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【摘要】目的觀察當(dāng)歸補(bǔ)血湯能否通過降低尿酸而改善大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞功能。方法將40只大鼠隨機(jī)分成對照組、模型組、治療組(低、中、高)劑量，模型組給予高尿酸飲食，對照組給予普通飲食，治療組給予高尿酸飲食的同時給予當(dāng)歸補(bǔ)血湯治療(低、中、高)3個治療劑量;14d后分別測定各組大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞所分泌的一氧化氮(NO)和一氧化氮和酶(NOS)含量，同時測定血清中尿酸含量、治療組與模型組比較，觀察各項指標(biāo)有無統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果①與對照組相比：高尿酸血癥組大鼠內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生的NO，NOS均減少，有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。②治療組與模型組相比較：給予當(dāng)歸補(bǔ)血湯治療后血清尿酸水平降低，同時血管內(nèi)皮細(xì)胞分泌的NO和NOS含量升高，其中中劑量組與模型組相比有顯著的統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，低劑量和高劑量組與模型組相比無統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論當(dāng)歸補(bǔ)血湯可以通過降低尿酸而改善血管內(nèi)皮細(xì)胞功能。從而治療冠心病。

【關(guān)鍵詞】當(dāng)歸補(bǔ)血湯;高尿酸血癥;內(nèi)皮細(xì)胞功能

當(dāng)歸補(bǔ)血湯源于金代李杲的《內(nèi)外傷辨惑論·景傷胃氣論》，全方由黃芪和當(dāng)歸按5∶1組成，是中國傳統(tǒng)的補(bǔ)氣養(yǎng)血的代表方劑，主治勞倦內(nèi)傷，氣弱血虛，陽浮外越。在臨床上用于勞累性心絞痛和心肌梗塞后正虛邪惡，氣血雙虧，心失所養(yǎng)等癥[1]。該方應(yīng)用廣泛，但關(guān)于它對尿酸水平的影響的研究很少，本實驗通過給予高尿酸血癥大鼠當(dāng)歸補(bǔ)血湯治療，一方面觀察其對尿酸水平的影響，另一方面觀察其對血管內(nèi)皮細(xì)胞功能的影響。

1材料與方法

1.1實驗動物Wistar大鼠60只，雌雄各半，體重(250±10)g，由河北醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供。合格證編號805108。

1.2實驗藥品腺嘌呤(Adenine)，批號H65821購自南京建成生物制品有限公司，乙胺丁醇片(Ethambutol),批號T08B524，購自杭州民生藥業(yè)集團(tuán)有限公司。當(dāng)歸補(bǔ)血湯，當(dāng)歸∶黃芪為5∶1，由河北保定古城醫(yī)藥生產(chǎn)。試劑盒均購自南京建成生物制品有限公司。

1.3實驗儀器雙功能水浴恒溫振蕩器(型號：SHA-BA產(chǎn)地：金壇市杰瑞爾電器有限公司);漩渦混勻器(型號IKA-MSZ產(chǎn)地：IKAWorksGuangzhou);低速臺式離心機(jī)(型號TDL-5-A,產(chǎn)地：上海安亭科學(xué)儀器廠);501-A型超級恒溫器(產(chǎn)地：上海,實驗儀器廠有限公司);Stat-Fax-2100酶標(biāo)儀(產(chǎn)地：Awarenesstechnologying.);高速冷凍離心機(jī)(型號GL-16G-Ⅱ型產(chǎn)地：上海安亭科學(xué)儀器廠)。

1.4動物模型的制備高尿酸血癥動物模型的建立采用腺嘌呤+乙胺丁醇法，腺嘌呤100mg·kg-1·d-1+乙胺丁醇250mg·kg-1·d-1，溶于2ml生理鹽水中灌胃1次/d，共7d，此種方法制造的模型尿酸水平穩(wěn)定升高，乙胺丁醇的應(yīng)用增加了尿酸在體內(nèi)的蓄積[2]。

