò)代謝改變細(xì)胞膜中的脂類(lèi)組份來(lái)維持膜流動(dòng)性的相對(duì)恒定;

      4、脂肪酸鏈的鏈長(zhǎng):長(zhǎng)鏈脂肪酸相變溫度高,膜流動(dòng)性降低;

      細(xì)胞膜范文第4篇

      目的: 探討低濃度α?生育酚對(duì)神經(jīng)元細(xì)胞膜的保護(hù)作用. 方法: 培養(yǎng)SD胎鼠皮層神經(jīng)元細(xì)胞作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象. 將神經(jīng)元細(xì)胞進(jìn)行分組:正常對(duì)照組、氧自由基損傷組和不同濃度α?生育酚處理組(10,20,40和80 mg/L). 用Fenton反應(yīng)對(duì)神經(jīng)元細(xì)胞膜造成損傷. 在損傷后1及2 h分別對(duì)各組神經(jīng)元進(jìn)行PI染色,利用激光共聚焦顯微鏡觀察神經(jīng)元細(xì)胞膜的損傷情況,并用TBA法檢測(cè)神經(jīng)元細(xì)胞外液中丙二醛(MDA)生成量. 結(jié)果: 80 mg/L濃度α?生育酚可減少氧自由基對(duì)神經(jīng)元細(xì)胞膜的損傷, 且可減少M(fèi)DA生成量. 結(jié)論: 80 mg/L濃度α?生育酚可以有效對(duì)抗氧自由基對(duì)神經(jīng)元細(xì)胞膜的損傷.

      【關(guān)鍵詞】 α?生育酚 神經(jīng)元 細(xì)胞膜 低濃度

      0引言

      氧自由基是引起顱腦損傷等多種中樞神經(jīng)疾病繼發(fā)損傷的重要因素. 而維生素E是一種天然的抗氧自由基物質(zhì). 維生素E共包括8種分子,其中α?生育酚為公認(rèn)抗氧自由基最有效的[1]. 在近年的研究中,已證實(shí)α?生育酚可阻止氧自由基對(duì)細(xì)胞膜中多不飽和脂肪酸及膜蛋白的攻擊,防止細(xì)胞膜功能的喪失[2]. 然而國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)應(yīng)用多大濃度的α?生育酚才可有效保護(hù)細(xì)胞膜有很大分歧. 本實(shí)驗(yàn)我們利用Fenton反應(yīng)形成氧自由基對(duì)胚胎大鼠皮層神經(jīng)元的損傷,觀察低濃度α?生育酚對(duì)神經(jīng)元細(xì)胞膜的保護(hù)作用.

      1材料和方法

      1.1材料α?生育酚、碘化吡啶(PI)染料(Sigma公司,美國(guó));2.5 g/L胰蛋白酶、0.2 mol/L EDTA、各種細(xì)胞培養(yǎng)液(GibcoBRL公司,美國(guó));MDA檢測(cè)盒,購(gòu)于南京建成生物公司;300 mL/L雙氧水,硫酸亞鐵,維生素C和無(wú)水乙醇,均為國(guó)產(chǎn)分析純. 孕14 d的SD大鼠2只,購(gòu)自中國(guó)人民軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心. TE200?E型激光共聚焦顯微鏡觀察( NIKON公司, 日本);TG?150型二氧化碳培養(yǎng)箱(Jouan公司,法國(guó));CR?22G型離心機(jī)(日立公司,日本);UV240型紫外分光光度計(jì)(島津公司,日本).

      1.2方法

      1.2.1α?生育酚水溶液配制取α?生育酚10 mg溶于1 mL無(wú)水乙醇中,將無(wú)水乙醇緩慢滴入49 mL 30℃去離子水中,制成200 mg/L α?生育酚水溶液母液備用. 碘化吡啶染料配制:將碘化吡啶粉末以去離子水溶解為終濃度為1 mg/L工作液.

