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細(xì)胞免疫治療范文第1篇

【關(guān)鍵詞】DC-CIK細(xì)胞免疫；惡性腫瘤；臨床分析

【中圖分類號(hào)】R4 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】B 【文章編號(hào)】1671-8801（2015）06-0067-02

大多數(shù)的惡性腫瘤與人體的免疫功能之間具有緊密聯(lián)系，機(jī)體的免疫功能逐漸下降和失調(diào)，就會(huì)加大惡性腫瘤的發(fā)生率。由于免疫系統(tǒng)對(duì)惡變的細(xì)胞沒(méi)有識(shí)別和清除作用，從而容易導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞能夠逃脫免疫系統(tǒng)的屏障，對(duì)人體造成一定的影響[1]。在惡性腫瘤的治療方面，傳統(tǒng)治療方式主要是通過(guò)放化療來(lái)殺傷惡性腫瘤，并且需要在機(jī)體免疫功能的幫助下才能夠完成。其治療效果較低，對(duì)患者的影響較大，因此，需要研究出更加有效的治療方式。本研究通過(guò)采用DC-CIK細(xì)胞免疫治療方式治療惡性腫瘤，并取得了較好的治療效果，現(xiàn)報(bào)道如下：

1.資料與方法

1.1一般資料

選取我院2014年2月至2015年2月收治的21例惡性腫瘤患者，男性14例，女性7例，年齡段為42-75歲，平均年齡為（56.2±3.4）歲。所有患者均為肝癌患者。

1.2方法

1.2.1DC、CIK細(xì)胞的培養(yǎng)

樹(shù)突狀細(xì)胞DC培養(yǎng)：首先，需要通過(guò)血細(xì)胞分離機(jī)將患者外周血單個(gè)核細(xì)胞，通過(guò)使用1.077g/ml的淋巴細(xì)胞分離液分離，并將其分離出來(lái)的單個(gè)核細(xì)胞洗滌兩次后，使用相關(guān)的無(wú)血清培養(yǎng)基將其混懸在細(xì)胞培養(yǎng)裝置中，并放入到溫度為37℃的5%二氧化碳培養(yǎng)箱中，兩小時(shí)之后移出，并加入1000μ/ml人粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子GM-CSF和500μ/mlIL-4進(jìn)行培養(yǎng)，每隔兩到三天換液一次，并且對(duì)其細(xì)菌和真菌培養(yǎng)進(jìn)行檢測(cè)。另外，CIK細(xì)胞的培養(yǎng)時(shí)，可將上述的懸浮細(xì)胞通過(guò)無(wú)血清培養(yǎng)基進(jìn)行適當(dāng)?shù)恼{(diào)整，并加入適量的CD3單抗細(xì)胞，同樣放在溫度為37℃的5%二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)，并加入適量的γ-干擾素、IL-2，每隔兩到三天換液一次，并且對(duì)其細(xì)菌和真菌培養(yǎng)進(jìn)行檢測(cè)，通過(guò)誘導(dǎo)證實(shí)為DC細(xì)胞和CIK細(xì)胞。

1.2.2DC、CIK細(xì)胞的回輸

在細(xì)胞培養(yǎng)的時(shí)候，需要對(duì)細(xì)菌霉菌進(jìn)行檢測(cè)，如果其檢測(cè)為陰性，且活細(xì)胞超過(guò)90%后，DC需要使用細(xì)胞刷取細(xì)胞，通過(guò)一系列的離心、洗滌處理后，根據(jù)患者不同的病情分為腋下注射、雙側(cè)頸部注射以及淋巴引流區(qū)皮下注射。另外CIK通過(guò)一系列離心、洗滌之后，采取靜脈注射。

2.結(jié)果

所有患者通過(guò)治療后，有1例患者由于治療無(wú)效死亡，其余患者的癥狀均得到好轉(zhuǎn)?；颊叩牟∏榈玫接行У木徑猓杂X(jué)癥狀均消失，睡眠質(zhì)量有所提高，免疫力逐漸增加。其中有1例患者通過(guò)化療后無(wú)明顯改善，通過(guò)1個(gè)療程的免疫治療后，其影像學(xué)對(duì)比顯示病灶明顯縮小。

3.討論

在臨床醫(yī)學(xué)中，針對(duì)惡性腫瘤的治療，通常會(huì)采取手術(shù)治療、化療、生物免疫治療以及放療等方式。上述幾種方式在治療腫瘤的時(shí)候，雖然可以有效的緩解腫瘤的惡化，但是治標(biāo)不治本，并且存在一定的缺陷和不足，尤其是化療治療會(huì)產(chǎn)生較大的副作用，最明顯的是患者頭發(fā)脫落。不僅影響患者的美觀，還會(huì)對(duì)患者生理以及心理產(chǎn)生一定的影響。DC-CIK細(xì)胞免疫治療主要是在上個(gè)世紀(jì)八十年代開(kāi)始研發(fā)和使用的，通過(guò)對(duì)淋巴因子激活的殺傷細(xì)胞以及單抗激活的殺傷細(xì)胞等進(jìn)行研究和分析，這些細(xì)胞均具有一個(gè)共同的特點(diǎn)，具有較強(qiáng)的殺腫瘤活性，但是其細(xì)胞的擴(kuò)增比較緩慢，細(xì)胞的殺瘤活性不夠強(qiáng)，在臨床上應(yīng)用具有一定的局限性。相關(guān)研究者報(bào)道，CIK細(xì)胞可以通過(guò)人體外周血單個(gè)核細(xì)胞的分離，并在體外多種細(xì)胞因子的環(huán)境下，與單抗激活的殺傷細(xì)胞一同培養(yǎng)后，獲得一種全新的細(xì)胞，稱之為自然殺傷細(xì)胞樣T淋巴細(xì)胞，該細(xì)胞不僅具備T淋巴細(xì)胞抗瘤活性的特點(diǎn)，還具備NC細(xì)胞的殺瘤作用，與傳統(tǒng)的免疫療法相比，CIK細(xì)胞的治療效果更好，已經(jīng)成為惡性腫瘤治療中的新興治療方法[2]。

DC（樹(shù)突狀細(xì)胞）其抗原呈遞功能較強(qiáng)，具有較好的調(diào)控作用，可以在腫瘤的免疫和調(diào)解中發(fā)揮出較大的作用。DC不僅具有激活原始T細(xì)胞增殖的作用，還具有較強(qiáng)的抗原傳遞能力，并且與CIK細(xì)胞相結(jié)合，可以將兩者的優(yōu)勢(shì)和作用優(yōu)化與整合，在治療惡性腫瘤的過(guò)程中，能夠發(fā)揮出最大化的作用和效果[3]。

