前言：想要寫出一篇令人眼前一亮的文章嗎？我們特意為您整理了5篇免疫組化技術(shù)范文，相信會為您的寫作帶來幫助，發(fā)現(xiàn)更多的寫作思路和靈感。

免疫組化技術(shù)范文第1篇

【關(guān)鍵詞】細(xì)胞學(xué)；薄層液基涂片；染色；方法

【Abstract】objective:tostudythin-layerliquid-basedcytologysmeartechniqueanditsapplicationinImmunohistochemistry.Method:theuseofcomparativesignificanceoftwogroupsofcases.Therewere74casesofadenocarcinomainpleuralfluid-basedsmear.40casesofsmallcell,resolvingphlegmandsmear.Secondgenerationusingimmunohistochemicaltwo-stepdye.Results:adenocarcinomainpleuraleffusionandascitesinathinlayerofliquidbasedsmearsadenocarcinomacellsonCEAantibody-negative,Mesothelialcellstomesothelin(mesothelin)antibody-positivesmallsmallcellundifferentiatedcarcinomacellandresolvingphlegmsmearonCHAantibody-positive.OnLCAantibody-positivelymphocytes.Conclusion:ImmunohistochemicalAntigen-antibodyreactionisahighdegreeofspecificityandsensitivityofbiochemicalreactions,toaspecificantigenrecognitionandstrong.Incells,subcellularleveldetectionAntigenmoleculeisdifficultforotherbiotechnologyandalternative.Onthecytologyhasbroadapplicationprospects.

【Keywords】Cytology;thinlayerliquidbasedsmears;dyeing;method.

【中圖分類號】R156.3【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】B【文章編號】1005-0515(2011)12-0308-02

免疫組化是用特異性抗體對細(xì)胞或組織內(nèi)的抗原進(jìn)行定性、定位或定量檢測。凡能作為抗原半抗原的物質(zhì)，都可用免疫組化方法檢測，近年免疫組化技術(shù)在病理組織學(xué)上廣泛應(yīng)用，但少見于細(xì)胞學(xué)薄層液基涂片的報道。本文總結(jié)細(xì)胞學(xué)薄層液基涂片的免疫組化染色實驗，探討免疫組化技術(shù)在細(xì)胞學(xué)上的應(yīng)用。

1材料與方法

1.1材料：選用有對比意義的細(xì)胞學(xué)檢材，記有腺癌性胸腹水薄層液基涂片74例，小細(xì)胞未分化癌涂片40例，試劑選用邁新公司Elivsionplus免疫組化試劑盒。

1.2方法：免疫組化二代二步染色法：1）胸腹水、痰薄層液基涂片、固定、潮干、PBS液洗滌。2）胰酶消化修復(fù)抗原，膠酶濃縮劑與稀釋液按1:3滴加，37℃孵育15分鐘，PBS液洗滌。3）阻斷：滴加3%過氧化氫液，37℃孵育15分鐘，以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶活性，PBS液洗滌。4）免疫反應(yīng)，抗體依需要自選，滴加后37℃孵育1小時，PBS液洗滌。5增強(qiáng)反應(yīng)，滴加增強(qiáng)劑，37℃孵育30分鐘，PBS液洗滌.6）標(biāo)記：滴加酶標(biāo)抗鼠/兔聚合物，37℃孵育30分鐘，PBS液洗滌。7）顯色，滴加新制DAB液，鏡下觀察，顯色適當(dāng)后放入蒸餾水中終止反應(yīng)。8）蘇木素復(fù)染，中性樹膠封固。

2結(jié)果

經(jīng)反復(fù)實驗總結(jié)出以上染色方法，可使陽性細(xì)胞液基涂片中的陽性細(xì)胞呈黃棕色或棕褐色。74例腺癌性胸腹水離心涂片中，變形未圓形、卵圓形，聚集成團(tuán)的深染的腺癌細(xì)胞，與增生間皮細(xì)胞在鏡下難以區(qū)別；通過免疫組化染色，腺癌細(xì)胞對CEA抗體顯陽性，間皮細(xì)胞對mesothelin（間皮素）抗體顯陰性。40例小細(xì)胞未分化癌痰涂片中，小細(xì)胞未分化癌細(xì)胞略大于淋巴細(xì)胞，圓形、卵形、短小梭形，核深染，與大淋巴細(xì)胞難以鑒別。通過免疫組化染色，小細(xì)胞未分化癌細(xì)胞對CHA抗體顯陽性，淋巴細(xì)胞對LCA抗體顯陰性，這樣可以鑒別開來。

免疫組化技術(shù)范文第2篇

一、滿族面具藝術(shù)的文化內(nèi)涵

滿族面具藝術(shù)是薩滿教觀念的物化形態(tài)和表現(xiàn)形式，蘊(yùn)含著北方文化的神韻，是宗教、民俗、藝術(shù)等多重文化的積淀。它具有原始藝術(shù)的形態(tài)特征，可謂人類歷史文化的“活化石”。