      1.2.2SD大鼠皮層神經(jīng)元分離及培養(yǎng)將實(shí)驗(yàn)大鼠斷頸處死,取胚胎腦皮層組織,剪碎,用2.5 g/L胰蛋白酶和0.2 mmol/L EDTA,令其分散成單細(xì)胞懸液,過(guò)200目不銹鋼網(wǎng),于37℃, 50 mL/L CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng). 隔日換液. 培養(yǎng)到第4日,細(xì)胞懸液于離心機(jī)中以1000 r/min速度離心10 min,去沉淀細(xì)胞,加入神經(jīng)元培養(yǎng)液,接種于涂有鼠尾膠原的25 cm×25 cm細(xì)胞培養(yǎng)瓶中,使干細(xì)胞轉(zhuǎn)化為神經(jīng)元,隔天換藥一次,第6日使用.

      1.2.3實(shí)驗(yàn)分組將所有神經(jīng)元培養(yǎng)瓶進(jìn)行分組,共分為:正常對(duì)照組;氧自由基損傷組;不同濃度α?生育酚處理組(10, 20, 40和80 mg/L亞組,與神經(jīng)元作用1 h后備用).

      1.2.4利用Fenton反應(yīng)造成神經(jīng)元氧自由基損傷按照Yamazaki等[3]方法,在培養(yǎng)皿中加入硫酸亞鐵、維生素C和300 mL/L雙氧水,使溶液中硫酸亞鐵終濃度為0.2 mmol/L,維生素C終濃度為0.2 mmol/L,雙氧水終濃度為0.4 mmol/L,制作氧自由基損傷模型.

      1.2.5PI染色按照袁蘭等[4]方法,將PI粉末以去離子水溶解為終濃度1 mg/L工作液. 將氧自由基損傷組及α?生育酚處理組及正常組培養(yǎng)瓶中加入試劑后,立即開(kāi)始計(jì)時(shí),并取反應(yīng)開(kāi)始后1和2 h培養(yǎng)瓶中的神經(jīng)元進(jìn)行PI染色,將PI工作液100 μL均勻滴在神經(jīng)元細(xì)胞上,置于暗室中染色15 min,用pH 7.0 PBS液沖洗3遍.

      1.2.6激光共聚焦顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)激光共聚焦顯微鏡熒光激發(fā)波長(zhǎng)為567 nm,發(fā)射光波長(zhǎng)大于590 nm,偽彩色采用紅色,在保證信噪比的情況下盡量增大檢測(cè)的pinhole和PMT. 選定5個(gè)圖像清晰的視野,在200倍鏡下觀察. 細(xì)胞紅染者為細(xì)胞膜損傷細(xì)胞,未染色者為正常細(xì)胞[4]. 每個(gè)視野隨機(jī)計(jì)數(shù)100個(gè)神經(jīng)元,記錄其中有細(xì)胞膜損傷的神經(jīng)元數(shù),共記錄5個(gè)視野內(nèi)神經(jīng)元,計(jì)算平均值.

      1.2.7MDA測(cè)定采用MDA檢測(cè)盒,結(jié)合紫外分光光度計(jì),按照TBA法分別檢測(cè)各組神經(jīng)元培養(yǎng)瓶中溶液的MDA濃度. 每一次取0.1 mL溶液檢測(cè),每瓶測(cè)值為該瓶溶液的MDA濃度.

      統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:所有數(shù)據(jù)以x±s表示,多個(gè)樣本間均數(shù)比較用方差分析,用Student?Newman?Keuls(SNK)法進(jìn)行多組間兩兩比較. P<0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義.

      2結(jié)果

      2.1神經(jīng)元細(xì)胞膜損傷分析正常對(duì)照組只有極少熒光染色陽(yáng)性細(xì)胞,而損傷組和α?生育酚處理組均有熒光染色陽(yáng)性細(xì)胞(圖1,2). α?生育酚濃度為正常生理濃度10 mg/L時(shí),不能有效消除Fenton反應(yīng)所造成的氧自由基損傷. 而當(dāng)α?生育酚達(dá)到80 mg/L時(shí),細(xì)胞膜損傷的神經(jīng)元總數(shù)減少,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義.