本研究通過(guò)對(duì)我院收治的21例惡性腫瘤患者進(jìn)行分析研究，結(jié)果顯示，通過(guò)采用DC-CIK細(xì)胞免疫治療，取得了較好的治療效果，患者的癥狀均得到好轉(zhuǎn)，自覺(jué)癥狀均消失，睡眠質(zhì)量有所提高，免疫力逐漸增強(qiáng)。其中有1例患者通過(guò)化療后無(wú)明顯改善，通過(guò)1個(gè)療程的免疫治療后，其影像學(xué)對(duì)比顯示病灶明顯縮小。表明采用DC-CIK細(xì)胞免疫法治療惡性腫瘤，可以有效的提高治療效果，增強(qiáng)細(xì)胞的抗腫瘤效果，在臨床治療惡性腫瘤的過(guò)程中，是一種比較理想的方法。

綜上所述，采用DC-CIK細(xì)胞免疫治療惡性腫瘤具有較好的療效，且細(xì)胞增殖速度較快，其對(duì)機(jī)體免疫系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)和功能的損傷較小，并且具有較強(qiáng)的殺瘤作用，但是由于DC-CIK細(xì)胞免疫治療方法的臨床應(yīng)用時(shí)間較短，還有較多的問(wèn)題需要優(yōu)化和完善。

參考文獻(xiàn)：

[1]黃文榮，張伯龍.細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷（CIK）細(xì)胞的研究現(xiàn)狀[J].腫瘤防治研究，2010，14（02）：105-106.

細(xì)胞免疫治療范文第2篇

【關(guān)鍵詞】 細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞;免疫治療;腎癌;護(hù)理

DOI：10.14163/ki.11-5547/r.2015.03.139

細(xì)胞免疫治療法是一種應(yīng)用最廣、最成熟的腫瘤生物治療技術(shù)。通過(guò)在實(shí)驗(yàn)室中應(yīng)用高端生物技術(shù)對(duì)殺癌免疫細(xì)胞進(jìn)行大量的活化培養(yǎng)， 使其具有高效識(shí)別和殺滅癌細(xì)胞的能力， 再回輸?shù)交颊唧w內(nèi)， 以達(dá)到治療腫瘤的目的。CIK細(xì)胞即細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞是將人體外周血單個(gè)核細(xì)胞在體外用多種細(xì)胞因子共同培養(yǎng)后而獲得的一群異質(zhì)細(xì)胞， 具有強(qiáng)大的抗瘤活性和非限制性殺瘤的優(yōu)點(diǎn)。有著廣泛的適用性， 對(duì)腎癌有極強(qiáng)的殺傷活性（60%～90%）。CIK是一種新型高效且具有廣譜惡殺腫瘤的免疫活性細(xì)胞[1]。CIK細(xì)胞治療是目前免疫細(xì)胞療法中常見(jiàn)的治療方法， 適用性廣。本科近期收治1例腎癌伴肺轉(zhuǎn)移患者， 經(jīng)過(guò)1個(gè)療程14次CIK細(xì)胞回輸?shù)交颊唧w內(nèi)， 取得了滿意的治療效果?，F(xiàn)將護(hù)理體會(huì)匯報(bào)如下。

1 臨床資料

患者， 男， 51歲， 因“左腎癌術(shù)后4年余， 發(fā)現(xiàn)雙肺轉(zhuǎn)移半年余”于2014年3月20日收治入科， 患者無(wú)誘因出現(xiàn)無(wú)痛性血尿， 系統(tǒng)檢查診斷為：左腎癌。2010年5月20日行左腎切除術(shù)。術(shù)后病理：腎透明細(xì)胞癌， 于干擾素治療3個(gè)月， 定期復(fù)查。2013年4月11日復(fù)查CT示：雙肺結(jié)節(jié)， 疑轉(zhuǎn)移， 未行治療。近來(lái)本科就診， 病情進(jìn)展， 無(wú)咳嗽、發(fā)熱、胸悶等主訴， 精神食欲可， 大小便正常， 要求細(xì)胞免疫治療。查體：一般狀況可， 神志清， 精神可， 發(fā)育正常， 營(yíng)養(yǎng)中， 等， 自動(dòng)， 步入病房， 皮膚鞏膜無(wú)黃染， 心肺正常， 腹平軟、切口瘢痕愈合佳， 無(wú)壓痛， 肝脾不腫大， 無(wú)移動(dòng)性濁音， 腸鳴音正常。診斷：左腎癌， 術(shù)后雙肺轉(zhuǎn)移。

2 護(hù)理方法

2. 1 心理護(hù)理 絕大部分的癌癥患者都接受過(guò)多種治療， 不僅身體受到了各種治療后副作用的影響， 同時(shí)也付出了大量的財(cái)力， 且疾病的預(yù)后仍不容樂(lè)觀， 患者及家屬心理負(fù)擔(dān)大。CIK細(xì)胞回輸是一種全新的腫瘤生物治療方法， 患者及家屬要花更多的時(shí)間來(lái)接受和認(rèn)可它[2]。護(hù)士應(yīng)用通俗易懂的語(yǔ)言讓患者及其家屬了解細(xì)胞免疫治療的原理、方法等。通過(guò)反復(fù)講解， 使患者及家屬解除疑惑和恐懼心理， 爭(zhēng)取患者及家屬的全力配合[3]。因此護(hù)理人員對(duì)患者及家屬提出的疑問(wèn)應(yīng)耐心解釋及時(shí)正確回答患者及家屬的問(wèn)題， 使其解除顧慮， 樹(shù)立戰(zhàn)勝疾病的信心， 保證患者順利度過(guò)整個(gè)治療過(guò)程， 提高護(hù)理質(zhì)量。

2. 2 細(xì)胞采集的護(hù)理

2. 2. 1 細(xì)胞采集前的護(hù)理 采血前1 d責(zé)任護(hù)士到床邊進(jìn)行健康教育， 告知患者及家屬細(xì)胞采集前1 d及采血當(dāng)天可以進(jìn)食， 但應(yīng)以清淡飲食為主， 并保證充足的睡眠， 盡量避免到人多密集的公共場(chǎng)所， 注意保暖， 防止受涼感冒。采血當(dāng)天復(fù)查血常規(guī)、肝功能、凝血功能等指標(biāo)。采血室采血前1 h停止人員走動(dòng)， 紫外線消毒室內(nèi)1 h。