滿族面具藝術(shù)的出現(xiàn)與北方漁獵游牧生活直接關(guān)聯(lián)?！董a琿十里長江俗記》記載：“白熊皮蓋面，狼伙不敢進(jìn)”，“以鹿獐頭骨遮身，可得其仔”。可以說狩獵經(jīng)驗與對自然的敬畏心理統(tǒng)一起來，就誕生了祭祀中的面具形式。往昔，滿族先世女真人適應(yīng)狩獵生產(chǎn)的特點而舉行的春、秋常例祭，就是戴面具祭神娛神的儀式(郭淑云《原始態(tài)文化――薩滿教透視》，上海人民出版社2001年版，第575―586頁)。

滿族面具是薩滿教的核心――“萬物有靈”觀念的具體體現(xiàn)。滿族面具藝術(shù)的類型與人類原始崇拜的類型一致，同樣分為自然崇拜、圖騰崇拜、祖先崇拜三種。自然崇拜類型的滿族面具體現(xiàn)了滿族先民對自然現(xiàn)象的敬畏心理，在恐懼與期望中創(chuàng)造了無數(shù)幻念中的神靈，盛行以自然崇拜為主要內(nèi)容的部落大祭，如火祭、雪祭、海祭等。例如黑龍江省愛輝縣五大家子滿族徐姓家族至今保存一枚星神面具，族人尊稱“烏西哈恩都力”，為星祭時主祭薩滿所佩戴(同上，第586頁)。圖騰崇拜類型的滿族面具源于祖先相信自己與植物動物有特殊聯(lián)系，同時相信植物動物是生命迫切依賴的食物([法]列維?斯特勞斯《圖騰制度》，上海人民出版社2002年版，第11頁)，是生命力的源泉。出于食物崇拜心理，滿族先民把花、蘑菇、蛇、鷹等作為崇拜對象，例如滿族面具中有花神(伊爾哈思都哩)、蛇神(七彩梅合)等形象。這些都是采集與狩獵生活遺留在滿族面具藝術(shù)中的原始印記。隨著生產(chǎn)力的發(fā)展，人們認(rèn)識到對本氏族有重要貢獻(xiàn)的“英雄人物”的重要性，認(rèn)為他們死后“靈魂不散”，依然守護(hù)著本氏族，因此出現(xiàn)禮儀繁縟的祖先崇拜祭祀。在滿族面具類型中祖先崇拜類型具有非常重要的地位，數(shù)量眾多，如大罕祖先神、七乳媽媽(那丹忽渾赫赫)、始母神(佛朵赫赫、佛多媽媽)等都是為人熟知的滿族面具形象。其中始母神后演化為保嬰神，主司氏族子嗣繁衍。在滿族古代大祭中，主祭只有戴上始母神面具才有權(quán)傳達(dá)神諭(郭淑云《原始態(tài)文化――薩滿教透視》第586頁)。

二、滿族面具的審美特征

滿族面具從形制上看有戴式、掛式、替身式(較小，用后即焚)。遺存的面具圖稿是由毛筆或鉛筆畫成的簡要底稿。一般情況下，薩滿完成祭祀儀式后不敢保留面具的圖稿，都要燒掉，唯恐受到神靈責(zé)罰。但長白山寧安地區(qū)滿族鑲黃旗富察氏家族族長傅英仁卻是一位勇于革新的薩滿，他保留了許多珍貴的面具圖稿資料(王松林《中國滿族面具藝術(shù)》，遼寧民族出版社2002年版，第51頁)。這份藏品為我們展示了滿族面具的鮮明特征。

有些學(xué)者在總結(jié)滿族面具的造型特征時，大多概括為：象征性、擬態(tài)性、幻化性、夸張性、符號性等，但這些審美特征并不能說明滿族面具的獨特性。其實宗教祭祀儀式中的滿族面具形態(tài)具有不同于一般民間面具的審美特征，我們可以通過以下三個方面進(jìn)行研究：

(一)夸張局部特征的造型手段與樸素的受眾審美心理之間的有機(jī)統(tǒng)一

滿族面具圖案或神授或師傳，它們是宗教祭祀圣物，具有絕對的神圣性。宗教性是其基本屬性，其審美標(biāo)準(zhǔn)是“靈驗”，而不是為藝術(shù)而藝術(shù)的觀賞品。例如醫(yī)神(天花媽媽)就是滿族用來放在出水痘的小孩床前祛痘治病的?！疤旎▼寢尅笔菨M臉黑點的婦女形象。在人們看來，如果這個面具治好的孩子越多，就越靈驗，也就證明畫得最好。族眾的審美心理是樸素的，并不對藝術(shù)性提出要求，而是在面具“功能符號”明顯的情況下，要求其靈驗。他們眼中的“功能符號”就是面具夸張的局部特征。從“靈驗”的功利心理出發(fā)，面具夸張的局部特征是與其功能相適應(yīng)的。如“七乳媽媽”(那丹忽渾赫)突出，木神(毛恩都哩)面頰覆蓋樹葉，白芍藥花神頭頂白花，金神(愛新恩都哩)面鑲“大錢兒”，雨神(阿嘎恩都哩)滿臉雨滴。