      2.2MDA結(jié)果分析80 mg/L α?生育酚處理組MDA產(chǎn)生量低于單純氧自由基損傷組(表2),但仍高于正常對(duì)照組.表1碘化吡啶染色結(jié)果比較表2不同處理組的MDA值比較

      3討論

      氧自由基對(duì)于細(xì)胞膜有很多的損害[5],所以,抗氧自由基治療是減少顱腦損傷等病理狀況下神經(jīng)元損傷的重要手段.

      α?生育酚與氧自由基反應(yīng)后,生成α?生育醌,減少氧自由基與其他分子反應(yīng)[2]. α?生育酚為脂溶性,血漿濃度為5~10 mg/L. 在細(xì)胞膜中,維生素E與不飽和脂肪酸的比例為1∶1000,可以有效地消除正常生理狀況產(chǎn)生的氧自由基對(duì)細(xì)胞膜的損傷. 在病理情況下,氧自由基大量產(chǎn)生,5 min內(nèi)即可使血漿內(nèi)的α?生育酚濃度大幅下降,不能有效的對(duì)抗氧自由基的損傷[6]. 因此,早期補(bǔ)充α?生育酚減少氧自由基對(duì)細(xì)胞的損傷,成為人們較感興趣的治療策略.

      De Jesus Ferreira等[7]主張保護(hù)細(xì)胞膜的α?生育酚濃度應(yīng)達(dá)到1 g/L,才能有效對(duì)抗氧自由基的破壞作用. Sperling等[8] 甚至提出可用100 g/L濃度的α?生育酚進(jìn)行神經(jīng)元保護(hù)是可行的方案. 賈麗紅等[9]在對(duì)神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞試驗(yàn)中,認(rèn)為50 mg/L α?生育酚即可起到抗氧化的保護(hù)作用. 而國(guó)內(nèi)尚少有低濃度α?生育酚對(duì)神經(jīng)元保護(hù)作用的報(bào)道. 從本試驗(yàn)可以看出,正常血漿濃度8~10倍的α?生育酚即可產(chǎn)生較為明顯的神經(jīng)元細(xì)胞膜保護(hù)作用,細(xì)胞膜脂質(zhì)多不飽和脂肪酸氧化產(chǎn)物MDA也小于單純氧自由基損傷組. 而且,80 mg/L α?生育酚組在損傷后2 h存在細(xì)胞膜損傷的神經(jīng)元為(41.5±5.9)個(gè),少于損傷后1 h存在細(xì)胞膜損害的神經(jīng)元(66.0±7.3)個(gè). 這種現(xiàn)象是否意味著α?生育酚可促使損傷細(xì)胞膜發(fā)生自我修復(fù)改變,尚需深入研究. 低濃度α?生育酚的治療作用對(duì)于臨床應(yīng)用較有意義. 因?yàn)楝F(xiàn)今應(yīng)用α?生育酚進(jìn)行動(dòng)物試驗(yàn),多采用口服及腹腔注射兩種方法. 而生物體內(nèi)的α?生育酚主要存在于肝臟,不能自由穿過(guò)血腦屏障,所以這兩種方法均不能使腦組織中的α?生育酚濃度達(dá)到很高濃度. Naziroglu等[10]采用口服800 mg,僅能使血漿中α?生育酚達(dá)到21 mg/L,腹腔注射160 mg/kg α?生育酚后,血漿中α?生育酚可達(dá)到類(lèi)似結(jié)果. Cherdyntseva等[11]在研究中發(fā)現(xiàn),給與SD大鼠標(biāo)準(zhǔn)腹腔注射量α?生育酚(600 mg/kg)每天進(jìn)行腹腔注射,只能使血漿中α?生育酚濃度達(dá)到80 mg/L. 高濃度的α?生育酚在以往的實(shí)驗(yàn)中顯示可以使氧自由基對(duì)神經(jīng)元損傷減少到較低的程度[8-9]. 但在當(dāng)今條件下,臨床無(wú)法達(dá)到使腦組織和血漿中α?生育酚達(dá)到至1 g/L的水平,而且,如此高濃度的α?生育酚在腦組織中是否會(huì)引起不良反應(yīng)尚無(wú)定論. 相反,在顱腦損傷等情況下,血腦屏障受到損傷,則可很容易地使傷區(qū)腦組織中α?生育酚濃度達(dá)到接近80 mg/L的水平,從而達(dá)到治療目的. 這使臨床應(yīng)用α?生育酚治療顱腦損傷等神經(jīng)系統(tǒng)疾病成為可能.