2. 2. 2 細(xì)胞采集時(shí)及采集后的護(hù)理 采血操作是一項(xiàng)無(wú)菌操作， 由受過(guò)專業(yè)培訓(xùn)的護(hù)士操作， 操作前戴口罩。使用一次性血細(xì)胞分離機(jī)分離吸附置換治療套件（型號(hào) PIYA white blood cell set）， 根據(jù)患者的身高、體重等調(diào)節(jié)參數(shù)， 一般調(diào)至4個(gè)循環(huán)。操作前講解采血注意事項(xiàng)及所需時(shí)間， 以取得患者配合。囑患者平臥， 放松心態(tài)， 告知患者如有不適及時(shí)示意護(hù)士， 整個(gè)采血過(guò)程中由1名專職護(hù)士陪同并持續(xù)心電、血壓、血氧飽和度監(jiān)測(cè)， 必要時(shí)吸氧， 做好記錄。采血過(guò)程一般1 h左右， 由于時(shí)間較長(zhǎng)， 為了分散患者的注意力， 避免患者緊張導(dǎo)致血管收縮、痙攣， 護(hù)士與患者進(jìn)行有效的溝通， 并為患者提供輕松愉快的環(huán)境， 如聽(tīng)輕音樂(lè)等， 使患者情緒保持穩(wěn)定。及時(shí)記錄各項(xiàng)參數(shù)及患者反應(yīng)， 如有異常及時(shí)通知醫(yī)生進(jìn)行處理。細(xì)胞采集結(jié)束后， 拔針前教會(huì)患者正確按壓針眼的方法， 拔針后按壓穿刺處10 min左右， 直至不出血為止。告知患者穿刺處當(dāng)天不可洗浴， 以防穿刺處感染， 穿刺肢體避免劇烈運(yùn)動(dòng)， 保證足夠的睡眠， 避免勞累。囑患者平臥30 min， 無(wú)不適后方可離開(kāi)。

2. 3 CIK細(xì)胞回輸?shù)淖o(hù)理

2. 3. 1 CIK細(xì)胞回輸時(shí)注意事項(xiàng) 培養(yǎng)好的細(xì)胞由實(shí)驗(yàn)室醫(yī)師與回輸護(hù)士雙人共同核對(duì)， 無(wú)誤后簽字， 方可回輸給患者。細(xì)胞是血液制品， 使用一次性輸血器裝置進(jìn)行回輸， 回輸前用0.9%生理鹽水50 ml緩慢沖管， 確保在血管內(nèi)。準(zhǔn)確核對(duì)患者姓名后， 換注CIK細(xì)胞輸注， 應(yīng)快速輸入， 每3～5分鐘輕輕搖動(dòng)細(xì)胞瓶1次， 以防止細(xì)胞沉淀， 并保證在1 h內(nèi)輸完， 以維持細(xì)胞最佳活性， 保證回輸細(xì)胞質(zhì)量和數(shù)量?；剌斶^(guò)程中護(hù)士應(yīng)加強(qiáng)巡視， 仔細(xì)觀察患者反應(yīng)， 注意穿刺處有無(wú)紅腫、疼痛等反應(yīng)。若門診患者， 應(yīng)在回輸結(jié)束后囑患者觀察30 min，無(wú)不適后方可離開(kāi)。

2. 3. 2 常見(jiàn)不良反應(yīng)的觀察及護(hù)理 細(xì)胞回輸最主要及常見(jiàn)的不良反應(yīng)是發(fā)熱， 應(yīng)加強(qiáng)觀察患者體溫變化， 若體溫≤38.5℃， 給予多飲水， 物理降溫;若體溫>38.5℃， 應(yīng)通知醫(yī)生， 遵醫(yī)囑給予對(duì)癥處理， 出汗較多時(shí)應(yīng)及時(shí)更換衣服及床單位。同時(shí)消除患者的不安情緒， 安慰患者。但不可應(yīng)用地塞米松， 因地塞米松是一種免疫抑制劑， 可能會(huì)影響DC-CIK細(xì)胞療效[4]。其次若患者穿刺處皮膚發(fā)現(xiàn)紅腫、疼痛， 應(yīng)立即拔除針頭， 更換針頭后重新穿刺， 抬高患者， 并給予硫酸鎂外敷。

3 小結(jié)

CIK細(xì)胞是人外周血單個(gè)核細(xì)胞在體外經(jīng)過(guò)多種細(xì)胞因子培養(yǎng)后獲得的異質(zhì)細(xì)胞， 增殖活力強(qiáng)， 兼有T淋巴細(xì)胞強(qiáng)大的抗腫瘤活性， 輸入患者體內(nèi)后發(fā)揮特異性的抗腫瘤作用[5]。CIK細(xì)胞在實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)7～8 d后開(kāi)始回輸， 患者經(jīng)過(guò)1個(gè)療程的精心護(hù)理及治療， 病情穩(wěn)定， 生活質(zhì)量得到提高， 食欲增強(qiáng)， 睡眠改善， 患者壽命得以延長(zhǎng)。精心的護(hù)理和精湛的技術(shù)， 可消除患者精神上及肉體的痛苦， 增強(qiáng)患者對(duì)醫(yī)務(wù)人員的信任感[6]。

參考文獻(xiàn)

[1] 秦梅， 孫桂榮， 王懷翠.惡性腫瘤患者CIK細(xì)胞治療56例療效.齊魯護(hù)理雜志， 2009， 23（15）：16.

[2] 王元紅.靜脈輸注CIK細(xì)胞的護(hù)理體會(huì).海南醫(yī)學(xué)， 2009， 20（3）：264-265.

[3] 陳春霞.DC-CIK細(xì)胞免疫治療惡性腫瘤的護(hù)理. 現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志， 2009（6）：677-678.

[4] 程霞， 張曉實(shí)， 彭瑞清， 等.腫瘤負(fù)荷對(duì)CIK/IL-2臨床療效的影響.中國(guó)腫瘤臨床， 2005， 32（5）：847-848， 855.3.

[5] 胡相娟， 李碧軍， 潘東曉.等.CIK細(xì)胞治療惡性腫瘤的臨床觀察和護(hù)理.臨床醫(yī)學(xué)工程， 2009， 16（3）：79-801.

細(xì)胞免疫治療范文第3篇

記者：目前治療腫瘤技術(shù)有哪些方法?它們?cè)谂R床應(yīng)用中有哪些特點(diǎn)?

李忠義：目前，以手術(shù)為主，還有放療和化療，但副作用大，會(huì)引起患者惡心、迷糊、嘔吐、厭食、脫發(fā)。眾所周知，放、化療殺傷癌細(xì)胞的同時(shí)也殺死正常細(xì)胞，引起病人白細(xì)胞降低、免疫力下降、加速癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移，且反復(fù)使用導(dǎo)致病人對(duì)化療、放療不敏感。

大量的臨床結(jié)果證明，抗炎致敏樹(shù)突狀細(xì)胞(APDC)疫苗和放、化療結(jié)合治療效果更為明顯，不但能提高治愈率和緩解率，提高整體療效，而且能降低放、化療的副作用。

記者：樹(shù)突狀細(xì)胞為什么會(huì)對(duì)腫瘤治療產(chǎn)生影響?

