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t淋巴細(xì)胞范文第1篇

【關(guān)鍵詞】AIDS;相關(guān)性;總淋巴細(xì)胞;分析

【中圖分類號(hào)】R46.62 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】B【文章編號(hào)】1005-0515(2011)08-0011-03

AIDS是由HIV引起的一組綜合征，HIV主要侵犯人CD4+ T淋巴細(xì)胞，導(dǎo)致其數(shù)量上的減少和功能缺陷，使機(jī)體免疫平衡被打破造成免疫功能低下，最終導(dǎo)致各種機(jī)會(huì)感染和腫瘤。因而，對(duì)HIV感染者和AIDS病人定期進(jìn)行CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞 檢測(cè)具有十分重要的意義。外周血CD4+T淋巴細(xì)胞數(shù)是監(jiān)測(cè)HIV+／AIDS患者病情進(jìn)展、確定抗病毒治療時(shí)機(jī)和療效評(píng)價(jià)的重要指標(biāo)。流式細(xì)胞術(shù)是檢測(cè)CD4+T細(xì)胞數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)方法，該方法所需儀器設(shè)備和試劑價(jià)格昂貴，對(duì)操作人員要求也較高，在醫(yī)療資源匱乏的地區(qū)和單位難以推廣應(yīng)用。因此，尋找一種可靠、經(jīng)濟(jì)、簡(jiǎn)便的常規(guī)檢測(cè)指標(biāo)來(lái)替代CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù)，對(duì)于HIV+／AIDS的防控有著重大實(shí)用價(jià)值。

1 材料與方法

1.1 材料來(lái)源:保山市疾病預(yù)防控制中心艾滋病、性病防治科病治療數(shù)據(jù)庫(kù)基本信息。

1.2 方法:

從上述資料作統(tǒng)計(jì)描述、相關(guān)性、試驗(yàn)的評(píng)價(jià)、ROC曲線等方面作統(tǒng)計(jì)分析研究。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:

統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS17.0分析軟件。

2 結(jié)果

2.1 對(duì)895例A1DS CD4+T淋巴細(xì)胞和總淋巴細(xì)胞的統(tǒng)計(jì)描述，CD4+T淋巴細(xì)胞均值134.18±102.48個(gè)/ul，直方圖見(jiàn)圖1，總淋巴細(xì)胞均值1818.96±3237.57個(gè)/ul，直方圖見(jiàn)圖2。

2.2 相關(guān)性分析

總樣本數(shù)（895）CD4+T淋巴細(xì)胞數(shù)與TLC的相關(guān)系數(shù)（r=0.487，P＜0.01）（Spearman相關(guān)）；TLC數(shù)值在區(qū)間（0，1200］時(shí)，相關(guān)系數(shù)為（r=0.421,P＜0.01）；TLC數(shù)值在區(qū)間（1200，1500］時(shí)，不存在相性（P＞0.05）；TLC數(shù)值在區(qū)間（1500，1800］時(shí)，不存在相性（P＞0.05）；TLC數(shù)值在區(qū)間（1800，7300］時(shí)，存在正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)為（r=0.092,P＜0.05）。

2.3 篩檢試驗(yàn)的評(píng)價(jià)

2.3.1 用TLC數(shù)值小于等于1200個(gè)/ul預(yù)測(cè)CD4+T淋巴細(xì)胞小于等于100個(gè)/ul，靈敏度為62.72%，特異度為82.53%，約登指數(shù)（正確指數(shù)）為0.45，符合率為73.74%，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為74.11%，陰性預(yù)測(cè)值為73.52%。陽(yáng)性可能性比值為3.59，陰性可能性比值為2.21。詳見(jiàn)表1。

2.3.2 用TLC數(shù)值小于等于1500個(gè)/ul預(yù)測(cè)CD4+T淋巴細(xì)胞小于等于200個(gè)/ul，靈敏度為64.15%，特異度為67.77%，約登指數(shù)為0.32，符合率為65.25%，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為81.93%，陰性預(yù)測(cè)值為45.34%。陽(yáng)性可能性比值為2.0，陰性可能性比值為1.9。詳見(jiàn)表2。

2.3.3 用TLC數(shù)值小于等于1800個(gè)/ul預(yù)測(cè)CD4+T淋巴細(xì)胞小于等于300個(gè)/ul，靈敏度為69.39%，特異度為51.02%，約登指數(shù)為0.21，符合率為68.38%，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為96.07%，陰性預(yù)測(cè)值為8.80%。陽(yáng)性可能性比值為1.42，陰性可能性比值為1.67。詳見(jiàn)表3。

2.4 ROC曲線:

TCL數(shù)值在區(qū)間（0，1200］，狀態(tài)變量值為15時(shí)，ROC曲線下面積最大，面積為0.671，95%置信區(qū)間為（0.476，0.865］；ROC曲線見(jiàn)圖3。TCL數(shù)值在區(qū)間（1200，1500］，狀態(tài)變量值為70時(shí)，ROC曲線下面積最大，面積為0.720，95%置信區(qū)間為（0.411，0.998］；ROC曲線見(jiàn)圖4。TCL數(shù)值在區(qū)間（1500，1800］，狀態(tài)變量值為100時(shí)，ROC曲線下面積最大，面積為0.874，95%置信區(qū)間為（0，1.0］。ROC曲線見(jiàn)圖5。