      【參考文獻(xiàn)】

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      [9] 賈麗紅,劉莉等. VE拮抗氟對(duì)大鼠腦氧化損傷的實(shí)驗(yàn)觀察[J]. 中國(guó)地方病學(xué)雜志,2002,21(6):447-449.

      細(xì)胞膜范文第5篇

      【關(guān)鍵詞】 細(xì)胞膜 色譜 α腎上腺素受體

      ABSTRACT: Objective To compare the specificities of the cell membrane stationary phases (CMSP) with cell membrane chromatography (CMC). Methods Cell chromatographic columns were constructed for both rat aorta tissue cells and cultured rat aorta smooth muscle cells. Then the chromatographic affinities of ten ligands of αadrenergic receptor (αAR) with both said chromatographic columns were investigated. Capacity factors (k'), as a chromatographic parameter, were calculated. Results The correlation analysis showed a positive correlation between the rat aorta tissue CMSP and the cultured rat aorta smooth muscle cell CMSP, with correlation factor of r=0.923, P

      KEY WORDS: cell membrane; chromatography; αadrenergic receptor

      細(xì)胞膜色譜法 (cell membrane chromatography, CMC)是研究受體與藥物相互作用的新型親和色譜技術(shù),將高效液相色譜、細(xì)胞生物學(xué)與受體藥理學(xué)相結(jié)合,利用藥物與膜受體間存在的特異性親和力,成功地將藥物體內(nèi)的作用過(guò)程在色譜柱內(nèi)進(jìn)行動(dòng)態(tài)模擬[14]。CMC法與放射性配體結(jié)合法和受體功能分析方法的相關(guān)性研究證明,三種方法得到的配體及其異構(gòu)體對(duì)M、α、β受體親和力順序基本相同,并具有明顯的相關(guān)性[57]。為了研究組織器官和培養(yǎng)細(xì)胞制備的細(xì)胞膜固定相(cell membrane stationary phrase, CMSP)的異同,本次實(shí)驗(yàn)將CMC法與細(xì)胞生物學(xué)方法相結(jié)合,用大鼠主動(dòng)脈組織和其培養(yǎng)細(xì)胞CMC法研究了10種不同αAR激動(dòng)劑與拮抗劑的生物親和作用。比較了傳統(tǒng)的CMC法(CMSP為組織細(xì)胞膜)與改進(jìn)后的CMC法(CMSP為培養(yǎng)細(xì)胞)的特異性和相關(guān)性。建立了大鼠主動(dòng)脈平滑肌培養(yǎng)細(xì)胞的CMC模型。