李忠義：樹(shù)突狀細(xì)胞(dendritic cells Dc)是一類具有典型樹(shù)突狀形態(tài)、表面高表達(dá)MHC－Ⅱ類分子、能移行至淋巴器官和刺激初始型T細(xì)胞增殖活化的細(xì)胞。是已知的機(jī)體內(nèi)功能最強(qiáng)的抗原遞呈細(xì)胞(anttgen-presenting cells，APC)，也是目前發(fā)現(xiàn)的唯一能直接激活初始型T細(xì)胞的APc，能夠誘導(dǎo)患者機(jī)體產(chǎn)生腫瘤特異性、持久的主動(dòng)免疫應(yīng)答。

其特點(diǎn)為：(1)是機(jī)體內(nèi)功能最強(qiáng)、最有效的抗原遞呈細(xì)胞，能攝取各類抗原。(2)表達(dá)豐富的MHC分子、共刺激分子、黏附分子及高水平的Thl型應(yīng)答主導(dǎo)因子11－12。(3)顯著刺激初始型T細(xì)胞增殖，體內(nèi)、外均能激發(fā)T細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)特異性CTL生成。(4)由Dc激活的細(xì)胞免疫，特別是細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(CTL)介導(dǎo)的免疫反應(yīng)，在機(jī)體抵御惡性腫瘤和傳染性疾病中發(fā)揮著十分重要的作用。

記者：樹(shù)突狀細(xì)胞腫瘤免疫治療的原理是什么?

李忠義：人體在正常情況下，能夠通過(guò)免疫系統(tǒng)識(shí)別和清除突變的癌細(xì)胞，利用免疫監(jiān)視機(jī)制防止腫瘤的發(fā)生。但當(dāng)人體免疫力低下的時(shí)候腫瘤細(xì)胞可逃逸免疫監(jiān)督系統(tǒng)，抑制有效的免疫應(yīng)答，導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。

APDC疫苗是一種新的腫瘤免疫治療方法，是我院與上海第二軍醫(yī)大學(xué)免疫中心合作開(kāi)展的多項(xiàng)具有國(guó)際水平的生物治療項(xiàng)目之一，是腫瘤治療中的尖端技術(shù)。

大量的基礎(chǔ)和臨床研究的結(jié)果顯示，應(yīng)用APDC能夠激發(fā)機(jī)體腫瘤特異性的細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞，有效地殺傷腫瘤細(xì)胞，并且能夠建立起持久的抗腫瘤的特異性免疫應(yīng)答。因此，我們采用患者自身腫瘤細(xì)胞抗原，致敏患者自身樹(shù)突狀細(xì)胞，制備成瘤苗回輸患者，取得了滿意的結(jié)果。

目前我們研制的新型樹(shù)突狀細(xì)胞瘤苗“抗原致敏的人樹(shù)突狀細(xì)胞”已通過(guò)期臨床研究，經(jīng)國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)并經(jīng)過(guò)臨床藥理委員會(huì)通過(guò)，進(jìn)行并完成了Ⅱ期臨床研究。

APDC疫苗是一種對(duì)不同腫瘤病人分別進(jìn)行的治療，具有高度的個(gè)性化、較好的臨床療效以及良好的安全性，在國(guó)際學(xué)術(shù)會(huì)議上和我國(guó)學(xué)術(shù)界均受到高度評(píng)價(jià)。美國(guó)杜克大學(xué)遺傳和細(xì)胞治療中心的研究主任埃利一吉爾波瓦說(shuō)過(guò)”APDC是激發(fā)機(jī)體免疫系統(tǒng)抵御癌癥侵襲的有效途徑之一。”

記者：樹(shù)突狀細(xì)胞腫瘤免疫治療將對(duì)腫瘤治療產(chǎn)生什么樣的影響?

李忠義：采用“抗原致敏的人樹(shù)突狀細(xì)胞”進(jìn)行腫瘤生物基因治療。樹(shù)突狀細(xì)胞(Dendritic Cell，DC)是目前發(fā)現(xiàn)的功能最強(qiáng)的專職性抗原遞呈細(xì)胞(Antigen-presenting Cells，APC)，能攝取和加工遞呈抗原，具有強(qiáng)大的激活T細(xì)胞的能力，控制著體內(nèi)免疫反應(yīng)的過(guò)程，在免疫應(yīng)答中處于中心地位，因而成為腫瘤免疫反應(yīng)的中心環(huán)節(jié)。

樹(shù)突狀細(xì)胞腫瘤疫苗技術(shù)在第37-39屆ASCO和第7屆CSCO年會(huì)上成為最令人囑目、最鼓舞人心的焦點(diǎn)。國(guó)際著名免疫學(xué)家肯蕭特曼教授認(rèn)為：這是一項(xiàng)令該領(lǐng)域的絕大多數(shù)研究者驚奇和關(guān)注的工作。這一發(fā)現(xiàn)是免疫學(xué)理論的重要突破，將帶動(dòng)免疫學(xué)領(lǐng)域的發(fā)展。

記者：使用該技術(shù)一個(gè)療程需要多長(zhǎng)時(shí)間?

李忠義：采用患者術(shù)后留取的腫瘤組織制備多肽抗原(也可采用中心抗原庫(kù)提供和制備的腫瘤多肽抗原)和分采的血液中提取“樹(shù)突狀細(xì)胞”，進(jìn)行自體細(xì)胞體外誘導(dǎo)培養(yǎng)擴(kuò)增，而后分4次回輸患者體內(nèi)，用大量增殖的APDC喚醒免疫系統(tǒng)，對(duì)癌細(xì)胞發(fā)起攻擊，消滅癌細(xì)胞，22天為一個(gè)療程。

記者：在什么時(shí)候?qū)嵤┰摷夹g(shù)治療效果最好?不同階段實(shí)施該技術(shù)后有什么樣不同的效果?

李忠義：手術(shù)后的患者更適合進(jìn)行生物治療，既能防止癌細(xì)胞的復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移，又能殺死已經(jīng)轉(zhuǎn)移而且檢測(cè)不到的單個(gè)癌細(xì)胞。

專家簡(jiǎn)介：

細(xì)胞免疫治療范文第4篇

【關(guān)鍵詞】 封閉抗體； 復(fù)發(fā)性流產(chǎn)； 淋巴細(xì)胞； 免疫治療

【Abstract】 Objective：To investigate the clinical efficacy of recurrent spontaneous abortion （RSA） using lymphocytes active immunotherapy.Method：80 cases of patients with RSA which were diagnosed by blocking antibody screening were randomly divided into the treatment group（40 patients） and the control group （40 patients）.The patients in the treatment group were treated by LIT with peripheral blood lymphocytes，the patients in the control group with traditional miscarriage treatment（progesterone plus hCG），then the pregnancy outcomes were compared.Result：In the treatment group，32 cases of pregnancy were treated successfully， and the success rate was 80%，including 16 patients with full-term delivery （50%），16 cases with late pregnancy， 8 cases of abortion.In the control group，there were 16 cases with successful pregnancy，the success rate was 40%，including six cases with term birth（37.5%），10 cases with late pregnancy，24 cases of abortion.By comparison，there was significant difference in the two groups（P