(二)突出原始印記的圖案造型與神秘的審美體驗之間的有機(jī)統(tǒng)一

滿族面具圖案類型反映了薩滿教自然崇拜、圖騰崇拜、祖先崇拜的發(fā)展過程，同時反映了遠(yuǎn)古社會的生活風(fēng)貌。植物神、動物神、祖先神等圖案造型體現(xiàn)了先民在與大自然共處中認(rèn)識自然、描繪自然的心理歷程，其中包括許多源于漁牧生活的實踐經(jīng)驗。滿族面具的整體圖案造型存留濃郁的遠(yuǎn)古遺風(fēng)，具有神秘的象征性，原始印記是其視覺傳達(dá)的特色。這種顏料繪制的面具圖案從功能上看，優(yōu)勢是顯著的(孫運(yùn)來《黑龍江流域民族的造型藝術(shù)》，天津古籍出版社1990年版，第25頁)。獨特的圖案造型既貼近生活又傳達(dá)出因時代久遠(yuǎn)而不可言說的神秘氣息。這種神秘性與薩滿佩戴面具所要傳達(dá)給族眾的、與神溝通的宗教體驗不謀而合。在祭祀祈禱中圖案的原始印記是引導(dǎo)族眾“入境”的有利因素。

滿族面具圖案造型的原始印記表現(xiàn)了人們對自然神靈崇拜的虔誠的宗教心理。與神接近、與神溝通是人們所向往的，而滿族面具向人們傳達(dá)的審美體驗也恰恰是與神靈共處的體驗。為什么滿族面具多為善相?因為人們希望與人相處的都是善良的神靈。滿族面具體現(xiàn)了北方民族的樸素理想和樂觀性格。從遺存的實物來看，面具以神靈為主，少有猙獰丑陋的鬼怪形象，這又與滿族神話中描述的主題是一致的，如神話中描述的自然神、創(chuàng)世神、祖先神都是棄惡揚(yáng)善、勇于獻(xiàn)身的偉大形象，由此可看出滿族先民的民族精神所在?，敾⑺囆g(shù)也滲透著人們虔誠的宗教感情和對真善美的追求。

(三)恪遵祖訓(xùn)的制作與神圣空間的有機(jī)統(tǒng)一

因為滿族面具圖樣不可留存，祭祀后被燒掉，滿族面具的形態(tài)大多是薩滿根據(jù)秘傳的描述繪制出來的。民俗鄉(xiāng)規(guī)中祭祀的面具制作是祭祀儀式的重要組成部分，有嚴(yán)格的繪制、供祭、存藏、修繕等禁忌，必由德高望眾的面具師傅制作，不得隨意變更，否則被視為觸犯神靈。手工精良技藝嫻熟的面具師傅受當(dāng)?shù)貪M族人崇敬。莊嚴(yán)的祭祀儀式?jīng)Q定了工藝的精良，人們獻(xiàn)出上等的皮張及各種配飾。

滿族面具恪遵祖訓(xùn)的制作是為更好地烘托神圣空間而服務(wù)的。薩滿祭祀通常有一個以祭壇為中心的祭祀空間，是神靈降臨處，在宗教人類學(xué)中被稱為神圣空間。在中時間和空間都可有世俗和神圣之分。在祭祀中世俗和神圣之間發(fā)生轉(zhuǎn)換，神案、供桌在族眾面前成為神圣化的象征物。同樣，面具也具有象征性。薩滿祭祀中，戴面具被視為有宗教意味的神圣舉動，面具具有警示注目的作用，是與神靈世界相通的標(biāo)識和徽記。薩滿身穿神服，邊敲神鼓邊唱神歌，迎請各方神靈，借助面具完成世俗和神圣的轉(zhuǎn)換，實現(xiàn)神靈附體，扮演“代神立言”的角色。另外，在信仰薩滿教的滿族民眾心里，面具即是神祗。例如根據(jù)滿族學(xué)者石偉光、富育光的調(diào)查，琿春滿族何姓直至解放前仍有面具神偶，并尊為“瞞爺”。又如滿族吳姓祖?zhèn)鞯娜黄つ樕褚矊俟┘烂婢??！秴鞘衔疑鋷旒雷V》記述：“原祖居下江，傳奉皮臉神三具，媽媽神壹，熊頭神壹，巴柱神臉壹。二祖阿塔里率族西遷，船逆水遇風(fēng)，神器僅馀神書數(shù)冊，豈非天意……”(郭淑云《原始態(tài)文化――薩滿教透視》，第590頁)?？梢?，滿族有著豐富的面具文化，面具是神圣空間的重要組成部分。

免疫組化技術(shù)范文第3篇

【論文摘要】近年來分子生物學(xué)技術(shù)以及其它高、新技術(shù)在病理領(lǐng)域得到廣泛的應(yīng)用，同樣作為體育界的基礎(chǔ)研究學(xué)科運(yùn)動人體科學(xué)的發(fā)展已經(jīng)不能滿足簡單的宏觀的研究，越來越多的醫(yī)學(xué)檢驗以及病理學(xué)實驗技術(shù)在運(yùn)動人體科學(xué)廣泛應(yīng)用，尤其是組織病理學(xué)技術(shù)中定位技術(shù)，例如免疫組化、原位雜交等。本文就以上三種病理學(xué)常用的定位技術(shù)的方法進(jìn)行綜述。