2方法

將實驗動物隨機(jī)分成5組，對照組與模型組，治療組(低、中、高3個治療組)，各組動物均為雌雄各半。首先自由飲食1周，然后對照組給予普通飲食，模型組給予高尿酸飲食，治療組給予除高尿酸飲食外，同時給予當(dāng)歸補(bǔ)血湯，低、中、高3個劑量分別按3.0，6.0，12g/kg/d給予大鼠灌胃，1次/d，14d后處死大鼠，腹主動脈取血，高速離心后取血清進(jìn)行檢測，同時留取主動脈血管內(nèi)皮細(xì)胞，孵育后檢測一氧化氮及一氧化氮合酶。

2.1檢測指標(biāo)及方法分別檢測對照組、模型組與治療組中血清尿酸水平，看造模是否成功，同時看當(dāng)歸補(bǔ)血湯對尿酸的影響。檢測血清中超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的水平，看組織抗氧化情況及損傷的程度。取主動脈留取血管內(nèi)皮細(xì)胞，檢測一氧化氮(NO)的水平和一氧化氮合酶(NOS)的活性，各項指標(biāo)的測定均采用酶聯(lián)免疫吸附法，試劑盒均購自南京建成生物制品有限公司，具體操作步驟見試劑盒說明書。

2.2統(tǒng)計學(xué)方法數(shù)據(jù)以(±s)表示，采用F檢驗，q檢驗，t檢驗，檢驗水準(zhǔn)a=0.05。

3結(jié)果

表1對照組、模型組與治療組血清尿酸水平的比較對照組vs模型組，▲P<0.001;模型組vs低劑量組，▲P<0.001;中劑量vs模型組，▲P<0.001;高劑量vs模型組，▲P<0.001;低劑量vs中劑量，★P<0.05;中劑量vs高劑量，★P<0.05

圖1各組血清尿酸水平柱狀圖

以上結(jié)果表明，當(dāng)歸補(bǔ)血湯對降低血尿酸水平有明顯的療效，低、中、高劑量組均有療效。表2各組血管內(nèi)皮細(xì)胞分泌的NO、TNOS、iNOS水平的比較

NO水平的統(tǒng)計學(xué)分析表明：模型組vs對照組，★P<0.01;模型組vs低劑量組，P>0.05;模型組vs中劑量組，★P<0.05;模型組vs高劑量，P>0.05;低劑量vs中劑量，★P<0.05;中劑量vs高劑量，P>0.05;TNOS及iNOS水平的統(tǒng)計學(xué)分析表明：模型組vs對照組，★P<0.05;模型組vs低劑量組，P>0.05;模型組vs中劑量，★P<0.05;模型組vs高劑量，P>0.05;低劑量vs中劑量，★P<0.01;中劑量vs高劑量，P>0.05

上述結(jié)果表明，高尿酸水平可以減低內(nèi)皮功能，當(dāng)歸補(bǔ)血湯可以減低尿酸水平，從而改善內(nèi)皮功能，其最合適的劑量為中劑量，低劑量和高劑量對內(nèi)皮功能也有改善作用，但無顯著性意義。

4討論

本實驗結(jié)果表明，對高尿酸血癥造成的血管內(nèi)皮細(xì)胞功能的影響，本實驗體現(xiàn)為血管內(nèi)皮細(xì)胞分泌的NO水平及NOS活性的降低，治療組分別給予當(dāng)歸補(bǔ)血湯(低、中、高)劑量治療，14d后分別觀察血清尿酸水平及NO水平和NOS活性。通過統(tǒng)計學(xué)分析得出如下結(jié)論：與模型組相比，3種劑量組對血尿酸水平均有降低作用，但低劑量組和高劑量組對于尿酸水平的影響無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，只有中劑量組有明顯的降低血尿酸水平的作用，有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。同樣，當(dāng)歸補(bǔ)血湯對于血管內(nèi)皮細(xì)胞功能的影響，與模型組相比，觀察NO水平和NOS活性，3個劑量組均有效，經(jīng)治療后其中中劑量組NO水平和NOS活性均增高，與模型組相比有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，低劑量組和高劑量組也有升高NO水平和TNOS活性的作用，但與模型組相比無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。通過上述實驗結(jié)果可以看出，當(dāng)歸補(bǔ)血湯有降低血尿酸的作用，并且通過降低血清尿酸水平可以改善血管內(nèi)皮功能，3個劑量中，中劑量是最合適的治療劑量。