【Key words】 Blocking antibodies； Recurrent spontaneous abortion； Lymphocytes； Immunotherapy

復(fù)發(fā)性流產(chǎn)（Recurrent Spontaneous Abortion，RSA）患者往往經(jīng)歷了多次妊娠后的自然流產(chǎn)（連續(xù)或不連續(xù)流產(chǎn)次數(shù)≥2次）[1]。是一種常見(jiàn)的妊娠期并發(fā)癥，發(fā)生率占育齡婦女的1%～5%。RSA可有單一病因或多病因引發(fā)，其病因復(fù)雜性較高，已知引起復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的常見(jiàn)原因有：染色體異常、生殖系統(tǒng)機(jī)能紊亂及結(jié)構(gòu)畸形、內(nèi)分泌失調(diào)、婦科感染等，此外應(yīng)強(qiáng)調(diào)，近年來(lái)發(fā)現(xiàn)封閉抗體缺乏也會(huì)導(dǎo)致RSA。相關(guān)文獻(xiàn)表明，復(fù)發(fā)性流產(chǎn)原因不明患者達(dá)到52%以上，其中與免疫因素有關(guān)的RSA患者又達(dá)到79%以上[2]。目前，治療RSA的方法中，以淋巴細(xì)胞主動(dòng)免疫為主。國(guó)外對(duì)主動(dòng)免疫治療RSA的作用機(jī)制進(jìn)行了研究，尚未完全闡明。我國(guó)也已經(jīng)將主動(dòng)免疫治療RSA應(yīng)用于臨床中，相關(guān)報(bào)道顯示，患者再次妊娠成功率不盡相同[3-4]。選擇2010年12月-2012年12月自然流產(chǎn)或胚胎停育2次或2次以上的RSA患者（自愿參與治療），經(jīng)臨床篩查證實(shí)40例患者均由于缺乏封閉抗體缺乏而致RSA，并對(duì)40例患者進(jìn)行淋巴細(xì)胞免疫治療，療效明顯，詳細(xì)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取深圳仁愛(ài)醫(yī)院2010年12月-2012年12月不明原因早期自然流產(chǎn)（包括生化妊娠，IVF-ET種植失?。┘芭咛ネＳ?次或2次以上的RSA患者（自愿參與治療）80例，經(jīng)臨床篩查證實(shí)患者均由于缺乏封閉抗體缺乏而致的RSA，40例患者采用淋巴細(xì)胞主動(dòng)免疫進(jìn)行治療（LIT）。另40例作為對(duì)照組，對(duì)照組采用傳統(tǒng)保胎治療（黃體酮加hCG）。治療組年齡23～41歲，平均28.3歲；2次自然流產(chǎn)者21例（其中有2例2次IVF-ET種植后流產(chǎn)者），3次自然流產(chǎn)者6例，4次自然流產(chǎn)者3例，5次自然流產(chǎn)者2例，5次以上自然流產(chǎn)者2例，2～3次胚胎停育者5例，孕3胚胎停育2產(chǎn)1者1例。對(duì)照組年齡19～43歲，平均29.1歲，有2次自然流產(chǎn)者29例，3次流產(chǎn)者11例。兩組一般資料比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。

1.2 研究方法

1.2.1 流產(chǎn)的病因篩查及方法 本研究中，要求所有研究對(duì)象簽署知情同意書。所有RSA患者符合以下條件：（1）封閉抗體檢查陰性；（2）生化妊娠及早期（12 W前）自然流產(chǎn)史≥2次，或胚胎停育≥2次，或自然流產(chǎn)+胚胎停育≥2次；（3）夫婦雙方染色體檢查正常，無(wú)家族遺傳病史；（4）雙方行TORCH（包括巨細(xì)胞病毒、風(fēng)疹病毒、單純皰疹病毒和弓形體）、梅毒、HIV、乙型肝炎、丙型肝炎檢查均為陰性；（5）生殖道衣原體、支原體、淋球菌等檢查均為陰性；（6）內(nèi)分泌檢查、甲狀腺功能及空腹血糖正常；（7）抗抗體、抗子宮內(nèi)膜抗體、抗卵巢抗體、抗心磷脂抗體均為陰性；（8）排除生殖道畸形和形態(tài)學(xué)異常；（9）分析男方，各項(xiàng)指標(biāo)顯示正常；（10）治療前，所有患者未使用過(guò)影響免疫功能的藥物。

1.2.2 治療方法 對(duì)照組采用傳統(tǒng)保胎治療（黃體酮加hCG）。治療組采用淋巴細(xì)胞主動(dòng)免疫（LIT）。治療方法：無(wú)菌下抽取患者丈夫或血緣親屬或無(wú)關(guān)自愿健康個(gè)體靜脈血20 mL，肝素抗凝，在無(wú)菌條件下分離淋巴細(xì)胞，將淋巴細(xì)胞懸液裝于注射器中，給予患者兩前臂內(nèi)側(cè)行多點(diǎn)皮下或皮內(nèi)注射，每側(cè)注射3～4點(diǎn)。2～3周治療1次，4～6次為一療程。治療一療程后復(fù)查封閉抗體，若已轉(zhuǎn)為陽(yáng)性，要求3～5個(gè)月內(nèi)盡快妊娠。確診妊娠后，再加強(qiáng)LIT一療程（2～3周1次，共4次）至妊娠14～16周。若轉(zhuǎn)陽(yáng)后半年內(nèi)仍未能妊娠，應(yīng)每隔8～10周鞏固一次LIT，以使封閉抗體不轉(zhuǎn)陰。部分復(fù)查封閉抗體陰性者，再加強(qiáng)LIT治療2次，若仍未轉(zhuǎn)陰也可考慮備孕。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 17.0軟件對(duì)本次研究所有數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料用 字2檢驗(yàn)，P

2 結(jié)果

2.1 兩組妊娠成功率比較 治療組妊娠成功32例，8例流產(chǎn)，成功率為80%；對(duì)照組妊娠成功16例，24例流產(chǎn)，成功率為40%，兩組妊娠成功率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ 字2=12.03，P=0.0005），治療組明顯優(yōu)于對(duì)照組。詳見(jiàn)表1。

2.2 封閉抗體陽(yáng)性組與陰性組妊娠結(jié)局比較 主動(dòng)免疫治療后，34例患者封閉抗體轉(zhuǎn)為陽(yáng)性，其中妊娠成功29例，成功率為85.3%；6例封閉抗體仍為陰性者，妊娠成功2例，成功率為33.3%，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ 字2=5.20，P=0.022）。詳見(jiàn)表2。