      1 材料與方法

      1.1 藥品和試劑 羥甲唑啉(Oxymetazoline 296.84)、5甲基烏拉地爾(5methylurapidil, 5MU 401.5)購(gòu)自RBI公司;RS17053(449)購(gòu)自Roche Bioscience;去甲腎上腺素(Norepinephrine 319.3)、哌唑嗪(Prazosin 419.9)、酚妥拉明(Phentolamine 317.8)、苯腎上腺素(Phenylephrine 203.7)、甲氧明(Methoxamine 247.7)、育亨賓(Youhimbin 390.9)、BMY7378(458.4)購(gòu)自Sigma公司。DMEM干粉培養(yǎng)基(GIBCO公司)、小牛血清(杭州四季青公司)、胰蛋白酶(Sigma公司)、磷酸二氫鈉(NaH2PO4)、磷酸氫二鈉(Na2HPO4)、NaCl、鹽酸(HCL)、磷酸(H3PO4)、乙醇(C2H5OH)等均為國(guó)產(chǎn)分析純。

      1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SD大鼠3只,體重100-150g,雌雄不拘,年齡2-3個(gè)月。由西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

      1.3 儀器 Gilson高效液相色譜系統(tǒng),包括370泵、115型紫外檢測(cè)器、7725型手動(dòng)進(jìn)樣閥(美國(guó)Rheodyne公司)和Anastar色譜工作站(奧泰科技有限公司);HERMLE ZK410型低溫冷凍高速離心機(jī)(德國(guó));AS5150A超聲振蕩儀(Auto Science公司);PHS2D型酸度計(jì)(上海第二分析儀器廠);Shimadzu TB85型循環(huán)水浴(瑞士)。

      1.4 方法

      1.4.1 大鼠主動(dòng)脈組織細(xì)胞膜制備 取兩只SD大鼠,頸椎脫臼處死,迅速開(kāi)胸,取出主動(dòng)脈,置于冷的生理鹽水中,清洗數(shù)次,洗凈余血,用鋒利眼科剪除去主動(dòng)脈壁周?chē)闹炯敖Y(jié)締組織。將主動(dòng)脈在勻漿管中剪碎,加入10倍量冷生理鹽水,制備勻漿。制得的勻漿在400×g離心10min,棄去沉淀,上清液10000×g離心10min。沉淀再以生理鹽水反復(fù)洗滌離心,直至沉淀為均勻的乳白色,然后加入一定量的低滲液,超聲振蕩20min,12000×g離心10min,棄去上清液,沉淀即為所需主動(dòng)脈細(xì)胞膜。上述操作均在0-4℃下進(jìn)行。

      1.4.2 大鼠主動(dòng)脈組織色譜柱的制備 取經(jīng)活化處理的硅膠0.3g,作為細(xì)胞膜的載體置于低溫反應(yīng)管中,在抽真空和震蕩條件下,分別加入上述細(xì)胞膜懸液,反應(yīng)1h后,加入適量生理鹽水稀釋?zhuān)?5℃條件下,使細(xì)胞膜磷脂雙層自融合,直至在硅膠載體表面形成均勻的細(xì)胞膜。低速離心除去上清液,載體細(xì)胞膜用TrisHCL緩沖溶液洗滌,除去未結(jié)合的細(xì)胞膜。

      1.4.3 培養(yǎng)的大鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞膜的制備 大鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞原代培養(yǎng)[89]采用組織貼塊法。取SD大鼠,頸椎脫臼處死,在無(wú)菌環(huán)境中迅速剪取胸主動(dòng)脈,移入盛有無(wú)菌培養(yǎng)液的平皿中。用眼科剪子將動(dòng)脈縱行剖開(kāi),內(nèi)膜面向上,用眼科小彎鑷輕輕刮去內(nèi)皮細(xì)胞,用鐘表鑷細(xì)心撕下中膜的內(nèi)中層,使其成1mm×1mm左右的血管片,用滴管移入事先鋪好血清的培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),均勻種植。放入37℃ CO2培養(yǎng)箱中4-6h后將培養(yǎng)瓶翻轉(zhuǎn),加入4mL含20%(體積分?jǐn)?shù))小牛血清的DMEM培養(yǎng)液,使組織塊浸入培養(yǎng)液中,靜止5d。10d后可見(jiàn)細(xì)胞從植塊邊緣萌出。待20d左右細(xì)胞融合成片長(zhǎng)滿瓶底。用2.5g/L(0.25%)胰蛋白酶和0.2g/L(0.02%)EDTA混合消化液,按常規(guī)方法消化。終止消化后放入含少許小牛血清的離心管中離心(1000×g離心8min)。傾去上清液,添加適當(dāng)培養(yǎng)液吹打后分瓶,5d左右細(xì)胞長(zhǎng)滿瓶底,再次依法作傳代培養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)采用第3-5代血管平滑肌細(xì)胞。當(dāng)細(xì)胞覆蓋瓶底50%時(shí),可將細(xì)胞取出制膜。將消化好的細(xì)胞懸液在1000×g離心10min。棄去上清液,加入一定量的低滲液,超聲振蕩20min,400×g離心10min。棄去沉淀,上清液12000×g離心10min后,沉淀既為所需細(xì)胞膜。