3 討論

T淋巴細(xì)胞是機(jī)體免疫系統(tǒng)內(nèi)功能最重要的一群細(xì)胞。在正常機(jī)體內(nèi)各淋巴細(xì)胞亞群相互作用，維持著機(jī)體正常免疫功能。當(dāng)不同淋巴細(xì)胞亞群的數(shù)量和功能發(fā)生異常時(shí)，可導(dǎo)致機(jī)體免疫功能紊亂并發(fā)生一系列病理變化。因此，T淋巴細(xì)胞亞群的免疫分型能夠提供有關(guān)患者免疫狀態(tài)的重要信息。通過(guò)對(duì)895例原始數(shù)據(jù)采用Spearman等級(jí)相關(guān)分析，得出總淋巴細(xì)胞與CD4之間在數(shù)值上呈正相關(guān)性（r=0.487，P＜0.01）。與有關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道相一致，張福杰等的研究也證實(shí)HIV+/AIDS患者的CD4+ T細(xì)胞計(jì)數(shù)與總淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)之間存在相關(guān)性(r=0．528，P

總淋巴細(xì)胞與CD4+T淋巴細(xì)胞之間有直線相關(guān),在條件艱苦，醫(yī)療資源匱乏的艾滋病高流行區(qū),可以用TLC預(yù)測(cè)CD+T淋巴細(xì)胞水平, 從評(píng)價(jià)結(jié)果看， TLC≤1200個(gè)／μl預(yù)測(cè)CD4≤100個(gè)／μl、TLC≤1500個(gè)／μl預(yù)測(cè)CD4≤200個(gè)／μl、TLC≤1800個(gè)／μl預(yù)測(cè)CD4≤300個(gè)／μl均有較高的靈敏度和特異度。

參考文獻(xiàn)

［1］ 張福杰, 郜桂菊, 趙紅心.HIV／AIDS患者中CD4細(xì)胞計(jì)數(shù)與總淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)間相關(guān)性研究［J］中國(guó)艾滋病性病, 2004,10(4):241-243.

［2］ 王又紅,何云,張建功.新蔡縣HIV/AIDS免疫功能狀況及治療相關(guān)性研究［J］.醫(yī)藥論壇雜志2005,21.

［3］ 朱榮華，李鳳德.2004-2007年HIV/AIDS病例分析［J］皮膚病與性病，2008.（2）：49

t淋巴細(xì)胞范文第2篇

【關(guān)鍵詞】重癥肌無(wú)力;Fas抗原;T淋巴細(xì)胞亞群;胸腺切除

The influences of thymectomy on the fas expression and T Cell subsets in peripheral blood lymphocyte from patients with myasthenia gravis

MAI Wei-hua,KOU Li,ZHOU Wen-ying,et al. Department of Neurology,Fifth Affiliated Hospital of Sun Yat-sen University,ZhuHai 519000,China

【Abstract】 Objective To investigate the influences of thymectomy on the Fas expression and T cell subsets in peripheral blood lymphocyte(PBL) from patients with myasthenia gravis(MG),so as to make sure whether Fas-mediated apoptosis is involved in the mechanism of thymectomy in MG therapy.Methods We analyzed CD4、CD8 and Fas expressions in PBL from 17 patients with MG and 13 healthy controls using flow cytometric analysis.Results The percentage of CD4-CD8+cells in PBL of MG patients without thymectomy was significant higher,while the percentage of CD4-CD8-cells was significant lower,compared with controls(P

【Key words】Myasthenia gravis;Fas antigen;T cell subsets;Thymectomy

DOI:10.3760/cma.j.issn 1673-8799.2010.06.16

作者單位:519000中山大學(xué)附屬第五醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科

重癥肌無(wú)力(myasthenia gravis.MG)是一種神經(jīng)-肌肉接頭傳遞功能障礙的獲得性自身免疫性疾病,主要累及突觸后膜上的乙酰膽堿受體(acetylcholine receptor,AchR),由抗乙酰膽堿受體抗體(AchRAb)介導(dǎo)。然而,MG確切的發(fā)病機(jī)制迄今尚未清楚。胸腺與MG的發(fā)病密切相關(guān)。10%~15%的MG患者伴有胸腺瘤,50%~60%伴有胸腺增生[1]。胸腺切除術(shù)治療MG可獲得良好療效[2]。Fas/CD95是一細(xì)胞表面分子,屬于腫瘤壞死因子家族成員。Fas通過(guò)與其配體FasL結(jié)合誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。Fas/FasL對(duì)于調(diào)節(jié)自身抗原反應(yīng)性T淋巴細(xì)胞的克隆清除,維持機(jī)體內(nèi)免疫功能狀態(tài)的穩(wěn)定,防止自身免疫性疾病的發(fā)生具有重要意義。關(guān)于Fas/FasL與MG的關(guān)系目前國(guó)內(nèi)外報(bào)道尚少。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)MG患者外周血淋巴細(xì)胞(peripheral blood lymphocyte,PBL)表面CD4、CD8及Fas的表達(dá),研究胸腺切除術(shù)對(duì)MG患者PBL中Fas表達(dá)及T淋巴細(xì)胞亞群的影響,探討胸腺切除術(shù)治療MG與Fas/FasL介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象 MG患者組17例,為2007年10月至2009年12月我院神經(jīng)內(nèi)科住院及門診患者,根據(jù)典型臨床表現(xiàn)、新斯的明試驗(yàn)及部分患者神經(jīng)重復(fù)電刺激檢查確診。其中男6例,女11 例,年齡22~76歲,平均(46.47±14.35)歲,病程8個(gè)月~20年,平均(6.43±5.15)年。Osserman分型:I型4例(23.5%),IIA型4例(23.5%),IIB型6例(35.3%),IV型3例(17.6%)。其中11例患者行胸腺切除術(shù)治療,術(shù)后病理:胸腺增生7例(63.6%),胸腺瘤2例(18.2%),胸腺脂肪瘤1例(9.1%),胸腺多房囊腫1例(9.1%)。所有患者均不伴有感染性疾病及其他免疫性疾病,采血前3個(gè)月內(nèi)未接受過(guò)免疫抑制劑治療。正常對(duì)照組13例,為健康自愿獻(xiàn)血者,男4例,女9例,平均年齡(40.23±11.05)歲。本研究得到中山大學(xué)附屬第五醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn),取得了受試對(duì)象的知情同意。

