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【摘要】目的建立高效液相色譜蒸發(fā)光散射檢測(cè)(HPLCelsd)法測(cè)定注射用硫酸異帕米星含量的方法。方法色譜柱為ZorbaxSBC18色譜柱(250mm×4.6mm,5μm),流動(dòng)相為1%三氟醋酸水溶液甲醇(體積比95∶5)),流速:0.5mL/min;蒸發(fā)光散射檢測(cè)器,漂移管溫度45℃,載氣壓力368Pa。結(jié)果異帕米星在0.1~0.8mg/mL的范圍內(nèi)呈較好的線性關(guān)系(r=0.9995),平均回收率101.0%,RSD=0.32%;系統(tǒng)精密度RSD=0.34%。結(jié)論本方法操作簡(jiǎn)便、快速，方法的精密度、準(zhǔn)確性、重現(xiàn)性均較好地滿足質(zhì)量控制的要求，可用于注射用硫酸異帕米星的質(zhì)量控制。

【關(guān)鍵詞】高效液相色譜法;蒸發(fā)光散射檢測(cè)器;硫酸異帕米星

Abstract:ObjectiveToestablishanHPLCELSDmethodforthequantificationofisepamicinsulfateintheinjection.MethodsTheanalysiswasperformedonacolumnofZorbaxSBC18(250mm×4.6mm,5μm).Themobilephaseconsistedof1%tifluoroaceticmethanol(95∶5)andtheflowratewas0.5mL·min-1.Thedrifttubetemperaturewas45℃，ELSDwasusedasthedetectorwithpressureofnebulizinggasof368Pa.ResultsThecalibrationcurvewaslinearintherangeof0.1~0.7mg/mL(r=0.9995).Theaveragerecoverywas101.0%withRSD0.32%.ConclusionThismethodissimple,rapid,accurateandreproducibleforthequalitycontroloftheinjectionofisepamicinsulfate.

Keywords:HPLC;evaporativelight-scatteringdetection;isepamicinsulfate

硫酸異帕米星為氨基糖甙類抗生素,由慶大霉素B半合成而來，目前僅在日本抗生素基準(zhǔn)解說（簡(jiǎn)稱“日抗基”）中收載?！叭湛够敝胁捎每股匚⑸餀z定法測(cè)定硫酸異帕米星的含量,操作煩瑣、測(cè)定誤差較大。由于氨基糖甙類抗生素?zé)o紫外吸收,無法采用紫外檢測(cè)器，因此,通常采用衍生化的方法進(jìn)行測(cè)定［1~2］，但該法操作煩瑣、費(fèi)時(shí),而且反應(yīng)過程中可能會(huì)產(chǎn)生副產(chǎn)物,干擾有關(guān)物質(zhì)的測(cè)定。蒸發(fā)光散射檢測(cè)器（ELSD）是一種通用型質(zhì)量檢測(cè)器,其響應(yīng)不依賴物質(zhì)的光學(xué)特征,對(duì)無紫外或紫外末端吸收的有機(jī)化合物的檢測(cè)顯示出極大的優(yōu)越性。有文獻(xiàn)報(bào)道用蒸發(fā)光散射檢測(cè)器進(jìn)行氨基糖甙類抗生素的質(zhì)量分析［3］。本研究建立了在酸性條件下HPLCELSD法測(cè)定注射用硫酸異帕米星含量的方法,測(cè)定結(jié)果與“日抗基”中收載的微生物檢定法的測(cè)定結(jié)果基本一致。

1材料與方法

1.1儀器與試劑島津高效液相色譜系統(tǒng)2010CHT型和SEDEX75型蒸發(fā)光散射檢測(cè)器;ZorbaxSBC18色譜柱(250mm×4.6mm,5μm)。三氟醋酸為TEDIACOMPANYINC產(chǎn)品,分析純;水為自制雙蒸水。硫酸異帕米星標(biāo)準(zhǔn)品（規(guī)格：684mg/g,批號(hào)：050701）及注射用硫酸異帕米星由海南長(zhǎng)安國(guó)際制藥有限公司提供。