3 討論

正常孕婦的血清中，存在一種特異性IgG抗體（抗配偶淋巴細(xì)胞的），現(xiàn)代生殖免疫學(xué)證實(shí)，該抗體可抑制MLR（淋巴細(xì)胞反應(yīng)）。封閉母體淋巴細(xì)胞的細(xì)胞毒作用，可作用于胚胎滋養(yǎng)層，使得輔助T細(xì)胞對(duì)胎兒抗原抑制物的識(shí)別無(wú)法正常完成；同時(shí)，母親免疫系統(tǒng)不會(huì)攻擊胚胎，也是由于封閉母體淋巴細(xì)胞的作用[5]。MIF，即封閉抗體，是封閉同種抗原刺激淋巴細(xì)胞產(chǎn)生的巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子，成為BA或稱為Antipaternallymphocyte anti body（簡(jiǎn)稱為APLA）。國(guó)外相關(guān)研究表明，缺乏封閉性抗體與復(fù)發(fā)性流產(chǎn)存在密切的關(guān)系。本次研究中，使用了淋巴細(xì)胞主動(dòng)免疫治療，該方法對(duì)RSA治療的效果較好，但作用機(jī)制不明。眾多學(xué)者對(duì)復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的治療進(jìn)行了持續(xù)的研究，黃芳等[6]通過(guò)黃酮體及hCG聯(lián)合淋巴細(xì)胞主動(dòng)免疫對(duì)42例復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者進(jìn)行了觀察，認(rèn)為該方案治療黃體功能不全導(dǎo)致的復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者的有效率達(dá)100%，治療封閉抗體陰性的復(fù)發(fā)流產(chǎn)患者后的妊娠率達(dá)57.89%，并認(rèn)為hCG及黃酮體聯(lián)合淋巴細(xì)胞主動(dòng)免疫是治療復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者的可靠方案；譚玉清等[7]采用丙種球蛋白聯(lián)合淋巴細(xì)胞免疫對(duì)84例復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者進(jìn)行了治療，認(rèn)為淋巴細(xì)胞主動(dòng)免疫聯(lián)合丙種球蛋白靜脈滴注治療復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者的妊娠成功率在90%以上，因此認(rèn)為該方案具有可靠的應(yīng)用價(jià)值。

對(duì)于封閉抗體陰性者，主要采用淋巴細(xì)胞免疫治療（LIT），等到患者體內(nèi)封閉抗體升高時(shí)進(jìn)行受孕，妊娠的成功率可達(dá)到80%～90%[8]。Beer和Tayor于二十世紀(jì)七十年代創(chuàng)立，并于1978年開(kāi)始應(yīng)用于RSA的一種免疫療法。對(duì)同種免疫型RSA患者采用丈夫或他人淋巴細(xì)胞進(jìn)行同種致敏治療，抑制母胎間的細(xì)胞性免疫性排斥反應(yīng)，減少流產(chǎn)率。梁寶珠等[9]對(duì)100例確診的復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者進(jìn)行分析，認(rèn)為免疫治療后，封閉抗體陽(yáng)性率升高，從封閉抗體陽(yáng)性者妊娠成功率方面將，再次妊娠患者成功率明顯高于陰性者（P

臨床醫(yī)學(xué)界認(rèn)為，人類白細(xì)胞抗原Th1/Th2失衡及組織相容性與復(fù)發(fā)性流產(chǎn)存在相關(guān)性，Th2細(xì)胞是在正常妊娠情況下的主要細(xì)胞因子，而復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者的血清中Th1因子是主要的優(yōu)勢(shì)細(xì)胞，因此可以通過(guò)配偶淋巴細(xì)胞主動(dòng)免疫的方式對(duì)復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者進(jìn)行治療，通過(guò)提高母體Th2型細(xì)胞因子，控制Th1型細(xì)胞因子，增強(qiáng)母體的免疫耐受[10]。我國(guó)的彭桂元等采用淋巴細(xì)胞主動(dòng)免疫法治療991例RSA患者，治療效果明顯，患者妊娠成功率大大提高，可達(dá)到80%以上，提示在RSA治療方面，淋巴細(xì)胞主動(dòng)免疫治療具有較好療效[11]。本研究結(jié)果顯示，治療組和對(duì)照組的妊娠成功率分別為80%和40%，觀察組明顯優(yōu)于對(duì)照組（P

為此，應(yīng)將淋巴細(xì)胞主動(dòng)免疫治療應(yīng)用于RSA（缺乏封閉抗體）的臨床治療中，患者預(yù)后免疫反應(yīng)很強(qiáng)，基本未出現(xiàn)不良反應(yīng)，且妊娠成功率顯著提高，該方法具有較高的臨床應(yīng)用價(jià)值。

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細(xì)胞免疫治療范文第5篇

【關(guān)鍵詞】 骨肉瘤

【Abstract】 AIM: To evaluate the therapeutic effectiveness of tumor vaccine from fusion of dendritic cells (DCs) with the osteosarcoma cells in osteosarcoma. METHODS: The UMR106 cell line was injected subcutaneously into the SD rat thigh laterally to establish the animal model. DCs obtained from SD rat bone marrow were propagated in vitro under the condition of rGMCSF， rIL4 and nrhTNFα. DCs were purified by monoclonal antibody OX62 and magnetic beads. Then the UMR106 cell line was fused with DCs to obtain the tumor vaccine and the therapeutic effectiveness of the tumor vaccine to the original tumor and lung metastasis in the animal model was observed. RESULTS: Six weeks after the treatment with tumor vaccine， the weight of the original tumor and the rate of lung metastasis in the therapeutic group were both largely reduced compared with those in control groups （P

【Keywords】 dendritic cells；osteosarcoma；immunotherapy

【摘要】 目的: 探討大鼠樹(shù)突狀細(xì)胞(dendritic cells， DCs)融合瘤苗在骨肉瘤免疫治療中的應(yīng)用. 方法: 用大鼠骨肉瘤細(xì)胞系UMR106建立大鼠骨肉瘤動(dòng)物模型，應(yīng)用重組大鼠rGMCSF， rIL4和nrhTNFα培養(yǎng)大鼠骨髓前體細(xì)胞獲得大量DCs，經(jīng)標(biāo)抗大鼠OX62 mAb免疫磁珠分離純化后的DCs經(jīng)形態(tài)學(xué)觀察、表型檢測(cè)、功能學(xué)實(shí)驗(yàn)鑒定，然后將細(xì)胞系UMR106與大鼠樹(shù)突狀細(xì)胞融合作為瘤苗應(yīng)用于荷瘤大鼠，觀察其抑制腫瘤生長(zhǎng)和肺轉(zhuǎn)移的效果. 結(jié)果: 在治療6 wk時(shí)治療組和對(duì)照組相比，瘤重明顯減?。≒