1免疫組織化學(xué)實驗技術(shù)

隨著免疫組織化學(xué)染色技術(shù)的廣泛應(yīng)用，病理學(xué)研究產(chǎn)生了劃時代的飛躍。免疫組織化學(xué)是病理學(xué)實驗中常用的方法，是在蛋白質(zhì)水平用各種特異性抗體檢測細(xì)胞內(nèi)各種抗原物質(zhì)。根據(jù)標(biāo)記物的不同，免疫組織化學(xué)技術(shù)可分為免疫熒光細(xì)胞化學(xué)技術(shù)、免疫酶細(xì)胞化學(xué)技術(shù)、免疫鐵蛋白技術(shù)、免疫金-銀細(xì)胞化學(xué)技術(shù)、親和免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)、免疫電子顯微鏡技術(shù)等。

1.1免疫組織化學(xué)實驗步驟免疫組化技術(shù)是在組織化學(xué)的方法上結(jié)合免疫學(xué)的理論和技術(shù)發(fā)展起來的一門新技術(shù)。其原理是利用免疫學(xué)的核心——抗原體特異性結(jié)合的原理，用標(biāo)記抗體追蹤抗原，通過化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記于結(jié)合后的特異性抗體上的顯示劑，如酶、金屬離子、同位素等顯示一定的顏色，并借助顯微鏡、熒光顯微鏡、電鏡對其顏色進(jìn)行觀察，以達(dá)到檢測抗原物的目的[1]。

1.2免疫組化技術(shù)的優(yōu)點免疫組化技術(shù)的優(yōu)點：①特異性強(qiáng)，免疫組化中抗體與組織細(xì)胞中的抗原的結(jié)合是特異的。如白細(xì)胞共同抗原（LCA）顯示淋巴細(xì)胞成分。②敏感性高，而今，由于抗生物素—生物素（ABC）法和鏈酶素—過氧化物酶連接（SP）法的出現(xiàn)，使抗體的稀釋度(代表敏感度)達(dá)到了上千、上萬，甚至上億倍，使免疫組化技術(shù)更加可靠。③定位準(zhǔn)確，由于抗原抗體的結(jié)合是特異的，因而免疫組化技術(shù)可在組織和細(xì)胞內(nèi)準(zhǔn)確定位，對不同抗原在同一組織或細(xì)胞中進(jìn)行定位觀察，將形態(tài)與功能相結(jié)合，對疾病進(jìn)行深入的研究。

2原位雜交實驗技術(shù)

原位雜交是將組織化學(xué)與分子生物學(xué)技術(shù)結(jié)合來檢測合定位核酸的技術(shù)。它是用一段已知序列的核苷酸片斷來檢測細(xì)胞內(nèi)是否存在欲檢測物質(zhì)的DNA或RNA，是比免疫組化更加靈敏而深入一個層次的檢驗方法。根據(jù)所選探針和待測靶序列的不同，核酸原位雜交有DNA-DNA雜交、DNA-RNA雜交、RNA-RNA雜交等。

2.1原位雜交技術(shù)的應(yīng)用原位雜交由于不需要從待測組織中提取核酸，可完好的保存組織、細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)，將形態(tài)學(xué)與基因功能活動的變化相結(jié)合進(jìn)行多層面的研究。主要應(yīng)用：①細(xì)胞特異性mRNA轉(zhuǎn)錄的定位可用于基因圖譜、基因表達(dá)和基因組進(jìn)化的研究；②感染組織病毒DNA/RNA的檢測和定位；③癌基因、抑癌基因及各種功能基因在轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)及其變化的監(jiān)測；④基因在染色體上的定位；⑤檢測染色體的變化；⑥間期細(xì)胞遺傳學(xué)的研究。

2.2原位雜交技術(shù)與免疫組化的比較

2.2.1兩者的區(qū)別原位雜交與免疫組化染色技術(shù)相比較，這兩種方法的共同之處均具有定位檢測的功能，且均有較高的敏感性和特異性，所不同的是免疫組化染色是用的是抗體，其檢測對象是抗原，機(jī)制是抗原-抗體的特異性結(jié)合，是蛋白質(zhì)表達(dá)水平的檢測；原位雜交使用的是探針，遵循堿基互補(bǔ)配對的原則與待測靶序列結(jié)合，是DNA或mRNA水平的檢測。從實驗方法來看，免疫組化染色操作相對簡單，成本相對較低，受外界因素的影響相對??；原位雜交技術(shù)無論從實驗設(shè)計上，還是從實際操作上均較免疫組化染色復(fù)雜，成本的高低與試劑的種類和來源密切相關(guān)。一般而言，直接選用商品化的標(biāo)記探測和檢測試劑盒的實驗成本較高；熒光標(biāo)記探針較非熒光標(biāo)記探針的成本高，對樣本及實驗條件的要求較高，也更容易受到外界因素的影響。