1.2 主要試劑 藻紅蛋白標(biāo)記小鼠抗人Fas/CD95單克隆抗體(Fas/CD95-PE)、多甲藻黃素葉綠素蛋白標(biāo)記小鼠抗人CD4單克隆抗體(CD4-PerCP)、異硫氰酸熒光素標(biāo)記小鼠抗人CD8單克隆抗體(CD8-FITC)、同種型熒光染色免疫球蛋白(小鼠抗人IgG1-PE、IgG1-PerCP、IgG1-FITC),均為美國(guó)Becton Dickinson公司產(chǎn)品,購(gòu)自廣州流式生物科技有限公司。

1.3 流式細(xì)胞術(shù)(Flow cytometry analysis) 取MG患者及對(duì)照組新鮮肝素鈉抗凝血100 ul,加入3種小鼠抗人熒光素標(biāo)記的單克隆抗體Fas/CD95-PE、CD4-PerCP、CD8-FITC各20 ul,混勻后室溫避光孵育15~20 min。加入100 ul溶血素(BD Bioscience,USA)混勻,室溫避光靜置10 min,離心10 min(1000 r//min)后去上清。PBS洗滌2次后,加入1%多聚甲醛適量固定細(xì)胞,避光放置10 min,以同種型熒光染色免疫球蛋白(小鼠抗人IgG1-PE,IgG1-PerCP,IgG1-FITC)作為陰性對(duì)照,用FACScan型流式細(xì)胞儀(Becton Dickinson,USA)進(jìn)行檢測(cè),使用Cell Quest軟件分析PBL表面CD4、CD8及Fas抗原的表達(dá)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 使用SPSS 16.0軟件。正態(tài)性檢驗(yàn)采用one sample Kolmogorov-Smirnov test,正態(tài)分布計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)描述,組間差異比較采用one-way ANOVA方差分析,多組均數(shù)比較采用SNK及LSD法,雙側(cè)檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。P

2 結(jié)果

2.1 MG患者與對(duì)照組PBL表面CD4、CD8分子的表達(dá) 與對(duì)照組相比,無(wú)行胸腺切除術(shù)組MG患者PBL中CD4-CD8+細(xì)胞比例升高,CD4-CD8-細(xì)胞比例下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.028及0.047);行胸腺切除術(shù)組CD4-CD8+細(xì)胞比例較無(wú)行胸腺切除術(shù)組下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.019)。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1

MG患者與對(duì)照組外周血淋巴細(xì)胞表面CD4、CD8分子的表達(dá)(x±s,%)

組別例數(shù)CD4+CD8-CD4-CD8+CD4+CD8+CD4-CD8-CD4+/CD8+

無(wú)行胸腺切除術(shù)MG患者630.372±6.49036.733±11.5840.392±0.19232.422±12.0930.928±0.421

行胸腺切除術(shù)MG患者1136.070±7.85325.248±7.6200.576±0.51238.108±7.1061.651±0.962

對(duì)照組1330.285±6.63526.311±8.9990.448±0.33342.957±11.5451.292±0.510

三組比較P值0.1200.044*0.5990.1250.137

F值2.3003.5090.5232.2462.143

兩兩比較P值 P10.1250.019*0.3630.2840.052

P20.9800.028*0.7740.047*0.302

P30.0560.7770.4330.2580.222

注:P1為無(wú)行胸腺切除術(shù)MG組與行胸腺切除術(shù)MG組比較P值;P2為無(wú)行胸腺切除術(shù)MG組與對(duì)照組比較P值;P3為行胸腺切除術(shù)MG組與對(duì)照組比較P值。*P

2.2 MG患者與對(duì)照組PBL表面Fas抗原的表達(dá) 無(wú)行胸腺切除術(shù)組MG患者PBL中Fas+、CD8+Fas+細(xì)胞比例以及行胸腺切除術(shù)組Fas+細(xì)胞比例均高于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2

MG患者與對(duì)照組外周血淋巴細(xì)胞表面Fas抗原的表達(dá)(x±s,%)

組別例數(shù)Fas+CD4+Fas+CD8+Fas+

無(wú)行胸腺切除術(shù)MG患者644.792±6.14566.163±12.45861.140±11.818

行胸腺切除術(shù)MG患者1139.962±8.12263.424±9.98751.776±9.840

對(duì)照組1331.219±12.99955.179±10.84945.590±11.497

三組比較P值0.026*0.0800.026*

F值4.1992.7724.167

兩兩比較P值 P10.3650.6230.104

P20.013*0.0500.008*

P30.048*0.0750.180

注:P1為無(wú)行胸腺切除術(shù)MG組與行胸腺切除術(shù)MG組比較P值;P2為無(wú)行胸腺切除術(shù)MG組與對(duì)照組比較P值;P3為行胸腺切除術(shù)MG組與對(duì)照組比較P值。*P