【關(guān)鍵詞】 樹(shù)突狀細(xì)胞；骨肉瘤；免疫治療

0引言

骨肉瘤是常見(jiàn)的惡性程度極高的骨源性腫瘤，患者往往在術(shù)前就已經(jīng)有了微小肺轉(zhuǎn)移灶，加之局部復(fù)發(fā)，預(yù)后很差. 由于放療的不敏感、化療的抗藥性等局限，臨床上愈加關(guān)注對(duì)骨肉瘤開(kāi)展免疫治療的研究，制備腫瘤疫苗為其主要手段之一. 樹(shù)突狀細(xì)胞(dendritic cells，DCs)是目前為止發(fā)現(xiàn)的功能最強(qiáng)的專職抗原提呈細(xì)胞（antigen presenting cell，APC），由于其形狀似樹(shù)突而得名. 它對(duì)誘導(dǎo)初次免疫應(yīng)答具有獨(dú)特的功能，能攝取和加工提呈抗原，表達(dá)高水平的MHC分子、共刺激分子、黏附分子并分泌高水平TH1型細(xì)胞因子IL12，啟動(dòng)T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng). 目前關(guān)于DCs在腫瘤免疫治療中的應(yīng)用，已經(jīng)成為腫瘤免疫治療的熱點(diǎn)之一. 我們應(yīng)用大鼠骨髓來(lái)源的DCs與大鼠骨肉瘤細(xì)胞系UMR106融合，制備腫瘤疫苗，觀察其治療效果，探討其臨床應(yīng)用的可能性.

1材料和方法

1.1材料

儀器和主要試劑: MiniMACS磁性分離儀(德國(guó)Miltenyi Biotec GmbH公司)；流式細(xì)胞儀(美國(guó)BD Phar Mingen公司)；細(xì)胞融合儀(BTX公司的2001型)；大鼠骨肉瘤細(xì)胞系UMR106(美國(guó)American Tissue Culture Collection）；6～8 wk齡SD大鼠(第四軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供)；小牛血清和RPMI 1640培養(yǎng)基(美國(guó)HyClone公司)；淋巴細(xì)胞分離液(上海華精生物高科技有限公司)；rGMCSF， rIL4 (R＆D公司)；新型重組人腫瘤壞死因子nrhTNFα(第四軍醫(yī)大學(xué)生物技術(shù)中心)；FITC標(biāo)記抗大鼠MHCⅠ和MHCⅡ， FITC標(biāo)記抗大鼠OX62， PE標(biāo)記抗大鼠CD80， PE標(biāo)記抗大鼠CD86(英國(guó)Serotec公司).

1.2方法

1.2.1細(xì)胞培養(yǎng)與融合

1.2.1.1制備大鼠骨髓細(xì)胞將健康雄性6～8 wk SD大鼠斷頸處死，浸入750 mL/L的乙醇中10 min，無(wú)菌手術(shù)取出雙側(cè)股骨和脛骨，剝凈肌肉組織，用PBS洗滌2遍，剪去骨兩端，再洗滌2遍；用無(wú)菌注射器抽取5 mL無(wú)血清RPMI 1640，將其針頭分別從兩端插入骨髓腔，反復(fù)沖洗出骨髓直至骨變白，收入50 mL離心管中，1500 r/min離心收集骨髓細(xì)胞，棄上清，沉淀細(xì)胞用5 mL無(wú)血清RPMI 1640重懸，再經(jīng)淋巴細(xì)胞分離液密度梯度離心，初步純化單個(gè)核細(xì)胞(mononuclear cells，MNCs)，離心洗滌2次，收集沉淀的骨髓細(xì)胞.

1.2.1.2DCs的培養(yǎng)擴(kuò)增取初步純化的MNCs，重懸于含100 mL/L的小牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)液中，置于50 mL細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，加細(xì)胞因子rGMCSF(終濃度為1×106 U/L)，rIL4（終濃度為0.5×106 U/L）及nrhTNFα(終濃度為1×106 U/L) ［1-3］，于37℃，50 mL/L CO2條件下培養(yǎng)，每3日半量換液，補(bǔ)加細(xì)胞因子1次，于第12日收獲懸浮細(xì)胞.

1.2.1.3DCs的形態(tài)學(xué)檢測(cè)倒置顯微鏡每日觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況及形態(tài)變化并攝片；掃描電鏡觀察由我校電鏡中心協(xié)助完成.

1.2.1.4DCs的表型檢測(cè)選用FITC標(biāo)記的MHCⅠ， MHCⅡ和OX62，PE標(biāo)記的CD80、CD86，分別收集誘導(dǎo)前4， 8和12 d細(xì)胞懸液，調(diào)整細(xì)胞密度至5×109/L，各取50 μL，加1∶20滅活正常兔血清10 μL，4℃封閉10 min，再分別加入上述mAb，4℃避光30 min，PBS洗2次，流式細(xì)胞儀檢測(cè).

1.2.1.5應(yīng)用標(biāo)抗大鼠OX62 mAb免疫磁珠分離純化DCs用MiniMACS分離柱篩選，標(biāo)記細(xì)胞在通過(guò)置于磁場(chǎng)中的分離柱時(shí)，去除膜表面不表達(dá)OX62的細(xì)胞，將分離柱移出磁場(chǎng)，加壓洗脫，收集OX62＋細(xì)胞，具體操作按說(shuō)明書進(jìn)行.

1.2.1.6骨肉瘤細(xì)胞的培養(yǎng)和融合大鼠骨肉瘤細(xì)胞系UMR106培養(yǎng)在含100 mL/L的小牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)液中，呈單層生長(zhǎng). 分別收集培養(yǎng)的DCs和骨肉瘤細(xì)胞，用細(xì)胞融合儀融合，操作按說(shuō)明書進(jìn)行.

1.2.1.7融合細(xì)胞的篩選待融合細(xì)胞在培養(yǎng)瓶中生長(zhǎng)24 h后，用MiniMACS分離柱篩選，去除膜表面不表達(dá)OX62的細(xì)胞，即去除未融合的腫瘤細(xì)胞.

1.2.1.8融合細(xì)胞的生長(zhǎng)特性將融合細(xì)胞接種在96孔培養(yǎng)板中，采用MTT比色法測(cè)定細(xì)胞生長(zhǎng)曲線.

1.2.1.9融合細(xì)胞的表型檢測(cè)同檢測(cè)DCs表型方法，流式細(xì)胞儀測(cè)定融合細(xì)胞表面MHCⅠ，MHCⅡ類抗原和OX62的表達(dá)水平.

1.2.2骨肉瘤大鼠模型的制備收集培養(yǎng)的UMR106，洗1次，調(diào)整細(xì)胞濃度，在每只SD大鼠右后肢外側(cè)皮下接種1×107個(gè)細(xì)胞，共60只雄性6～8 wk齡SD大鼠，體質(zhì)量（125.45±8.19）g.

1.2.3免疫治療大鼠在接種腫瘤細(xì)胞3 d后被隨機(jī)等分為3組進(jìn)行治療，即融合細(xì)胞治療組（DUF）、腫瘤細(xì)胞組（UMR）和生理鹽水對(duì)照組（CON）. 用于治療的2×106個(gè)融合細(xì)胞經(jīng)30 Gy的60Co射線照射后接種在腹股溝皮下，每周1次，連續(xù)5 wk，于第6周處死動(dòng)物，稱量腫瘤大小及肺轉(zhuǎn)移情況.