2.2.2免疫組化與原位雜交雙標(biāo)技術(shù)雙標(biāo)技術(shù)是在同一張組織切片上標(biāo)記兩種不同的抗體或同時應(yīng)用兩種不同的檢測手段，如免疫組化和原位雜交技術(shù)，在不同層次來檢測同一細(xì)胞上某些物質(zhì)的表達(dá)是否有相關(guān)性的一種實驗方法。與傳統(tǒng)的單項檢測相比，雙標(biāo)記具有無可比擬的優(yōu)越性，可以克服由于切片間各種差異而引起的時間或空間的樣本誤差。實驗方法上先進(jìn)行原位雜交會減少免疫組化過程中對待測DNA或RNA的破壞或影響，一般目前均推薦先進(jìn)行原位雜交后進(jìn)行免疫組化標(biāo)記[2，3]。具體的操作跟單純的免疫組化和原位雜交各自的方法一致。需要注意的問題就是：①所用的實驗設(shè)備必須經(jīng)DEPC水浸泡或200℃烤箱過夜，操作時須帶口罩及手套；②當(dāng)雜交步驟完成后，切片必須認(rèn)真浸泡及長時間洗滌至少超過30min。③作免疫組化的各步驟時間均須適當(dāng)延長，以增加抗原抗體間的結(jié)合，楊青春等人研究發(fā)現(xiàn)每個步驟均延長2～3倍時間。④免疫組化顯色后不需要用蘇木精復(fù)染，以免遮蓋核信號。

參考文獻(xiàn)

[1]紀(jì)小龍，施作霖.診斷免疫組織化學(xué)[M].北京：軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)出版社，1997.5.

免疫組化技術(shù)范文第4篇

【關(guān)鍵詞】 抗原修復(fù)液；固定時間；免疫組化

doi：10.3969/j.issn.1004-7484（x）.2012.08.089 文章編號：1004-7484（2012）-08-2487-02

隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)和相關(guān)領(lǐng)域的不斷發(fā)展，免疫組織化學(xué)技術(shù)作為一門新興的學(xué)科出現(xiàn)了。它是一門基于免疫和分子生物學(xué)與病理形態(tài)學(xué)等學(xué)科綜合的技術(shù)，主要是通過已知抗體或抗原進(jìn)行對實驗中的組織細(xì)胞中探測的抗原或抗體檢測。典型特征包括操作易于實現(xiàn)，準(zhǔn)確性高和特異性強(qiáng)，并且能夠?qū)⑿螒B(tài)和機(jī)能相互整合。該種技術(shù)已在實際中能夠進(jìn)行病理和鑒別診斷，組織胚胎和神經(jīng)解剖等相關(guān)領(lǐng)域的實驗研究[1]。通常情況下，只有在正確及時的固定離體組織前提下，免疫組化技術(shù)才能得出精確度高的實驗結(jié)果。但是，由于實際操作中存在大量的影響因素造成不能正確及時的固定離體組織，特別是在進(jìn)行尸檢標(biāo)本時，對實驗的要求更高。本文的研究重點就是考察這些組織是否能夠做免疫組化實驗，對于不同抗原修復(fù)液和固定時間對免疫組化結(jié)果的影響。

1 材料與方法

1.1 一般資料 采集本院在2008年1月至2009年12月手術(shù)中送檢，并且確診為乳腺浸潤性導(dǎo)管癌的26例標(biāo)本。在實驗中，每一標(biāo)本中選取4塊腫塊部位，其中的四個時間點分別是：t1，t2，t3和t4。t1，t2，t3和t4分別代表立即固定組，延遲12小時固定組，延遲24小時固定組，延遲48小時固定組。將其中的1塊標(biāo)本馬上置于10%的中爾馬林液中進(jìn)行固定，并將實驗中的其余3塊分別于延遲12、24、48小時后放入10%中爾馬林液進(jìn)行固定。然后對于以上標(biāo)本固定滿24小時后進(jìn)行脫水、透明、浸蠟和包埋相關(guān)操作，再進(jìn)行切片行HE染色驗證腫瘤組織。并且將染色結(jié)果為陰性者立即固定組免疫組化，同時不再做與其相應(yīng)延遲固定組的標(biāo)本標(biāo)記染色。

1.2 試劑與方法 采用的試劑包括：鼠抗人CK7單抗，抗人C-erbB-2，單抗兔抗人ER單抗和鼠及ElivisionTM plus（即用型檢測試劑盒和DAB試劑盒均購于福建邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司）。采用兩步法進(jìn)行免疫組化，即分別用檸檬酸高壓熱修復(fù)和胃酶修復(fù)，并且嚴(yán)格按照ElivisionTM plus試劑盒要求的操作步驟進(jìn)行操作。其中，脫水透明，中性樹膠封片，DAB顯色和蘇木素輕度復(fù)染，并且用PBS進(jìn)行替換一抗作為陰性對照。其中，不同抗原修復(fù)液分組：pH為9.0的高溫高壓EDTA緩沖液修復(fù)（A），pH為8.0高溫高壓EDTA緩沖液修復(fù)（B），pH為6.0高溫高壓檸檬酸鹽緩沖液修復(fù)（C），pH為9.0微波爐EDTA緩沖液修復(fù)（D），pH為8.0微波爐EDTA緩沖液修復(fù)（E），pH為6.0微波爐檸檬酸鹽修復(fù)法（F）。