3 討論

Fas/FasL是介導(dǎo)細(xì)胞凋亡的主要途徑之一。許多自身免疫性疾病存在自身反應(yīng)性淋巴細(xì)胞清除障礙,尤其是外周,與Fas介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡缺陷有關(guān)[3]。MG屬于器官特異性自身免疫性疾病,胸腺與MG的發(fā)病密切相關(guān)。胸腺可能是MG患者自身免疫反應(yīng)的始動(dòng)及維持部位。胸腺切除術(shù)后,MG患者體內(nèi)抗AchR抗體滴度下降[4]。然而,胸腺切除術(shù)治療MG與Fas/FasL介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡的關(guān)系迄今尚未明確。

Masunaga等[5]報(bào)道Fas抗原及Fas mRNA在MG患者胸腺細(xì)胞中表達(dá)均下降。Utsugisawa等[6]則發(fā)現(xiàn)Fas mRNA在MG患者胸腺細(xì)胞中的表達(dá)不下降,反而升高。Moulian等[7]報(bào)道抗AChR抗體陽(yáng)性的MG患者Fas高表達(dá)的胸腺細(xì)胞比例升高。MG患者胸腺瘤中Fas的表達(dá)顯著高于正常胸腺組織[8]。另有報(bào)道MG患者CD4+CD8+胸腺細(xì)胞Fas表達(dá)降低,CD4-CD8+胸腺細(xì)胞Fas表達(dá)升高[9]。上述研究提示MG患者胸腺細(xì)胞存在Fas表達(dá)異常。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)研究胸腺切除術(shù)對(duì)MG患者PBL中Fas表達(dá)及T淋巴細(xì)胞亞群的影響,探討胸腺切除術(shù)治療MG與Fas/FasL介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡的關(guān)系。

關(guān)于MG患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群的研究目前結(jié)果不一,有報(bào)道MG患者外周血單個(gè)核細(xì)胞CD4+CD8-細(xì)胞比例下降[10];另有報(bào)道外周血CD8+T淋巴細(xì)胞百分率下降,CD4+/CD8+比值升高[11]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果示,無(wú)行胸腺切除術(shù)組MG患者PBL中CD4-CD8+細(xì)胞比例升高,CD4-CD8-細(xì)胞比例下降。與無(wú)行胸腺切除術(shù)組對(duì)比,行胸腺切除術(shù)組CD4-CD8+細(xì)胞比例下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;CD4+CD8+細(xì)胞比例及CD4+/CD8+比值升高,但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明MG患者存在外周血T淋巴細(xì)胞亞群分布異常,胸腺切除術(shù)對(duì)外周血T淋巴細(xì)胞亞群分布具有影響。

國(guó)內(nèi)有學(xué)者發(fā)現(xiàn)MG患者外周血單個(gè)核細(xì)胞中Fas+、CD4+Fas+細(xì)胞比例低于對(duì)照組,提示MG患者外周血淋巴細(xì)胞可能存在活化誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡障礙,活化的淋巴細(xì)胞不能通過(guò)Fas途徑凋亡,從而引起過(guò)強(qiáng)的免疫應(yīng)答,導(dǎo)致自身免疫性疾病的發(fā)生[10]。Moulian等[7]報(bào)道MG患者胸腺細(xì)胞Fas的高表達(dá)在外周未被中和,外周血淋巴細(xì)胞Fas的表達(dá)仍升高。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果示,無(wú)行胸腺切除術(shù)組MG患者PBL中Fas+及CD8+Fas+細(xì)胞比例高于對(duì)照組,行胸腺切除術(shù)組MG患者PBL中Fas+細(xì)胞比例高于對(duì)照組,與Moulian的報(bào)道一致。已有研究表明系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemic lupus erythematosus,SLE)患者外周血淋巴細(xì)胞Fas的表達(dá)升高,并認(rèn)為其反映了體內(nèi)T淋巴細(xì)胞的活化[12,13],因?yàn)镾LE患者外周血T淋巴細(xì)胞活化標(biāo)記物CD25[14]、MHC-II分子[15]的表達(dá)增加,且幼稚T淋巴細(xì)胞在體外經(jīng)促有絲分裂刺激后可誘導(dǎo)Fas產(chǎn)生[15]。此外,有報(bào)道FasL參與不依賴Ca2+的T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性作用[17],SLE患者CD8+T淋巴細(xì)胞Fas表達(dá)的增高還可能與FasL的表達(dá)相關(guān),從而促進(jìn)Fas+CD8+T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的組織損傷[12]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果示MG患者PBL中Fas+及CD8+Fas+細(xì)胞比例高于對(duì)照組,推測(cè)可能反映了MG患者體內(nèi)T淋巴細(xì)胞的活化及Fas+CD8+T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性作用增強(qiáng),與MG的發(fā)病機(jī)制有關(guān)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果還顯示,行胸腺切除術(shù)組MG患者外周血Fas+、CD4+Fas+及CD8+Fas+細(xì)胞比例均低于無(wú)行胸腺切除術(shù)組,雖然差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,仍提示胸腺切除可能通過(guò)降低PBL中Fas的表達(dá),減少體內(nèi)T淋巴細(xì)胞的活化及Fas+CD8+T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性作用,達(dá)到治療MG的目的。加大樣本量深入研究有助于進(jìn)一步明確胸腺切除術(shù)治療MG與Fas/FasL介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡的關(guān)系。

