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【摘要】《新課標(biāo)》高中生物涉及到的標(biāo)記技術(shù)主要是熒光標(biāo)記和放射性同位素標(biāo)記,這兩種標(biāo)記技術(shù)也是生物學(xué)研究上常用的方法之一,該領(lǐng)域許多重大發(fā)現(xiàn)的最終定論,以及對一些假說的有力驗證,都用到了標(biāo)記技術(shù)。熒光標(biāo)記技術(shù)和放射性同位素標(biāo)記技術(shù)在基因的定位、物質(zhì)代謝、物質(zhì)轉(zhuǎn)化、動態(tài)平衡等方面都有廣泛應(yīng)用。本文綜述了兩種現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)在高中生物上的應(yīng)用。
【關(guān)鍵詞】高中生物;熒光標(biāo)記;放射性同位素標(biāo)記
【Abstract】“NewStandard”highschoolbiologyinvolvedmainlyfluorescentmarkersandradioactivemarkers,thesetwomarkersisthemethodcommonlyusedinbiologicalresearch,oneofmanyimportantdiscoveriesinthefieldthefinalconclusion,aswellasanumberofhypothesesStrongauthentication,areusedinthemarkers.Fluorescentlabelingandradioisotopemarkersingenemapping,metabolism,materialtransformation,widelyusedinotheraspectsofhomeostasis.Inthispaper,twokindsofmodernmolecularbiologytechniquesinhighschoolbiologyontheapplication.
【Keywords】Highschoolbiology;fluorescentmarker;Radiolabeled
1.熒光標(biāo)記和放射性同位素標(biāo)記的原理
熒光標(biāo)記是利用自然的,或人工合成的能發(fā)熒光的物質(zhì),如熒光素、熒光染料等標(biāo)記待測分子或位點。不同的熒光物質(zhì)可以發(fā)出不同顏色的熒光,跟蹤其特征熒光,用熒光顯示系統(tǒng)準(zhǔn)確定位被標(biāo)記物,并觀察其動態(tài)過程。
生物學(xué)上經(jīng)常用到的放射性同位素有3H、18O、35S、32P、14C、15N等。用放射性同位素代替普通元素,不會影響其分子或化合物的化學(xué)性質(zhì)。利用放射性同位素不斷發(fā)出的特征射線,用放射自顯影、核探測器等放射性同位素示蹤技術(shù)來顯示、追蹤所標(biāo)記分子的變化及元素的代謝過程。
兩種標(biāo)記技術(shù)所用的標(biāo)記物不影響大分子的生物活性和代謝過程,具有操作性強、特異性強、目的性強等特點,成為現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)利器,被人們廣泛使用和信任。
2.熒光標(biāo)記在高中生物上的應(yīng)用
2.1細(xì)胞膜具有流動性的研究。
1970年,科學(xué)家用發(fā)綠色熒光的染料標(biāo)記小鼠細(xì)胞表面的蛋白質(zhì)分子,用發(fā)紅色熒光的染料標(biāo)記人細(xì)胞表面的蛋白質(zhì)分子,將小鼠細(xì)胞和人細(xì)胞融合。這兩種細(xì)胞剛?cè)诤蠒r,融合細(xì)胞的一半發(fā)綠色熒光,另一半發(fā)紅色熒光。在37℃下經(jīng)過40min,兩種顏色的熒光均勻分布。這一實驗,表明了細(xì)胞膜具有流動性。
2.2端粒學(xué)說。
每條染色體的兩端都有一段特殊序列的DNA,稱為端粒??茖W(xué)家用黃色熒光物質(zhì)標(biāo)記端粒,可以跟蹤端粒DNA在每次細(xì)胞分裂后的變化,以此研究端粒變化與細(xì)胞活動的相關(guān)性。
2.3基因的定位。