1.3 結(jié)果判定 進(jìn)行陽性定位在細(xì)胞漿和陽性定位在細(xì)胞核的免疫組化切片，將其中具有特征代表的10個在400倍視野中觀察，對其中的陽性細(xì)胞占整體細(xì)胞的比例進(jìn)行計數(shù)如下：計陽性細(xì)胞數(shù)占整體細(xì)胞比例在25%以下記做（±），占整體細(xì)胞比例在25%-50%記做（+），占整體細(xì)胞比例在50%-75%記為（++），占整體細(xì)胞比例在75%以上記為（+++），并且相應(yīng)的評價分為1，2，3，4分；同樣的，以（±），（+），（++）表示染色強(qiáng)度，并且相應(yīng)的評價分為1，2，3分。最后，將兩種記分乘積作為染色效果指數(shù)。另外，對陽性定位于細(xì)胞膜的免疫組化進(jìn)行切片，其中的染色效果參照文獻(xiàn)[2]標(biāo)準(zhǔn)判定，同樣的以符號±，+，++，+++，++++進(jìn)行評價，并且相應(yīng)的評價分為1，2，3，4，5分，將兩種分?jǐn)?shù)的乘積作為染色效果指數(shù)。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析 基于統(tǒng)計軟件SPSS13.0進(jìn)行數(shù)字統(tǒng)計處理。在進(jìn)行統(tǒng)計中，進(jìn)行隨機(jī)區(qū)間設(shè)計的秩和檢驗，并將檢驗結(jié)果在P

2 結(jié) 果

2.1 通過在A-F抗原修復(fù)液以及固定時間不同乳癌組織中，CK7的表現(xiàn)結(jié)果如下：在乳癌組織中，CK7的陽性顯示為黃褐色的顆粒，其定位于細(xì)胞漿中，在總共26例標(biāo)本中立即固定組均陽性。并且，在立即固定組、12小時后固定組、24小時后固定組和48小時后固定組間的染色效果指數(shù)差異，有統(tǒng)計學(xué)意義（P

2.2 通過在A-F抗原修復(fù)液以及固定時間不同乳癌組織中，ER的表現(xiàn)結(jié)果如下：在乳癌組織，ER的陽性顯示為黃褐色顆粒，其定位于細(xì)胞核中，在所有的標(biāo)本中有22例立即固定組標(biāo)本呈現(xiàn)出了陽性。在立即固定組、12小時后固定組、24小時后固定組和48小時后固定組間的染色效果指數(shù)之間的差異P

2.3 通過在A-F抗原修復(fù)液以及固定時間不同乳癌組織中，C-erbB-2的表現(xiàn)結(jié)果如下：在乳癌組織，C-erbB-2陽性顯示為黃褐色顆粒，并且陽性定位在細(xì)胞膜中，在所有的標(biāo)本中有18例立即固定組標(biāo)本呈現(xiàn)陽性。在立即固定組、12小時后固定組、24小時后固定組和48小時后固定組間的染色效果指數(shù)之間的差異P

3 討 論

由組織病理學(xué)基本理論可知，無論在組織切片活著進(jìn)行電鏡大體標(biāo)本的保存，應(yīng)該及時適當(dāng)進(jìn)行有效的固定。通過這種操作，才能達(dá)到使組織和細(xì)胞內(nèi)蛋白凝固并能夠在特定位置保留，進(jìn)而可以防止破壞及自溶內(nèi)外源性酶，從而最大程度的對組織和細(xì)胞的固有形態(tài)、結(jié)構(gòu)實施了保護(hù)。當(dāng)出現(xiàn)組織內(nèi)沒未能進(jìn)行有效的固定時，內(nèi)外源性酶將能夠造成組織細(xì)胞結(jié)構(gòu)破壞，甚至使某些特定部位的蛋白向周圍擴(kuò)散并出現(xiàn)降解。在本實驗中，通過采用不同抗原修復(fù)液，并采用在延遲時間不等的固定組織，進(jìn)行特定部位的蛋白免疫組化檢測，在結(jié)果中可以看到特定陽性部位周圍有不同的化程度的陽性背景。并且，在進(jìn)行CK7免疫標(biāo)記時，癌巢周圍陽性背景隨著抗原修復(fù)液A到F，固定時間的增長而逐漸加深；在進(jìn)行ER免疫標(biāo)記過程中，在核陽性減弱的同時出現(xiàn)胞漿的陽性背景；在進(jìn)行C-erbB-2免疫標(biāo)記過程中，胞膜陽性同時胞膜兩側(cè)均出現(xiàn)陽性背景。并且，從統(tǒng)計學(xué)角度，在CK7、ER和C-erbB-2在4組固定時間不等的乳癌組織間的表達(dá)效果具有統(tǒng)計意義。