參考文獻(xiàn)

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t淋巴細(xì)胞范文第3篇

關(guān)鍵詞：間充質(zhì)干細(xì)胞；T淋巴細(xì)胞；免疫調(diào)節(jié)

Immune Regulation of Mesenchymal Stem Cells on T Lymphocytes

WANG Hui-ge，GAO Jian-peng

（Department of Gastroenterology，The Affiliated Yanan Hospital of Kunming Medical University，Kunming 650015，Yunnan，China）

Abstract：Mesenchymal stem cells have the biological characteristics involving strong proliferation capability，widely distribution and low immunogenicity，which are used in the treatment of the immune diseases.A growing number of studies have found that T lymphocytes play a significant role in the development and progression of autoimmune disease.And MSCs can influence the activation，proliferation and the proportion of subsets of T lymphocytes through the cell-cell contact，cytokine，then achieve the goal of immune regulation，relieve illness.The review summarizes that the immune effect of MSCs on T lymphocytes.

Key words：Mesenchymal stem cells；T lymphocytes；Immune regulation

相關(guān)研究證明，T淋巴細(xì)胞的異常表達(dá)和缺失可導(dǎo)致自身免疫性疾病的發(fā)生，而間充質(zhì)干細(xì)胞具有多項(xiàng)分化潛能及免疫調(diào)節(jié)功能，可通過(guò)細(xì)胞間的直接接觸或（和）通過(guò)產(chǎn)生可溶性因子對(duì)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞進(jìn)行調(diào)控，從而控制自身免疫性疾病的發(fā)生和發(fā)展。

1 間充質(zhì)干細(xì)胞（mesenchymal stem cells，MSCs）

間充質(zhì)干細(xì)胞僅表達(dá)中等量水平MHC-I類分子，不表達(dá)MHC-II分子和Fasl配體和B7-1、B7-2、CD40、CD40L等共刺激分子。而T淋巴細(xì)胞的激活所需的共刺激分子缺如，使T細(xì)胞活化的第二信號(hào)喪失，導(dǎo)致Th細(xì)胞的無(wú)反應(yīng)性而促成免疫耐受，因此MSCs表現(xiàn)出耐受原性和低免疫原性。

2 T淋巴細(xì)胞

T細(xì)胞具有高度的異質(zhì)性，根據(jù)其表面標(biāo)志和功能特征，T細(xì)胞可分為不同的亞型，各亞群之間相互調(diào)節(jié)，共同發(fā)揮免疫學(xué)功能。

2.1 CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞的亞群、分化及功能

2.1.1 CD4+T細(xì)胞的亞群、分化及功能 Th1細(xì)胞分泌IFN-γ、TNF、IL-2、IL-3等；Th2細(xì)胞分泌IL-3、IL-4、IL-5、IL-10、IL-13等；Th3細(xì)胞分泌大量TGF-β。這些細(xì)胞因子不僅每個(gè)亞群的免疫效應(yīng)功能，還調(diào)控各亞群的形成和擴(kuò)增。

2.1.2 CD8+T細(xì)胞的功能 CD8+T細(xì)胞受自身MHC-I類分子的限制，活化后分化為細(xì)胞毒性T細(xì)胞（CTL），其可通過(guò)分泌穿孔素、顆粒酶、淋巴毒素及表達(dá)FasL引起靶細(xì)胞裂解和凋亡。

2.2 T細(xì)胞的活化 T細(xì)胞的完全活化有賴于雙信號(hào)和細(xì)胞因子的作用。T細(xì)胞活化的雙信號(hào)：第一信號(hào)即抗原提呈細(xì)胞（antigen-presenting cell，APC）將pMHC提成給T細(xì)胞，T細(xì)胞受體（T cell receptor，TCR）特異性識(shí)別結(jié)合在MHC分子槽中的抗原肽，啟動(dòng)抗原識(shí)別信號(hào)（即T細(xì)胞對(duì)抗原的識(shí)別）；第二信號(hào)即T細(xì)胞與APC細(xì)胞表面多對(duì)協(xié)同刺激分子相互作用產(chǎn)生T細(xì)胞活化?；罨腁PC和T細(xì)胞可分泌IL-1、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10和IFN-γ等多種細(xì)胞因子，他們?cè)赥細(xì)胞激活中發(fā)揮重要作用。

3 MSCs對(duì)T細(xì)胞的作用

3.1不同來(lái)源的MSCs對(duì)T細(xì)胞的作用具有相似性。有學(xué)者研究進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)骨髓來(lái)源和脂肪來(lái)源的MSCs同樣具有抑制T細(xì)胞增殖的能力；同時(shí)研究者對(duì)來(lái)源于臍帶血和骨髓的MSCs進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)兩種來(lái)源的MSCs均具有抑制植物血凝素誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞增殖的作用。故而可認(rèn)為不同來(lái)源的MSCs對(duì)T淋巴細(xì)胞的作用具有相似性。

3.2 MSCs可以抑制T淋巴細(xì)胞增殖，并改變其亞群比例。MSCs可以通過(guò)分泌細(xì)胞因子和影響樹(shù)突細(xì)胞（DC）的作用抑制T淋巴細(xì)胞的增殖，并改變其亞群比例。張偉等研究發(fā)現(xiàn)MSCs能分泌高水平的TGF-β1，且MSCs的上清抑制PHA刺激的T淋巴細(xì)胞的增殖，抑制PHA活化的T淋巴細(xì)胞IFN-γ的分泌。陳健琳研究小組也發(fā)現(xiàn)MSCs高表達(dá)TGF-β1基因，但不表達(dá)IL-4和IFN-γ基因，ELISA證實(shí)MSC培養(yǎng)上清存在TGF-β1蛋白。

