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【摘要】目的建立測定注射用甲硫氨酸維B1中甲硫氨酸和維生素B1的含量的方法。方法釆用高效液相色譜法，色譜柱：ODSC18柱（4.6mm×250mm，5μm），流動(dòng)相：緩沖液［取庚烷磺酸鈉0.25g，用磷酸鈉溶液（取磷酸鈉38g,加水至1000mL使溶解，用磷酸調(diào)pH值至2.1）溶解并稀釋成1000mL］乙腈（體積比94∶6），流速1.0mL/min，檢測波長為210nm。結(jié)果甲硫氨酸在0.60～1.40mg/mL濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(r=0.9996)，維生素B1在0.06~0.14mg/mL濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(r=0.9998)；平均回收率分別為：甲硫氨酸100.49%(RSD為0.62%),維生素B199.95%(RSD為0.48%）。結(jié)論本法簡便、快速、靈敏、準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，可作為注射用甲硫氨酸維B1中甲硫氨酸和維生素B1的含量測定方法。

【關(guān)鍵詞】高效液相色譜法；注射用甲硫氨酸維生素B1；甲硫氨酸；維生素B1

注射用甲硫氨酸維B1為甲硫氨酸和維生素B1的復(fù)合制劑。本品對于急慢性肝炎、肝硬化，尤其是對脂肪肝有特別的療效；可用于肝內(nèi)膽汁郁積以及乙醇、巴比妥類、磺胺類藥物中毒時(shí)的輔助治療；并可作為治療神經(jīng)炎和心肌炎的輔助藥物。目前對其注射劑及凍干粉針劑的含量測定已有文獻(xiàn)報(bào)道［1-3］。為有效控制產(chǎn)品質(zhì)量，本文直接采用hplc法測定其主要成分甲硫氨酸和維生素B1的含量，方法簡便，結(jié)果準(zhǔn)確。

1儀器與試藥

日本島津高效液相色譜儀(SPD10Avp檢測器,LC10Atvp泵)，工作站：AnaStar色譜處理系統(tǒng)，色譜柱：KromasilC18色譜柱(4.6mm×250mm，5μm)。

甲硫氨酸對照品（批號為140684200401）、維生素B1對照品（批號為100390200502）由中國藥品生物制品檢定所提供；注射用甲硫氨酸維B1（本公司自制，批號為050318、050319、050320，規(guī)格：甲硫氨酸40mg與維生素B14mg）；乙腈為色譜純，庚烷磺酸鈉、磷酸鈉、磷酸為分析純。

2方法與結(jié)果

2.1色譜條件色譜柱:ODSC18色譜柱(4.6mm×250mm，5μm)；流速:1.0mL/min；檢測波長：210nm；流動(dòng)相：以緩沖液［取庚烷磺酸鈉0.25g，用磷酸鈉溶液（取磷酸鈉38g,加水至1000mL使溶解，用磷酸調(diào)pH值至2.1）溶解并稀釋成1000mL］乙腈（體積比94∶6）；進(jìn)樣量：20μL；測定方法：外標(biāo)法，積分峰面積。

2.2對照品溶液的制備精密稱定甲硫氨酸對照品50mg和維生素B1對照品5mg，置同一50mL容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.3供試品溶液的制備取本品細(xì)粉適量(約相當(dāng)于甲硫氨酸50mg)，精密稱定，置50mL容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.4干擾試驗(yàn)分別精密量取對照品溶液、供試品溶液、空白溶劑20μL，注入液相色譜儀，結(jié)果空白溶劑無干擾峰，見圖1。

2.5線性關(guān)系精密稱定甲硫氨酸對照品約100mg和維生素B1對照品約10mg，置同一10mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別取上述溶液0.6、0.8、1.0、1.2、1.4mL，分別置10mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，取上述溶液各20μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以對照品溶液質(zhì)量濃度(ρ)為橫坐標(biāo)，測得峰面積值(A)為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程：甲硫氨酸A=5.597×106ρ+2.493×105,r=0.9996;維生素B1A=1.163×107ρ+2.147×104,r=0.9998。

結(jié)果表明甲硫氨酸在0.60～1.40mg/mL質(zhì)量濃度范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系；維生素B1在006~0.14mg/mL質(zhì)量濃度范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。

2.6精密度試驗(yàn)和穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一份對照品溶液，分別重復(fù)進(jìn)樣6次，每次進(jìn)樣20μL，結(jié)果甲硫氨酸和維生素B1RSD分別為0.89%和1.13%。

A.對照品;B.樣品;C.空白溶劑1、維生素B12、甲硫氨酸

圖1HPLC色譜圖（略）

Fig.1HPLCchromatograms

取同一份對照品溶液，在室溫條件下放置6h，分別在0、2、4、6h測定1次，結(jié)果甲硫氨酸和維生素B1的RSD分別為0.89%和0.94%,表明本品溶液在6h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7重復(fù)性試驗(yàn)精密稱取同一批樣品6份(批號050318)，按“2.3”項(xiàng)下方法處理后，分別進(jìn)樣20μL，測定含量。結(jié)果：甲硫氨酸和維生素B1的平均含量分別為100.08%和100.92%,RSD分別為132%和1.46%。

2.8回收率試驗(yàn)分別取甲硫氨酸對照品和維生素B1對照品適量（約相當(dāng)于甲硫氨酸80mg、100mg、120mg，維生素B18mg、10mg、12mg）各3份，精密稱定，按“2.2”項(xiàng)下方法操作，測定，并計(jì)算回收率，結(jié)果甲硫氨酸和維生素B1平均回收率分別為100.49%和99.95%，RSD值分別為0.62%和048%。見表1和表2。

表1甲硫氨酸回收率試驗(yàn)結(jié)果（略）

Tab.1Resultstestofmethionine

平均回收率=100.49%,RSD=0.62%

2.9樣品測定分別精密量取3個(gè)批號的供試品溶液及對照品溶液各20μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算供試品中甲硫氨酸（C5H11NO2S）和維生素B1（C12H17CIN4OS·HCl）的含量。測得3批樣品的質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為：甲硫氨酸100.19%，100.38%和100.31%；維生素B110110%，101.17%和101.19%。

表2維生素B1回收率試驗(yàn)結(jié)果（略）

Tab.2ResultstestofvitaminB1

平均回收率=99.95%,RSD=0.48%

3討論

3.1回收率試驗(yàn)供試品溶液的制備由于本制劑中未添加輔料，因此在進(jìn)行回收率試驗(yàn)時(shí)，直接分別稱取甲硫氨酸和維生素B1對照品，按照“2.2”項(xiàng)下方法操作即可。

3.2流動(dòng)相的選擇在選擇檢測波長210nm的情況下，曾比較乙腈25mmol/L磷酸鹽緩沖液(體積比60∶40，pH3.5）作為流動(dòng)相［3］，測定結(jié)果無明顯差異。考慮到乙腈毒性大，而文中所用流動(dòng)相乙腈緩沖液（體積比6∶94），乙腈含量明顯低于對比流動(dòng)相，因此選擇文中所用流動(dòng)相較好。

【參考文獻(xiàn)】

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