免疫組織化學(xué)技術(shù)基本原理：基于抗原抗體反應(yīng)或者組織化學(xué)的呈色反應(yīng)，通過借助顯色劑來標(biāo)記特異性抗體在組織細(xì)胞原位，從而能夠?qū)ο鄳?yīng)抗原進(jìn)行定性、定位和定量診斷。其中，組織固定不理想對于免疫組化染色結(jié)果有非常大的關(guān)系，其固定的結(jié)果程度和抗原保存有直接關(guān)系，因此應(yīng)該進(jìn)行盡快組織固定。在進(jìn)行大標(biāo)本和有包膜的標(biāo)本實驗時，由文獻(xiàn)[3，4]應(yīng)該進(jìn)行切開固定。在其中的組織細(xì)胞不能及時有效固定，就會導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)蛋白破壞降解，甚至導(dǎo)致免疫組化檢測失敗[5，6]。免疫組化染色中，組織結(jié)構(gòu)的保存和抗原性等的改變程度有多方面的影響因素，主要包括：溫度、抗原、固定液的pH值、固定劑種類、灌注速度和進(jìn)行固定后處理方法等方面。

在本實驗中，所選用得CK7、ER和C-erbB-2抗體，進(jìn)行了在不同抗原修復(fù)液，在立即固定、延遲12小時固定、延遲24小時固定和延遲48小時固定的4組乳癌組織中，并且最終標(biāo)記了細(xì)胞漿、細(xì)胞核和細(xì)胞膜等部位的相應(yīng)蛋白。通過實驗看出，在抗原修復(fù)液E和F及在延遲48小時中的不到明確的膜陽性。因此，延遲固定對膜蛋白免疫組化效果的影響更明顯。延遲固定大幅弱化了免疫組化效果，其中的原因可能是延遲固定和內(nèi)外源性蛋白酶對部分蛋白的降解，以及部分蛋白向周圍擴(kuò)散造成?？乖迯?fù)液E和F延遲固定太長，不太適宜進(jìn)行檢測，而抗原修復(fù)液A、B、C和D可以進(jìn)行延遲固定組織免疫組化檢測?？梢缘贸?，盡管在實驗中免疫組化效果變差，但是可以分辨出特定部位的陽性結(jié)果。因此，對延遲固定組織只要充分固定和選用抗原修復(fù)液抗原修復(fù)液A、修復(fù)液B、修復(fù)液C和修復(fù)液D可以做免疫組化檢測的，同時應(yīng)注意減少實驗延遲固定時間。

綜上所述，對于那些客觀因素造導(dǎo)致延遲固定標(biāo)本，在其延遲時間未達(dá)到48小時之前，并且沒有進(jìn)行免疫組化輔助診斷，可以選用抗原修復(fù)液A、B、C和D進(jìn)行免疫組化檢測。應(yīng)當(dāng)注意的，判定檢測結(jié)果應(yīng)充分考慮到延遲固定帶來的影響。因此，只要通過有效的措施排除了延遲固定產(chǎn)生的不良影響，免疫組化在一定意義上能夠起到輔助診斷的作用。

參考文獻(xiàn)

[1] 楊美娟.組織標(biāo)本固定方法與免疫組織化學(xué)染色效果的關(guān)系[J].解剖科學(xué)進(jìn)展，2003，9（1）：89-90.

[2] D'Alfonso T，Liu YF，Monni S，et al.Accurately assessing her-2/neu status in needle core biopsies of breast cancer patients in the era of neoadjuvant therapy： emerging questions and considerations addressed[J].Am J Surg Pathol，2010，34（4）：575-581.

[3] 吳秉銓，劉彥仿.免疫組織化學(xué)病理診斷[M].北京：北京科學(xué)技術(shù)出版社，2007：10.

[4] 楊紅.免疫組化質(zhì)量控制中的3個基本影響因素[J].臨床與實驗病理學(xué)雜志，2001，17（2）：183-185.

免疫組化技術(shù)范文第5篇

關(guān)鍵詞：胸腔積液細(xì)胞塊；臨床病理技術(shù)；細(xì)胞塊切片；免疫組化染色

【中圖分類號】R561 【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A 【文章編號】1672-8602（2015）05-0072-02

胸腔積液主要是由非小細(xì)胞肺癌?肺腺癌以及惡性間皮癌引起的，在臨床上主要依據(jù)細(xì)胞涂片來進(jìn)行檢查診斷，具有78%左右的診斷敏感度[1]?不過，這種診斷方法不能有效鑒別轉(zhuǎn)移性癌和原發(fā)性間皮腫瘤，嚴(yán)重影響該疾病的臨床治療效果?現(xiàn)階段有資料顯示采用細(xì)胞塊切片并免疫組化染色進(jìn)行診斷的效果要更加理想?為此，本文對細(xì)胞塊切片并免疫組化染色應(yīng)用在胸腔積液診斷中的臨床效果進(jìn)行了詳細(xì)的研究，并取得了一定的成果，現(xiàn)報告如下?