4 小結(jié)和展望

MSCs可對(duì)T淋巴細(xì)胞的增殖、活化、亞群比例進(jìn)行調(diào)節(jié)，但不同組織來(lái)源的MSCs對(duì)T淋巴細(xì)胞的抑制效果不同的，且MSCs對(duì)T淋巴細(xì)胞的調(diào)節(jié)具有濃度依賴性，故而還需大量的實(shí)驗(yàn)證據(jù)對(duì)MSCs作用T淋巴細(xì)胞的濃度提供依據(jù)，并完善MSCs對(duì)T細(xì)胞的作用途徑的描述。

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t淋巴細(xì)胞范文第4篇

[關(guān)鍵詞]脂多糖；哮喘小鼠；T細(xì)胞；白介素-17

[中圖分類號(hào)] R-332 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-4721（2017）01（c）-0120-03

[Abstract]Objective To explore the influence of LPS with low dosage on the secretion of IL-17 and the potential mechanism.Methods The asthma mouse model was copied successfully and the T cells from spleen were isolated and cultured in vitro，and the mice were divided into the control group and the LPS group.The mice in LPS group were divided into the LPS group 1 and the LPS group 2，and were stimulated with 1，2 ng/ml LPS respectively for 72 hours.The control group was stimulated with the same volume of saline.The concentrations of IL-17 in the supernatant were detected with ELISA，the change of concentration of IL-17 was observed.Results After stimulation with lower dosages of LPS，the secretion of IL-17 in the supernatant decreased significantly in the LPS groups than that in the control group，with significant difference （P

[Key words]Lipopolysaccharide；Asthma mice；T cell；Interleukin-17

支夤芟喘是全球常見(jiàn)的慢性疾病之一，是由T細(xì)胞、B細(xì)胞、嗜酸粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞等多種炎癥細(xì)胞和細(xì)胞因子參與的慢性氣道炎癥性疾病[1-2]。T細(xì)胞及其亞群如Th2細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子如白介素-4（interleukin-4，IL-4）、IL-5、IL-13、IL-17等直接參與了哮喘的炎癥過(guò)程，進(jìn)而誘發(fā)哮喘的一系列癥狀[3]。IL-17是一種主要由CD4+T淋巴細(xì)胞、嗜酸粒細(xì)胞等分泌的前炎性細(xì)胞因子，具有強(qiáng)大的募集中性粒細(xì)胞及促進(jìn)多種炎性因子釋放的作用，參與了機(jī)體多種炎癥性疾病的發(fā)生、發(fā)展[4-5]，在哮喘的慢性氣道炎癥過(guò)程中，也發(fā)揮著重要的作用[6]。本實(shí)驗(yàn)利用低劑量脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）在體外刺激哮喘小鼠T細(xì)胞，檢測(cè)其IL-17的產(chǎn)生情況，探討低劑量LPS誘導(dǎo)IL-17的產(chǎn)生及哮喘T淋巴細(xì)胞免疫耐受的可能機(jī)制。

1材料與方法

1.1主要試劑及儀器

RPMI 1640培養(yǎng)基、胎牛血清（Hyclone公司），Al（OH）3（A8222，Sigma公司），雞卵清蛋白（A5503，Sigma公司），尼龍毛柱（Cat.146-04231，日本W(wǎng)ako公司），小鼠紅細(xì)胞裂解液（碧云天公司），小鼠IL-17 ELISA試劑盒（Diaclone公司），倒置顯微鏡（日本Nikon），Eppendorf離心機(jī)，流式細(xì)胞儀（美國(guó)Beckman Coulter公司），霧化器（boyo37G6000型，德國(guó)百瑞公司），空氣壓縮泵（德國(guó)百瑞公司）。

1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與分組

BALB/c小鼠15只，清潔級(jí)，4～6周齡，體重20～30 g，雌雄不限，隨機(jī)分為兩組，對(duì)照組5只，LPS組10只，其中LPS組又分為L(zhǎng)PS1組和LPS2組，各5只。小鼠購(gòu)自溫州醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，在普通清潔條件下飼養(yǎng)，自由取水、攝食。

1.3哮喘小鼠模型的制作

10只LPS組小鼠分別于第1、14天致敏，即經(jīng)小鼠腹腔注射OVA 10 μg與Al（OH）3凝膠20 mg的混合液，總體積200 μl；第25天開(kāi)始，將小鼠放置于容積為5 L的密閉容器中，通過(guò)連接霧化吸入器的空氣壓縮泵，以3%的OVA氣溶膠激發(fā)小鼠，30 min/次，1次/d，總共3次。5只正常對(duì)照組小鼠以等量的生理鹽水代替OVA致敏及激發(fā)。最后1次激發(fā)后48 h處死小鼠，收集標(biāo)本。

