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本文作者：陳鑫王延偉作者單位：中國人民解放軍第210醫(yī)院檢驗科

fcm在腫瘤學(xué)中的應(yīng)用

由于人體中正常細胞大部分都是以二倍體存在，正常細胞在發(fā)生癌變時DNA數(shù)量會發(fā)生變化。FCM可以檢測細胞中DNA的含量變化從而運用于腫瘤的檢測，在病理形態(tài)學(xué)診斷上一直把FCM技術(shù)視為腫瘤診斷的一個“金標準”。但由于癌癥早期缺乏客觀明確的診斷指標，給治療工作帶來很大困擾，F(xiàn)CM的出現(xiàn)使腫瘤治療有了質(zhì)的飛躍。其應(yīng)用主要是通過測定DNA含量實現(xiàn)的，包括癌前病變檢查、早期癌變的檢出、化療指導(dǎo)以及預(yù)后評估等［6］。FCM檢測標本包括實體瘤標本或穿刺標本、胸腹腔液體、膀胱沖洗液、尿液、食管鏡及支氣管鏡鉗取的少量活檢組織等。DNA非整倍體的出現(xiàn)是癌變的一個重要標志。因此，臨床上可利用流式細胞儀進行細胞周期分析和DNA倍體分析。輔助腫瘤診斷，包括監(jiān)測癌前病變、腫瘤的早期診斷、交界性腫瘤診斷和腫瘤細胞學(xué)診斷等［7］，比如通過流式細胞儀檢測樣品中染色體的數(shù)量來實現(xiàn)甲狀腺對比分析染色體中的整倍體和異倍體的改變情況，從而實現(xiàn)對甲狀腺乳頭狀瘤的診斷［8］。根據(jù)細胞周期分析結(jié)果，適當選用周期特異性藥物或非周期特異性藥物，可協(xié)助擬定治療方案;化療過程中腫瘤細胞DNA含量分布直方圖的變化，可反映細胞動力學(xué)的變化，作為評估藥物療效的依據(jù)［9］。大量臨床實驗已經(jīng)證實，F(xiàn)CM在腫瘤學(xué)檢驗診斷方面的準確率很高，可以達到一般的細胞診斷。由于它具有自動化和處理量大的優(yōu)點，因此已經(jīng)逐漸成為腫瘤診斷學(xué)方面的首選工具。另外，F(xiàn)CM在評價B細胞淋巴瘤方面具有重要的臨床意義。由于B細胞根據(jù)成熟度不同可以分為B淋巴母細胞、成熟細胞及漿細胞，而不同細胞和不同的疾病中所表達出來的抗原不同，因此可以通過不同抗原染色達到免疫分型的作用，從而診斷出腫瘤細胞的不同亞型，有助于選擇正確的治療方案［10］。

FCM在血液學(xué)中的應(yīng)用

FCM在各種血液病的診斷、治療和預(yù)后判斷方面也起到了十分重要的作用，主要是通過分析外周血細胞或骨髓細胞表面抗原和DNA的檢測來實現(xiàn)的。由于不同的血細胞系統(tǒng)都有其特有的表面抗原，F(xiàn)CM通過采用特異的單克隆抗體，借助于不同的熒光染料可同時檢測一個單細胞的不同參數(shù)，根據(jù)所測的參數(shù)結(jié)果來判斷出該血細胞的屬性。在各種急性白血病的診斷和鑒別中，一般形態(tài)學(xué)檢查很難區(qū)分，而FCM就起到了舉足輕重的作用。FCM在白血病免疫分型應(yīng)用方面也起到重要的作用。目前國內(nèi)外均主張采用FCMCD45/SSC雙參數(shù)散點網(wǎng)設(shè)計方法進行白血病免疫分型。該方法可以將骨髓細胞清晰地分成淋巴細胞、成熟粒細胞、單核細胞、幼稚細胞和有核紅細胞群，排除了正常細胞對免疫分型的干擾，使細胞免疫分型的準確性大大提高［11］。FCM在血小板相關(guān)疾病的診斷中也有許多應(yīng)用。當受到外界刺激時血小板會被活化而發(fā)生一系列改變。從血小板膜的糖蛋白表達水平的高低可判斷血小板的活化程度，F(xiàn)CM通過測定血小板膜糖蛋白的表達情況來為血小板膜糖蛋白異常所致疾病的診斷提供依據(jù)。在血栓性疾病的診斷和治療中，這種測定可以評價活化血小板程度在血栓性疾病和血栓前狀態(tài)發(fā)生、發(fā)展中的作用［12］。FCM在血液學(xué)中的臨床應(yīng)用主要包括:白血病的檢測、淋巴瘤的檢測、混合性白血病、部分髓系白血病、慢性淋巴細胞白血病、微小殘留病灶白血病、血小板相關(guān)疾病等方面［13］。此外，在網(wǎng)織紅細胞、微小殘留病灶的檢測等方面，F(xiàn)CM均有廣泛應(yīng)用。