現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)能夠用特定的分子,與染色體上的某一個基因結(jié)合,這個分子又能被帶有熒光標(biāo)記的物質(zhì)識別,通過熒光顯示,就可以知道基因在染色體上的位置。這個實驗不但驗證了美國遺傳學(xué)家薩頓的假說,也支持美國生物學(xué)家摩爾根的實驗結(jié)果。
2.4用基因芯片檢測樣品基因。
把待檢測的基因樣品用熒光物質(zhì)標(biāo)記,再與基因芯片上成千上萬的DNA分子探針雜交,然后,通過熒光檢測系統(tǒng)對芯片進(jìn)行掃描,再利用計算機系統(tǒng),對每一個探針上的熒光信號進(jìn)行比較和檢測,就可以迅速得出所需要的信息。
3.放射性同位素標(biāo)記在高中生物上的應(yīng)用
3.1分泌蛋白的合成和運輸。
有些蛋白質(zhì)是在細(xì)胞內(nèi)合成后,分泌到細(xì)胞外起作用的,這類蛋白質(zhì)叫分泌蛋白,如消化酶、抗體和一部分激素。
科學(xué)家在豚鼠的胰腺腺泡細(xì)胞中注射3H標(biāo)記的亮氨酸,3min后,被標(biāo)記的亮氨酸出現(xiàn)在附著有核糖體的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中;17min后,出現(xiàn)在高爾基體中;117min后,出現(xiàn)在靠近細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)的運輸?shù)鞍踪|(zhì)的囊泡中,以及釋放到細(xì)胞外的分泌物中。
示蹤3H,就能找到分泌蛋白的合成和運輸?shù)耐緩健?/p>
3.2光合作用相關(guān)的研究。
光合作用的原料有水和二氧化碳,那么,光合作用釋放的氧氣到底是來自二氧化碳還是水?人們曾一度認(rèn)為這些氧氣是來自同是氣體的二氧化碳。
1939年,美國科學(xué)家魯賓和卡門利用同位素標(biāo)記法進(jìn)行了探究。他們用氧的同位素18O分別標(biāo)記H2O和CO2,使它們分別成為H218O和C18O2。然后進(jìn)行兩組實驗:第一組向植物提供H2O和C18O2;第二組向同種植物提供H218O和CO2。在其他條件都相同的情況下,分析了兩組實驗釋放的氧氣。結(jié)果表明,第一組釋放的氧氣全部是O2;第二組釋放的氧氣全部是18O2.這一事實有力地證明光合作用釋放的氧氣來自水。
3.3光合作用產(chǎn)生有機物的合成途徑。
光合作用產(chǎn)生的有機物又是怎樣合成的呢?進(jìn)入20世紀(jì)40年代,科學(xué)家開始利用放射性同位素14C做實驗研究這一問題。
美國科學(xué)家卡爾文等用小球藻做實驗:用14C標(biāo)記的14CO2,供小球藻進(jìn)行光合作用,然后追蹤檢測其放射性,最終探明了C02中的碳在光合作用中轉(zhuǎn)化成有機物中碳的途徑,這一途徑稱為卡爾文循環(huán)。
3.4噬菌體侵染細(xì)菌的實驗。
美國科學(xué)家艾弗里通過“肺炎雙球菌的轉(zhuǎn)化實驗”,得出了不同于當(dāng)時大多數(shù)科學(xué)家觀點的結(jié)論:DNA才是使R型細(xì)菌產(chǎn)生穩(wěn)定遺傳變化的物質(zhì)。
艾弗里的實驗引起了人們的注意,但是,由于艾弗里實驗中提取出的DNA,純度最高時也還有0.02%的蛋白質(zhì),因此,仍有人對實驗結(jié)論表示懷疑。
1952年,赫爾希和蔡斯以T2噬菌體為實驗材料,利用放射性同位素標(biāo)記的新技術(shù),完成了另一個更具說服力的實驗。
赫爾希和蔡斯首先在分別含有放射性同位素35S和放射性同位素32P的培養(yǎng)基中培養(yǎng)大腸桿菌,再用上述大腸桿菌培養(yǎng)T2噬菌體,得到DNA含有32P標(biāo)記或蛋白質(zhì)含有35S標(biāo)記的噬菌體。然后,用32P或35S標(biāo)記的T2噬菌體分別侵染未標(biāo)記的大腸桿菌,經(jīng)過短時間的保溫后,用攪拌機攪拌、離心。攪拌的目的是使吸附在細(xì)菌上的噬菌體與細(xì)菌分離,離心的目的是讓上清液中析出重量較輕的T2噬菌體顆粒,而離心管的沉淀物中留下被感染的大腸桿菌。離心后,檢查上清液和離心管中的放射性物質(zhì)發(fā)現(xiàn):用35S標(biāo)記的一組實驗,放射性同位素主要分布在試管的沉淀物中。