1.4 T細(xì)胞的體外分離培養(yǎng)

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t淋巴細(xì)胞范文第5篇

作者：彭磊　王臻　王慶良　王鵬飛　胡蘊(yùn)玉　吳銀松

【關(guān)鍵詞】 骨肉瘤

關(guān)鍵詞: 骨肉瘤;T淋巴細(xì)胞，細(xì)胞毒性;體外擴(kuò)增

摘 要:目的 研究骨肉瘤特異性細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞（CTL）體外擴(kuò)增培養(yǎng)的方法，并進(jìn)行細(xì)胞毒檢測(cè). 方法 抽取骨肉瘤患者自身的外周血，分離淋巴細(xì)胞，用IL-2體外短期刺激方法提高對(duì)骨肉瘤細(xì)胞的免疫性，再按一定比例體外與多西紫杉醇處理的骨肉瘤細(xì)胞及巨噬細(xì)胞混合培養(yǎng)（MTLC）可獲得骨肉瘤的特異性CTL細(xì)胞，進(jìn)行鑒定并觀察其殺傷特性. 結(jié)果 混合培養(yǎng)4d后，即可擴(kuò)增出大量淋巴細(xì)胞，流式細(xì)胞儀證實(shí)主要是CD8+ 細(xì)胞，這些具有殺傷活性的CTL細(xì)胞體外對(duì)自身腫瘤細(xì)胞有很強(qiáng)的細(xì)胞毒作用. 結(jié)論 在IL-2作用下，應(yīng)用巨噬細(xì)胞、自體腫瘤細(xì)胞及淋巴細(xì)胞體外混合培養(yǎng)，是體外擴(kuò)增特異性細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞的較好方法，CTL作為新的特異性免疫治療方法有望提高骨肉瘤的免疫治療效果.

Keywords:osteosarcoma;CTL;proliferation in vitro

Abstract:AIM To induce the osteosarcoma specific CTL proliferation in vitro.METHODS We isolated T lympho-cytes from peripheral blood of osteosarcoma cases，which were previously dealt with docitaxol，and activated with com-bination of macrophages and interleukin-2（IL-2），then their tumor-killing ability was measured.RESULTS A large number of lymphocytes that proliferated after3d mixed cul-com ture were proved mainly to be CD8+ T cell by FCM，and their tumor-killing ability was great in vitro.CONCLUSION The specific CTL proliferation in vitro by mixed culture of macrophages，host tumor cells and lymphocytes under the presence of IL-2is a prospective way in the immunological therapy of tumor.It may improve the therapeutic effect of osteosarcoma.

0 引言

免疫治療是惡性腫瘤治療的重要輔助方法，已確認(rèn)機(jī)體免疫監(jiān)視功能中起重要作用的是細(xì)胞免疫，其中起特異性殺傷作用的是細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞（CTL），CTL具有特異性高、殺傷性強(qiáng)等特點(diǎn)，故有重要的臨床應(yīng)用前景，成為新的研究熱點(diǎn)，但此研究在骨惡性腫瘤尚屬起步階段.我們應(yīng)用自建系的骨肉瘤細(xì)胞系PL-992與患者自身淋巴細(xì)胞及巨噬細(xì)胞體外混合培養(yǎng)（MTLC），擴(kuò)增出大量淋巴細(xì)胞，并對(duì)這些淋巴細(xì)胞進(jìn)行生物學(xué)特性測(cè)定.

1 材料和方法

1.1 骨肉瘤細(xì)胞系PL991來(lái)源及預(yù)處理 手術(shù)無(wú)菌切除新鮮活力好的骨肉瘤組織，病理診斷為骨肉瘤骨母細(xì)胞型，接種裸鼠皮下，待腫瘤長(zhǎng)出后，組織塊培養(yǎng)法，體外傳代建系并進(jìn)行生物學(xué)特性測(cè)定.用6mg L-1 多西紫杉醇處理48h后與淋巴細(xì)胞體外混合培養(yǎng).

1.2 自體淋巴細(xì)胞的分離 抽取骨肉瘤患者外周血4mL，淋巴細(xì)胞分離液（購(gòu)于Sigma公司）1500g離心15min，分離淋巴細(xì)胞（1×106 ），培養(yǎng)于200mL L-1 小牛血清RPMI1640的完全培養(yǎng)液中.

1.3 特異性殺傷性T淋巴細(xì)胞的體外刺激誘導(dǎo) 用班蟊液獲得患者自體的巨噬細(xì)胞加入用IL-2（上海華新生物高技術(shù)公司）150U mL-1 ，植物血凝素預(yù)刺激36h的淋巴細(xì)胞，同時(shí)加入1/8的多西紫杉醇處理的骨肉瘤細(xì)胞PL-991，37℃50mL L-1 CO2 條件下培養(yǎng)，細(xì)胞計(jì)數(shù)，并在倒置顯微鏡下觀察.

1.4 流式細(xì)胞儀增殖T淋巴細(xì)胞檢測(cè) 取2×106 mL-1 待測(cè)細(xì)胞加入U(xiǎn)型孔內(nèi)，再加入CD3+ CD4+ CD8+ 單抗，每孔各20μg，4℃孵育30min，應(yīng)用免疫熒光和流式細(xì)胞儀測(cè)定淋巴細(xì)胞CD3+ +CD4+ +CD8+ 表型.

1.5 細(xì)胞毒活性檢測(cè) 采用51 Cr釋放法，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的PL-992骨肉瘤細(xì)胞為靶細(xì)胞，密度為107 mL-1 ，加入（51 Cr）Na2 CrO3 70kBq mL-1 ，37℃孵育1h，PBS洗滌2遍后，按104 /孔加入96孔板，按不同的效靶比加入T細(xì)胞，培育4h后收集上清液作γ計(jì)數(shù)，自然釋放孔為僅加入靶細(xì)胞，最大釋放孔為靶細(xì)胞加入100μL NP40.