      1.4.4 大鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞色譜柱的制備 大鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞色譜柱用上述的培養(yǎng)細(xì)胞的細(xì)胞膜制備(方法同1.4.2)。

      1.4.5 10種αAR配體在兩種CMSP上的親和力 色譜條件:柱溫為37℃,流速為0.5mL/min。用pH=7.4的50mmol/L磷酸鹽緩沖液作為流動(dòng)相,平衡3-4h后,將藥物分別添加到流動(dòng)相中進(jìn)樣分析(紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為220-280nm)。

      2 結(jié)果

      2.1 10種αAR配體在CMSP上的親和力 用50mmol/L磷酸鹽緩沖液分別平衡大鼠主動(dòng)脈組織及其培養(yǎng)平滑肌細(xì)胞膜色譜柱3-4h后,根據(jù)每種藥物的紫外檢測(cè)波長(zhǎng)測(cè)定結(jié)果進(jìn)樣分析。藥品均用三蒸水溶解,質(zhì)量濃度均為1g/L,每種藥物分別進(jìn)樣3次,取平均值后計(jì)算不同藥物在主動(dòng)脈組織CMSP上的容量因子k'(表1、表2)。

      表1 藥物在大鼠主動(dòng)脈組織CMSP上的色譜作用參數(shù)(略)

      Table 1 Chromatographic parameters of the drugs on rat aorta tissue cells CMSP column

      capacity factors were calculated from k'=(tR- t0)/ t0, where tR is retention time of ligands, t0 is retention time of solvent. CV=s/×100%; CMSP: cell membreme stationary phase; BMY7378: (8[2[4(2methoxyphenyl) 1piperazinyl] ethyl] 8azaspirol[4.5]decane7,9dione); RS17053: (N[2(2cyclopropylmethoxyphenoxy)ethyl] 5chloroα, αdimethyl1Hindole3ethanamine hydrochloride)

      表2 藥物在大鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞膜CMSP上的色譜作用參數(shù)(略)

      Table 2 Chromatographic parameters of the drugs on cultured rat aorta smooth muscle cells CMSP column

      Capacity factors were calculated from k'=(tR- t0)/t0, where tR is retention time of ligands, t0 is retention time of solvent. CV=s/×100%; CMSP: cell membreme stationary phase; BMY7378: (8[2[4(2methoxyphenyl) 1piperazinyl] ethyl] 8azaspirol[4.5]decane7,9dione); RS17053: (N[2(2cyclopropylmethoxyphenoxy)ethyl] 5chloroα,αdimethyl1Hindole3ethanamine hydrochloride)