1.2色譜條件采用1%三氟醋酸水溶液甲醇(體積比95∶5)為流動(dòng)相,流速為0.5mL/min;ELSD檢測(cè)器漂移管溫度為45℃,載氣壓力368Pa;進(jìn)樣量20μL。

1.3溶液的配制

1.3.1標(biāo)準(zhǔn)品溶液的配制取硫酸異帕米星標(biāo)準(zhǔn)品,精密稱定,用水溶解,分別制成濃度為0.3、0.4、0.5、0.6、0.7mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液,每個(gè)濃度平行配制2份。

1.3.2供試品溶液的配制取供試品注射用硫酸異帕米星,精密稱定,用水溶解,制成濃度為0.5mg/mL的溶液,平行配制6份。

1.4方法學(xué)考察

1.4.1線性關(guān)系精密稱取異帕米星對(duì)照品適量,加水制成含注射用硫酸異帕米星0.1、0.2、0.4、0.6及0.8mg/mL的溶液,分別進(jìn)樣20μL,以濃度的常用對(duì)數(shù)（X）為橫坐標(biāo),以峰面積的常用對(duì)數(shù)（Y）為縱坐標(biāo)作圖,計(jì)算得回歸方程：Y=1.2496X+5.663，r=09995。結(jié)果表明異帕米星在0.1~0.8mg/mL的范圍內(nèi)呈較好的線性關(guān)系。

1.4.2精密度試驗(yàn)取對(duì)照品溶液,連續(xù)進(jìn)樣6針,以主峰峰面積計(jì)算RSD為0.34%。

1．4．3穩(wěn)定性試驗(yàn)取供試品（批號(hào)051101）溶液,分別于0、1、2、4、6、8h取20μL,注入液相色譜儀,記錄色譜圖,結(jié)果RSD為0.78%。

1．4．4重復(fù)性試驗(yàn)取同一批供試品（批號(hào)051101），配制成6份溶液，分別進(jìn)樣分析，含量測(cè)定結(jié)果的RSD為0.6%(n=6)。

1.5回收率試驗(yàn)精密稱取已知含量的注射用硫酸異帕米星適量（高、中、低各3份）和與之相對(duì)應(yīng)量（按注射用硫酸異帕米星處方比例）的硫酸異帕米星標(biāo)準(zhǔn)品9份，分別置于100mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，取20μL注入液相色譜儀進(jìn)行測(cè)定,計(jì)算回收率，測(cè)得回收率分別為100.8%、100.9%和101.4%，平均回收率為101.0%，RSD為0.32%,表明回收率良好。

2含量測(cè)定結(jié)果

采用本法測(cè)定3批注射用硫酸異帕米星的含量；按企業(yè)申報(bào)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定方法，采用微生物檢定二劑量法測(cè)定注射用硫酸異帕米星的含量，結(jié)果見表1。結(jié)果表明兩種方法的含量測(cè)定結(jié)果非常接近。硫酸異帕米星供試品溶液的色圖譜見圖1。

3討論

3.1本文所建立的HPLCELSD方法與目前中國(guó)藥典采用的效價(jià)方法及英、美等國(guó)家采用的衍生化方法比較，具有以下優(yōu)點(diǎn):不需要進(jìn)行衍生化，減少了樣品前處理所帶來的誤差，提高了分析的精度。

表13批樣品HPLCELSD法與微生物檢定法測(cè)定結(jié)果（略）

Tab.1ContentofisepamicinsulfatedetectedbyHPLCELSDandantibioticsmicrobialassays,separately

1.硫酸根;2.異帕米星

圖1硫酸異帕米星測(cè)定HPLC色譜圖（略）

Fig.1HPLCchromatigramofisepamicinsulfate

3.2已有文獻(xiàn)報(bào)道采用0.05mol/L五氟丙酸溶液甲醇系統(tǒng)為流動(dòng)相測(cè)定硫酸異帕米星原料的含量［3~4］，未見對(duì)注射用異帕米星的含量進(jìn)行測(cè)定的文獻(xiàn)報(bào)道，本文參照硫酸小諾霉素注射液的小諾霉素組分測(cè)定方法［5］建立了測(cè)定注射用異帕米星含量的HPLCELSD法，結(jié)果表明本法可靠、可行。

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