1資料與方法

1.1一般資料

從我院在2011年11月至2014年10月期間收治的胸腔積液患者中選取78例作為本研究對象，均以胸腔積液作為送檢標(biāo)本，對所有患者進(jìn)行常規(guī)的細(xì)胞涂片和細(xì)胞塊切片并免疫組化染色兩種方法的檢查診斷?在78例患者中有41例男性患者，37例女性患者，他們的年齡在18歲-75歲之間?所有患者均是自愿參與本研究并已簽署知情同意書，且在性別?年齡等方面無明顯差別，P>0.05，無統(tǒng)計學(xué)意義，具有可比性?

1.2診斷方法

護(hù)理人員需要在患者住院的第二天進(jìn)行100毫升新鮮胸腔積液的收集，分別裝在4支試管中，同時進(jìn)行離心操作，設(shè)置2500r/min為離心轉(zhuǎn)速，10-15min為離心時間?離心完成之后應(yīng)用移液槍對上清液進(jìn)行吸出，然后通過常規(guī)細(xì)胞涂片方法對部分沉渣進(jìn)行檢查?

剩余沉渣則需要進(jìn)行合并處理，然后通過2.5毫升戊二醛的加入進(jìn)行固定并離心，設(shè)置2500r/min為離心轉(zhuǎn)速，5min為離心時間?離心完成之后應(yīng)用移液槍對上清液進(jìn)行吸出，然后用濾紙將取出之后的沉渣進(jìn)行包裹，采用常規(guī)方法進(jìn)行脫水，采用石蠟包埋方法對其進(jìn)行切片并檢查?

對兩組檢查方法分別進(jìn)行HE和免疫組化染色?免疫組化染色可以通過免疫組織化學(xué)的Maxvision快捷方法來進(jìn)行，其中所應(yīng)用到的Maxvision試劑盒?DAB顯色試劑以及CEA?CK7和CR?WT-1抗體均來自福州邁新有限公司?染色過程需要根據(jù)試劑盒說明來嚴(yán)格進(jìn)行?

1.3臨床觀察指標(biāo)

對兩組方法的診斷陽性率進(jìn)行對比分析，其中，在胞漿或是胞漿胞膜中CEA和CK7同時有棕黃色出現(xiàn)，在細(xì)胞膜或是細(xì)胞漿膜以及細(xì)胞核和細(xì)胞漿中Calretinin有棕黃色出現(xiàn)，在細(xì)胞核中WT-1有黃色顆粒出現(xiàn)，在腺癌或間皮細(xì)胞的細(xì)胞陽性大于10%，這些現(xiàn)象均可以視為陽性診斷?

1.4統(tǒng)計學(xué)方法

本研究分析和處理數(shù)據(jù)采用的是SPSS15.0統(tǒng)計學(xué)軟件包，采用卡方檢驗，計數(shù)資料采用（n，%）表示，P

2結(jié)果

經(jīng)過常規(guī)的細(xì)胞涂片檢查方法診斷，在78例患者中有43例陽性，其陽性率為55.1%，經(jīng)過細(xì)胞塊切片并免疫組化染色檢查方法診斷，在78例患者中有78例陽性，其陽性率為100%，對比發(fā)現(xiàn)后者要明顯高于前者，P

3結(jié)論

在胸部腫瘤中，最為常見的一種并發(fā)癥就是胸腔積液[2]，出現(xiàn)此并發(fā)癥后，患者的腫瘤和間皮細(xì)胞均會處于一個胸腔積液浸泡的狀態(tài)，容易使這兩種細(xì)胞的形態(tài)學(xué)發(fā)生變化，進(jìn)而影響常規(guī)方法的鑒別診斷效果[3]?以往采用細(xì)胞涂片作為檢查診斷的主要方法，其具有操作簡單?對細(xì)胞形態(tài)特點進(jìn)行保持的優(yōu)點，但是在診斷敏感度方面，特別是診斷胸腔積液的敏感度較弱?采用細(xì)胞塊切片并免疫組化染色的檢查診斷方法可以通過處于已標(biāo)記狀態(tài)的特異性抗體對細(xì)胞內(nèi)部的未知抗原進(jìn)行檢測，同時還可以利用酶的著色反應(yīng)來對細(xì)胞活性?分布以及鄧偉等進(jìn)行顯示?該方法具有非常高陽性率，操作簡單，而且還可以對細(xì)胞圖片的缺點進(jìn)行良好的彌補(bǔ)，提高檢查診斷的準(zhǔn)確率?在本研究中，細(xì)胞塊切片并免疫組化染色診斷的陽性率要明顯高于細(xì)胞涂片診斷的陽性率，P

綜上所述，在胸腔積液的臨床診斷中應(yīng)用細(xì)胞塊切片并免疫組化染色的效果較為明顯，值得在臨床上得到進(jìn)一步推廣與應(yīng)用?

參考文獻(xiàn)

[1] 斯向東，李慶.細(xì)胞塊切片及免疫組化在惡性漿膜腔積液診斷中的應(yīng)用體會[J].中國現(xiàn)代醫(yī)生，2011，49（28）：114-115.