      在實(shí)驗(yàn)所用不同的αAR激動(dòng)劑和拮抗劑中,酚妥拉明為非選擇性α受體拮抗劑;哌唑嗪為α1選擇性拮抗劑,對(duì)α2的作用很弱,親和力為α1的1/1000;5甲基烏拉地爾、RS17053為α1A受體選擇性拮抗劑;BMY7378為α1D受體選擇性拮抗劑;去甲腎上腺素為α受體激動(dòng)劑;甲氧明為α1受體激動(dòng)劑;苯腎上腺素為α1受體激動(dòng)劑;育亨賓為α2受體拮抗劑。由表1、表2可見(jiàn),藥物在大鼠主動(dòng)脈組織細(xì)胞CMSP上的保留時(shí)間由長(zhǎng)到短依次為:哌唑嗪、5MU、酚妥拉明、BMY7378、羥甲唑啉、RS17053、育亨賓、甲氧明、去甲腎上腺素、苯腎上腺素。容量因子分別為:5.673、4.183、2.841、2.696、2.544、2.260、1.943、1.331、1.068。用培養(yǎng)主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞制備的CMSP得到的αAR激動(dòng)劑和拮抗劑的親和力順序由大到小分別為:哌唑嗪、酚妥拉明、5MU、羥甲唑啉、BMY7378、育亨賓、甲氧明、苯腎上腺素、去甲腎上腺素、RS17053。容量因子分別為:20.037、9.865、8.758、7.390、5.793、4.304、1.187、0.876、0.669、0。

      2.2 藥物在兩種CMSP模型上的容量因子(k)相關(guān)性的比較 相關(guān)分析表明:藥物在大鼠主動(dòng)脈組織、培養(yǎng)大鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞CMSP上容量因子之間存在正相關(guān)關(guān)系,相關(guān)系數(shù)r為0.923,相關(guān)系數(shù)有極顯著性意義(P

      3 討論

      本次實(shí)驗(yàn)研究了αAR激動(dòng)劑和拮抗劑在大鼠主動(dòng)脈組織細(xì)胞和其培養(yǎng)細(xì)胞制備的CMSP上的親和力。建立了大鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞CMC模型。除了藥物RS17053在主動(dòng)脈組織上的親和力強(qiáng)于培養(yǎng)的主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞以外,其余藥物在這兩種CMSP上的總體趨勢(shì)是一致的。 培養(yǎng)的主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞是主動(dòng)脈血管的中膜部分,不僅純化了細(xì)胞,而且不含有內(nèi)皮細(xì)胞??赡苁荝S17053與主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞上多種受體的親和力較強(qiáng)。說(shuō)明用組織器官和培養(yǎng)細(xì)胞制備CMSP的方法結(jié)果是一致的,只是用培養(yǎng)的主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞制備細(xì)胞膜固定相后可以提高固定相上受體的純度和密度,延長(zhǎng)藥物在色譜柱上的保留時(shí)間。

      已有的研究表明大鼠主動(dòng)脈的主要功能α1AR屬于α1D亞型,而大鼠腎動(dòng)脈的主要功能α1AR屬于α1A亞型[1012]。韓啟德教授的課題組采用RNA酶保護(hù)分析與定量液相雜交方法顯示在大鼠主動(dòng)脈α1AR mRNA的水平盡管以α1D亞型最高(占57%),但α1A與α1B亞型同樣有mRNA的表達(dá)[13]。這個(gè)結(jié)論與我們用CMC法得出的實(shí)驗(yàn)結(jié)果相符:α1DAR、α1AAR高選擇性藥物在大鼠主動(dòng)脈組織色譜柱上均有保留,但親和力大小不同。

      最初認(rèn)為α2AR僅存在于阻力血管平滑肌而不存在于大血管,是根據(jù)在完整器官灌流條件下能顯示突觸后α2AR增加灌流壓的效應(yīng),而在離體血管標(biāo)本則測(cè)不到α2AR介導(dǎo)的縮血管效應(yīng)。隨著放射配體結(jié)合分析技術(shù)的產(chǎn)生與應(yīng)用,現(xiàn)在證實(shí)除阻力血管外,不少大血管平滑肌中確實(shí)存在功能性α2AR。本次實(shí)驗(yàn)選用α2AR高選擇藥物育亨賓,通過(guò)CMC法也證明了在主動(dòng)脈血管上存在α2AR。

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