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本文作者：覃寶山覃勇榮作者單位：河池學(xué)院化學(xué)與生命科學(xué)系

二氧化氯作為一種新型的廣譜消毒劑，具有用量少、作用快、效率高等優(yōu)點(diǎn)而被廣泛應(yīng)用于水處理、食品工業(yè)、農(nóng)業(yè)、水產(chǎn)及醫(yī)療衛(wèi)生等領(lǐng)域［1－6］。近年來(lái)，二氧化氯也逐漸應(yīng)用于食用菌栽培領(lǐng)域［7－10］。在食用菌栽培過(guò)程中，必須防止其他微生物的污染，傳統(tǒng)的防治方法是利用常壓蒸汽滅菌法或高壓蒸汽滅菌法對(duì)培養(yǎng)料進(jìn)行滅菌［11－12］。這兩種滅菌方法，需要投入大量的人力和物力，對(duì)設(shè)備的要求較高，滅菌過(guò)程耗時(shí)、耗能，栽培成本比較高，與當(dāng)今推行的節(jié)能減排、綠色種植理念不符。因此，尋找一種新的方法和手段替代傳統(tǒng)的滅菌工藝具有重要意義。對(duì)此，筆者等以二氧化氯為消毒劑對(duì)平菇進(jìn)行栽培試驗(yàn)，探討二氧化氯濃度、活化時(shí)間及消毒時(shí)間對(duì)平菇菌絲生長(zhǎng)及雜菌的防治效果，以期尋找簡(jiǎn)便可行的消毒方法指導(dǎo)生產(chǎn)實(shí)踐。

1材料與方法

1．1材料

1．1．1供試菌株

平菇P615，江蘇省江都市天達(dá)食用菌研究所。一級(jí)菌種培養(yǎng)基為PDA培養(yǎng)基，擴(kuò)繁1次；二級(jí)和三級(jí)菌種參考文獻(xiàn)［11－12］的方法，以谷粒和桑枝屑為基質(zhì)進(jìn)行制作。

1．1．2試驗(yàn)藥劑

秀霸牌穩(wěn)定態(tài)二氧化氯一元粉劑〔二氧化氯含量（10±0．8）％〕，購(gòu)自山東濰坊華實(shí)藥業(yè)有限公司。

1．1．3栽培原料

栽培配方：桑枝70％、米糠20％、稻草6％、石膏2％、五氧化二磷2％。所有原料均要求新鮮、干燥、無(wú)霉變，試驗(yàn)前將稻草、桑枝切碎備用。

1．2方法

1．2．1試驗(yàn)設(shè)計(jì)

采用二氧化氯濃度、活化時(shí)間和消毒時(shí)間3個(gè)因素進(jìn)行單因素試驗(yàn)。將一定量的穩(wěn)定性二氧化氯粉劑倒入水中，攪拌溶解后，密閉靜置一定時(shí)間，即可得到所需濃度消毒液?；罨瘯r(shí)間是指將配制二氧化氯消毒劑的水溶液密封放置至拌入培養(yǎng)料所經(jīng)歷的時(shí)間。消毒時(shí)間是指二氧化氯消毒劑水溶液拌入培養(yǎng)料至接種時(shí)料袋放置的時(shí)間。每種處理均設(shè)5個(gè)平行。試驗(yàn)數(shù)據(jù)處理用Excel2003進(jìn)行，結(jié)果取平均值。

1）二氧化氯濃度。二氧化氯濃度（處理1～10）分別為20mg／L、40mg／L、60mg／L、80mg／L、100mg／L、120mg／L、140mg／L、160mg／L、180mg／L和200mg／L，活化時(shí)間10min，消毒時(shí)間72h。

2）消毒時(shí)間。消毒時(shí)間（處理1～10）分別為12h、24h、36h、48h、60h、72h、84h、96h、108h和120h，二氧化氯濃度120mg／L，活化時(shí)間10min。

3）活化時(shí)間。活化時(shí)間（處理1～10）分別為2min、4min、6min、8min、10min、12min、14min、16min、18min和20min，二氧化氯濃度為120mg／L，消毒時(shí)間為72h。

1．2．2栽培方法

按試驗(yàn)設(shè)計(jì)要求配制相應(yīng)的消毒劑稀釋液，將培養(yǎng)料與消毒劑稀釋液混合拌勻，用47cm×23cm×0．05cm的聚乙烯塑料袋裝料并編號(hào)，每袋折合干料1kg，然后按要求放置一段時(shí)間，定時(shí)接種。接種時(shí)，在酒精燈旁的無(wú)菌區(qū)內(nèi)進(jìn)行，所用的原種菌袋表面、接種鉤和手在接種前用75％的酒精消毒，接種時(shí)將菌種均勻撒播在袋口料面，稍加按壓后套上塑料頸圈，外加消過(guò)毒的報(bào)紙封口。接種后進(jìn)入菌絲培養(yǎng)管理，期間注意通風(fēng)、避光，保持干燥，根據(jù)當(dāng)時(shí)氣溫靈活堆碼發(fā)菌，并定時(shí)翻袋，控制料溫。菌絲長(zhǎng)滿菌袋后，繼續(xù)培養(yǎng)5～10d，促進(jìn)其進(jìn)一步成熟。當(dāng)料口有淡黃色分泌物出現(xiàn)時(shí)，轉(zhuǎn)入出菇管理階段。及時(shí)增加光照，噴水，加強(qiáng)通風(fēng)，拉大溫差，促進(jìn)原基形成。當(dāng)菌袋口料面分化出珊瑚狀的菌蕾時(shí)，將封口的報(bào)紙去掉，期間注意保濕，通風(fēng)換氣，菇體成熟后適時(shí)采收。