FCM在免疫學(xué)中的應(yīng)用

機體是否患病的一個重要指標是免疫狀態(tài)是否正常，F(xiàn)CM技術(shù)目前已廣泛用來監(jiān)測機體的免疫狀態(tài)，T、B和自然殺傷淋巴細胞的水平是檢驗免疫狀態(tài)的一個重要指標。其中T細胞主要包括Th和Ts兩個細胞亞群，Th細胞是T細胞中表面分化抗原簇標志為CD4+的一種亞群，而Th細胞是以CD8+為表面主要標志的T細胞。CD16和CD56等是自然殺傷細胞的表面主要標志;CD19是B細胞的表面標志［14］。通過表面標志物質(zhì)監(jiān)測各細胞及細胞內(nèi)各種細胞因子在體內(nèi)的水平，以及對患者淋巴細胞各亞群數(shù)量的測定，可監(jiān)控患者的免疫狀態(tài)，并作為診斷、治療相關(guān)疾病的重要依據(jù)。FCM結(jié)合單克隆抗體技術(shù)與普通免疫學(xué)相比具有定量準確的優(yōu)點，在免疫學(xué)臨床主要應(yīng)用于對細胞表面抗原、細胞內(nèi)抗原、細胞膜受體和癌基因蛋白進行定量檢測，并且已經(jīng)取得了長足的發(fā)展。FCM結(jié)合單克隆抗體技術(shù)在人體細胞免疫功能方面的評估具有重要的意義。有報道對外周血淋巴細胞免疫表型的參考值及其種族、性別、年齡等影響因素進行了探討［15］。

FCM在其他方面的應(yīng)用

1FCM在器官移植中的作用

在器官移植中，F(xiàn)CM可被用來判斷供者與受者配型是否合適，并鑒別和定型同種異體反應(yīng)抗體。FCM還可通過監(jiān)測移植后免疫表型的變化來預(yù)測移植后的免疫排斥反應(yīng)、細胞免疫治療效果以及移植的存活情況等，可以更敏感地預(yù)測排斥反應(yīng)的發(fā)生，從而為臨床治療提供有效依據(jù)［16］。

2FCM在細胞凋亡方面的作用

FCM是目前應(yīng)用較多的對細胞凋亡進行分析和檢測的方法，結(jié)合熒光染色，可對單細胞做多參數(shù)分析。FCM除了可以定量監(jiān)測細胞凋亡數(shù)和凋亡指數(shù)外，還可同時測定凋亡細胞發(fā)生于某個特定的細胞周期;通過測定細胞的增殖率與死亡率，可以早期測定藥物的療效。FCM技術(shù)在細胞凋亡方面的另外一個優(yōu)勢在于它可以將凋亡和壞死區(qū)別開來［10］。

3FCM分析神經(jīng)系統(tǒng)疾病

FCM技術(shù)在神經(jīng)系統(tǒng)疾病中的應(yīng)用主要是分析腦脊液中T淋巴細胞及其亞群，根據(jù)腦脊液中的T淋巴細胞亞群不同來進行疾病診斷和治療。在分析神經(jīng)系統(tǒng)炎性疾病方面，F(xiàn)CM技術(shù)比常規(guī)的腦脊液檢測具有更高的敏感性，并可同時分析出腦脊液免疫狀況，對神經(jīng)系統(tǒng)炎性疾病病情的了解和監(jiān)測具有一定的臨床意義［17］。

4FCM檢測冠心病患者

血清P選擇素水平可早期反映冠狀動脈損傷事件，因其與Gensini冠狀動脈病變評分呈正相關(guān)，也可用于檢測冠心病病情及預(yù)后判斷。在檢測冠心病患者方面，F(xiàn)CM與其他技術(shù)相比的優(yōu)勢也在于它的敏感性，其敏感度為酶聯(lián)免疫吸附試驗的25倍［18］。

5FCM在精液檢測中的應(yīng)用

主要是通過對不同時期的細胞數(shù)據(jù)和精子的各種指標進行分析，為臨床診斷精子發(fā)生障礙的性質(zhì)、原因和程度提供客觀的數(shù)據(jù)支持，對無、少及弱精子等的判斷、治療及治療效果進行評估［19］。