細(xì)胞毒計(jì)算公式為:細(xì)胞毒活性=（實(shí)驗(yàn)孔CMP-自然孔CMP）/（最大釋放孔CMP-自然孔CMP）×100%.實(shí)驗(yàn)孔均設(shè)三復(fù)孔.

2 結(jié)果

2.1 形態(tài)學(xué)觀察 應(yīng)用倒置顯微鏡觀察，細(xì)胞體積明顯變大，共孵后體積增大2～3倍，呈圓形、多邊形、新月形、三角形等多種不規(guī)則形態(tài)，以腫瘤細(xì)胞為中心，形成特異性淋巴細(xì)胞增值克隆，在倒置顯微鏡下呈葡萄狀排列，并且細(xì)胞數(shù)量逐漸增多，4d后細(xì)胞串開(kāi)始脫落，腫瘤細(xì)胞已經(jīng)發(fā)生凋亡（Fig1）.

圖1 誘導(dǎo)前后CTL細(xì)胞形態(tài)，誘導(dǎo)后細(xì)胞多樣并可見(jiàn)腫瘤細(xì)胞的凋亡　略

2.2 細(xì)胞生長(zhǎng)曲線 淋巴細(xì)胞加入腫瘤細(xì)胞后生長(zhǎng)迅速，繼而細(xì)胞數(shù)量迅速增加由1.6×106 增至第5日1.5×107 （Fig2）.

圖2 CTL細(xì)胞增殖迅速　略

2.3 流式細(xì)胞儀測(cè)定 淋巴細(xì)胞CD4+ （17.0±1.1）%，CD8+ 占（76.0±5.3）%，CD3+ 占（84.0±2.4）%，CD8+ CD3+ 占（67.0±2.1）%證實(shí)為特異性淋巴細(xì)胞為主.

2.4 特異性殺傷性T淋巴細(xì)胞細(xì)胞毒活性 誘導(dǎo)出的CTL對(duì)自體骨肉瘤細(xì)胞的細(xì)胞毒活性，培養(yǎng)誘導(dǎo)的細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞對(duì)自體骨肉瘤細(xì)胞的殺傷活性為84.3%與未誘導(dǎo)的T淋巴細(xì)胞有顯著性差異（P

3 討論

體外誘導(dǎo)腫瘤特異性CTL并作為新的過(guò)繼性免疫治療的活性細(xì)胞已成為近年來(lái)腫瘤治療研究中的一個(gè)新的熱點(diǎn)，特別是由CTL篩選腫瘤的特異性抗原作為腫瘤疫苗有廣闊的應(yīng)用前景，與黑色素瘤等免疫原性腫瘤不同，骨肉瘤的特異性抗原至今仍難定義［1］ ，因此設(shè)想直接用處理的腫瘤細(xì)胞刺激誘導(dǎo)CTL較為困難，但是國(guó)外有應(yīng)用樹(shù)突狀細(xì)胞刺激誘導(dǎo)出腫瘤特異性CTL細(xì)胞的研究基礎(chǔ)，巨噬細(xì)胞也同屬于腫瘤抗原提呈細(xì)胞，對(duì)腫瘤抗原有一定的提呈功能.另外，活化巨噬細(xì)胞分泌多種因子，有利于淋巴細(xì)胞識(shí)別腫瘤抗原，MHC I，II抗原表達(dá)增強(qiáng)，膜表面TNF IL-1，IL-7表達(dá)增強(qiáng)［2，3］ .體內(nèi)實(shí)驗(yàn)也證明，殺傷腫瘤細(xì)胞時(shí)巨噬細(xì)胞的浸潤(rùn)要早于T淋巴細(xì)胞，在腫瘤原位也找不到活化跡象，在引流淋巴結(jié)處T細(xì)胞有明顯的活化，增殖巨噬細(xì)胞處理抗原，提呈抗原，導(dǎo)致腫瘤特異性T細(xì)胞活化［4-6］ .因此，我們采用巨噬細(xì)胞，處理的腫瘤細(xì)胞以及淋巴細(xì)胞體外混合培養(yǎng)，借助這兩方面的理論基礎(chǔ)，設(shè)想在體外模擬T細(xì)胞特異性激活的過(guò)程，誘導(dǎo)特異性的CTL.我們發(fā)現(xiàn)，應(yīng)用巨噬細(xì)胞體外刺激淋巴細(xì)胞，T淋巴細(xì)胞體外擴(kuò)增的速度明顯快于既往作者的擴(kuò)增速度，巨噬細(xì)胞提取方法簡(jiǎn)便宜行，使用價(jià)值較大［7-9］ .另外，我們還發(fā)現(xiàn)共孵后巨噬細(xì)胞的吞噬功能明顯增強(qiáng)（另文報(bào)道），說(shuō)明體內(nèi)巨噬細(xì)胞與淋巴細(xì)胞有協(xié)同作用.

圖3 略

總之，巨噬細(xì)胞與淋巴細(xì)胞共培養(yǎng)是一種較好的體外擴(kuò)增特異性T淋巴細(xì)胞的方法，對(duì)于研究體內(nèi)特異性淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)歸及機(jī)制有重要價(jià)值，同時(shí)也說(shuō)明了骨肉瘤的抗原性較強(qiáng)，腫瘤特異性淋巴細(xì)胞體外 回輸?shù)姆椒ň哂袣詮?qiáng)，特異性高等特點(diǎn)，有望提高骨肉瘤免疫治療的結(jié)果，故有著重要的臨床應(yīng)用前景，值得深入研究.

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