統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：各組腫瘤質(zhì)量比較采用KruskalWallis H檢驗(yàn)及Nemenyi法檢驗(yàn)，各組肺轉(zhuǎn)移率比較采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義.

2結(jié)果

2.1DCs的形態(tài)倒置顯微鏡下可見(jiàn)，前3 d大部分細(xì)胞呈貼壁生長(zhǎng)，體積小、形圓，細(xì)胞邊界光滑；4～8 d懸浮細(xì)胞數(shù)量增多，體積增大，細(xì)胞邊界漸趨粗糙；9～12 d大部分細(xì)胞呈懸浮生長(zhǎng)，細(xì)胞數(shù)量進(jìn)一步增多，體積進(jìn)一步增大，邊界可見(jiàn)明顯的毛刺樣突起（Fig 1）. 掃描電鏡見(jiàn)細(xì)胞表面存在大量褶皺和典型的不規(guī)則突起(Fig 2).

2.2DCs的表型檢測(cè)結(jié)果誘導(dǎo)前細(xì)胞表面各抗原陽(yáng)性率分別為OX62，7.48％；MHCⅠ，39.45％；MHCⅡ，28.24％；CD80，2.60％； CD86，6.08％. 經(jīng)rGMCSF， rIL4和nrhTNFα誘導(dǎo)活化并經(jīng)免疫磁珠分離純化后，各抗原陽(yáng)性率較誘導(dǎo)前均有不同程度的升高，分別為OX62，62.19％；MHCⅠ，70.40％；MHCⅡ，78.28％；CD80，55.58％； CD86，68.38％.

轉(zhuǎn)貼于

2.3融合細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線測(cè)定表明融合細(xì)胞較腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢（Fig 3）.

2.4融合細(xì)胞的表型檢測(cè)結(jié)果經(jīng)過(guò)篩選的融合細(xì)胞各種表面抗原的表達(dá)水平均較高，分別為OX62，88.26％；MHCⅠ，84.77％；MHCⅡ，85.87％.

2.5融合瘤苗誘導(dǎo)的原位瘤生長(zhǎng)抑制UMR106細(xì)胞接種的SD大鼠1 wk內(nèi)全部可以摸到腫瘤生長(zhǎng)（Fig 4），治療5 wk后處死動(dòng)物測(cè)定腫瘤大小并稱其質(zhì)量（Tab 1）.表1融合瘤苗治療效果的比較

2.6融合瘤苗對(duì)肺轉(zhuǎn)移的抑制對(duì)照組肺轉(zhuǎn)移率高達(dá)75％（Fig 5）；融合瘤苗治療組的肺轉(zhuǎn)移率明顯降低（Tab 1），且肺表面的轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)數(shù)也明顯減少，融合細(xì)胞治療組（DUF）、腫瘤細(xì)胞組（UMR）和生理鹽水對(duì)照組（CON）的平均肺轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)數(shù)分別為61， 164和188.

3討論

APC主要包括巨噬細(xì)胞、樹(shù)突狀細(xì)胞和活化的B淋巴細(xì)胞，它們表面均表達(dá)高水平的MHC抗原和共刺激分子. 本實(shí)驗(yàn)室在1999年成功制備了巨噬細(xì)胞融合細(xì)胞瘤苗［4］，并在臨床試驗(yàn)中取得了較滿意的結(jié)果. DCs表面的MHC/抗原肽段表達(dá)水平比巨噬細(xì)胞和B細(xì)胞高10～100倍，因此其抗原呈遞能力強(qiáng)于巨噬細(xì)胞，DCs可呈遞pmol/L和nmol/L水平的抗原，而其他APC只能呈遞mmol/L水平的抗原，體內(nèi)體外，僅需少量DCs即可啟動(dòng)T細(xì)胞免疫. 但DCs在血液和組織中含量稀少，只占PBMC的0.1％～0.5％［5］，體外誘導(dǎo)相對(duì)困難，極大限制了DCs的研究和應(yīng)用. 我們采用重組大鼠rGMCSF， rIL4和nrhTNFα聯(lián)合誘導(dǎo)大鼠骨髓前體細(xì)胞，經(jīng)體外擴(kuò)增后從每只大鼠骨髓中可以獲得1×107的DCs，基本可以滿足實(shí)驗(yàn)對(duì)DCs數(shù)量上的需求.

由于將腫瘤細(xì)胞直接作為瘤苗使用效果并不明顯，目前大多數(shù)采用基因轉(zhuǎn)染技術(shù)對(duì)腫瘤細(xì)胞加以修飾，來(lái)提高其免疫原性［6］. 但對(duì)于mAb未知，或者mAb特異性不夠理想的腫瘤，該方法的推廣必然受到限制. 1994年，Guo等［7］首次以活化的B淋巴細(xì)胞與肝癌細(xì)胞相融合，使融合細(xì)胞表達(dá)高水平的MHC分子和共刺激分子，并能誘導(dǎo)出強(qiáng)烈的抗腫瘤免疫應(yīng)答，該研究啟發(fā)人們可以用細(xì)胞融合技術(shù)來(lái)改變腫瘤細(xì)胞的抗原特性. 細(xì)胞融合技術(shù)最大的優(yōu)點(diǎn)就在于融合細(xì)胞能夠呈遞腫瘤細(xì)胞所有的抗原，包括已知的和未知的mAb，可以獲得較好的誘導(dǎo)T細(xì)胞殺傷作用的效果.

在本研究中，我們采用電融合技術(shù)成功地制備了樹(shù)突狀細(xì)胞融合瘤苗，電融合的效率通常比化學(xué)融合法提高1～2個(gè)數(shù)量級(jí)［8］，這在很大程度上彌補(bǔ)了DCs數(shù)量較少的缺陷. 融合細(xì)胞瘤苗在對(duì)大鼠的主動(dòng)免疫治療中取得了較滿意的結(jié)果，融合細(xì)胞生長(zhǎng)速度變慢；在對(duì)荷瘤大鼠做免疫治療時(shí)，治療組的腫瘤體積顯著小于對(duì)照組（P＜0.01），肺轉(zhuǎn)移率降低（P＜0.01），轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)減少，而腫瘤對(duì)照組和生理鹽水對(duì)照組則無(wú)顯著性差異（P＞0.05）. 該研究結(jié)果表明，樹(shù)突狀細(xì)胞融合細(xì)胞瘤苗具有潛在的臨床應(yīng)用價(jià)值，如果能把這種抗原提呈功能最為強(qiáng)大的APC和有代表性的人體骨肉瘤細(xì)胞系相融合，制備出新型的融合細(xì)胞瘤苗，則該瘤苗的應(yīng)用有望顯著提高骨肉瘤患者的存活率.

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