當(dāng)歸補(bǔ)血湯組方簡單，黃芪當(dāng)歸可靈活配伍，達(dá)到益氣補(bǔ)血活血的目的，療效確切。臨床上關(guān)于當(dāng)歸補(bǔ)血湯的研究很多，雷燕等[3]研究表明，當(dāng)歸補(bǔ)血湯具有增加缺血心肌微血管密度和促進(jìn)血管生成因子表達(dá)的作用，使血管密度增加，可能與其一起活血作用有關(guān)。而雷燕等[4]的臨沂研究表明，當(dāng)歸補(bǔ)血湯有促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖的作用，其機(jī)制尚不明確。黃水清等[5]的研究表明，對于高脂血癥及動脈粥樣硬化家兔給予當(dāng)歸補(bǔ)血湯治療后，當(dāng)歸補(bǔ)血湯具有較好地降低總膽固醇和低密度脂蛋白膽固醇的作用，而且還可以通過調(diào)整血脂，使家兔動脈粥硬化的脂質(zhì)斑塊面積縮小，故有抗動脈粥樣硬化的作用。動脈粥樣硬化和高脂飼料喂養(yǎng)的動物血中超氧化物歧化酶(SOD)等抗氧化物酶的活性降低，而相應(yīng)的過氧化脂質(zhì)丙二醛(MDA)卻升高[6]，給予當(dāng)歸補(bǔ)血湯治療后，血清中MDA明顯降低，而SOD活力有明顯的提高，SOD的提高對過氧化脂質(zhì)MDA的清除有較大的作用，故SOD的升高和MDA的降低是當(dāng)歸補(bǔ)血湯的抗動脈粥樣硬化的機(jī)制之一。

本實驗研究表明了當(dāng)歸補(bǔ)血湯可以通過降低水平而達(dá)到改善血管內(nèi)皮細(xì)胞功能的作用。其機(jī)制可能與下列方面有關(guān)：尿酸可以阻滯細(xì)胞外過氧化氫對SOD的降解，SOD是維護(hù)內(nèi)皮細(xì)胞和血管功能的關(guān)鍵酶，可以催化過氧化氫和超氧陽離子反應(yīng)，從而阻止NO的滅活，維護(hù)NO的濃度和維護(hù)內(nèi)皮細(xì)胞的功能。所以尿酸增高可以導(dǎo)致血清中SOD降低[7]，而降低了尿酸水平就可以改善血管內(nèi)皮細(xì)胞功能，這些作用可能與其益氣活血作用有關(guān)。當(dāng)歸補(bǔ)血湯降低尿酸及改善血管內(nèi)皮細(xì)胞功能的作用療效肯定，其機(jī)理復(fù)雜，有待進(jìn)一步探討。超級秘書網(wǎng)：

【參考文獻(xiàn)】

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[3]雷燕，王培利，林燕.當(dāng)歸補(bǔ)血湯對實驗性心肌梗死衰老大鼠缺血心肌的促血管生成作用[J].中國中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志，2005，11(12)：123.

[4]雷燕，高清.當(dāng)歸補(bǔ)血湯促血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖作用的研究[J].中國中西醫(yī)結(jié)合雜志，2003，23(10)：753.

[5]黃水清，王斌，王劍.當(dāng)歸補(bǔ)血湯抗家兔動脈粥樣硬化形成的實驗研究[J].北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2005，28(5)：38.

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[7]林慶斌，廖升榮.SOD的研究進(jìn)展[J].化學(xué)世界，2006，5：378