1．2．3觀察與記錄

定期觀察與記錄雜菌感染情況和平菇菌絲生長(zhǎng)狀況，統(tǒng)計(jì)菌袋感染數(shù)，測(cè)量菌絲的生長(zhǎng)速度，計(jì)算菌絲的平均生長(zhǎng)速度及菌袋感染率。生長(zhǎng)速度＝菌絲長(zhǎng)度／天數(shù)平均生長(zhǎng)速度＝每次測(cè)出的生長(zhǎng)速度之和／次數(shù)菌袋感染率＝（感染的菌袋數(shù)／栽培的菌袋數(shù)）×100％

2結(jié)果與分析

2．1二氧化氯濃度、消毒時(shí)間和活化時(shí)間對(duì)雜菌的防治效果

不同濃度的二氧化氯消毒劑拌料栽培平菇，對(duì)雜菌防治效果不一樣。二氧化氯濃度為120～200mg／L的處理對(duì)食用菌雜菌的防治效果較好，感染率為0，二氧化氯濃度低于120mg／L的實(shí)驗(yàn)處理均有雜菌感染，感染率為40％。說(shuō)明，二氧化氯濃度過(guò)低對(duì)雜菌的防治效果不明顯。不同消毒時(shí)間對(duì)雜菌防治的效果良好，感染率均為0。表明，試驗(yàn)設(shè)定的消毒時(shí)間對(duì)雜菌的防治效果沒(méi)有影響。即二氧化氯消毒劑在10min內(nèi)活化后配制成120mg／L的濃度拌入培養(yǎng)料，料袋放置12～120h后再接種，均可有效防治雜菌污染。不同活化時(shí)間對(duì)雜菌防治的效果良好，感染率均為0。說(shuō)明，試驗(yàn)設(shè)定的活化時(shí)間對(duì)雜菌防治的效果沒(méi)有影響，即二氧化氯消毒劑在2～20min內(nèi)活化后配制成120mg／L的濃度拌料，料袋放置72h后再接種，均可有效防治雜菌污染。

2．2二氧化氯濃度、消毒時(shí)間和活化時(shí)間對(duì)平菇菌絲生長(zhǎng)的影響

從表中看出：

1）二氧化氯濃度。處理1～6二氧化氯濃度低于或等于120mg／L，平菇菌絲萌發(fā)較早，生長(zhǎng)速度較快，長(zhǎng)勢(shì)較旺；處理7～10二氧化氯濃度高于120mg／L，平菇菌絲萌發(fā)較晚，生長(zhǎng)速度較慢，長(zhǎng)勢(shì)較弱。原因是在相同消毒時(shí)間內(nèi)，二氧化氯濃度過(guò)高，其在培養(yǎng)料內(nèi)的殘存量較多，在殺滅雜菌的同時(shí)也抑制了平菇菌絲的生長(zhǎng)。

2）消毒時(shí)間。處理1～5消毒時(shí)間低于72h，菌絲萌發(fā)較晚，菌絲色澤淡白，粗細(xì)與整齊度一般，長(zhǎng)勢(shì)較弱；處理6～10消毒時(shí)間等于或高于72h，菌絲萌發(fā)較早，菌絲較粗、較密，整齊度較好，長(zhǎng)勢(shì)較旺。原因是料袋內(nèi)二氧化氯的殘存量與消毒時(shí)間有關(guān)，隨著消毒時(shí)間的延長(zhǎng)，殘留在料袋內(nèi)的二氧化氯相對(duì)減少，其對(duì)平菇菌絲生長(zhǎng)的抑制作用也隨之減弱。

3）活化時(shí)間。平菇菌絲在2～5d內(nèi)萌發(fā)，各種不同處理的平菇菌絲長(zhǎng)勢(shì)略有差異。其中，處理1、處理3和處理5～6的菌絲潔白，比較整齊，長(zhǎng)勢(shì)較好；處理7～10菌絲稀疏不整齊。原因是活化時(shí)間與二氧化氯的釋放有關(guān)，在配制二氧化氯水溶液時(shí)，二氧化氯釋放的量通常隨活化時(shí)間的增加而逐漸增大，直至一定水平后保持不變。

3討論與結(jié)論

1）試驗(yàn)結(jié)果表明，低濃度二氧化氯處理對(duì)雜菌的防治效果不明顯，感染率較高，高濃度二氧化氯處理對(duì)雜菌的防治效果較好；消毒與活化時(shí)間對(duì)雜菌防治效果的影響不大，其原因有待研究。但在生產(chǎn)實(shí)踐中，要獲得良好的生物學(xué)效益，必須考慮消毒時(shí)間與活化時(shí)間對(duì)食用菌菌絲生長(zhǎng)的影響。

2）雖然高濃度的二氧化氯對(duì)雜菌的防治效果顯著，但同時(shí)也抑制了平菇菌絲的生長(zhǎng)。這是因?yàn)楦邼舛鹊亩趸仍谂囵B(yǎng)料內(nèi)殘存量較多，對(duì)平菇菌絲的生長(zhǎng)有抑制作用，尤其在接種初期更為突出。因此，利用二氧化氯消毒劑拌料栽培平菇時(shí)，不能單方面從殺滅雜菌的角度考慮二氧化氯劑量，還要考慮二氧化氯對(duì)平菇菌絲生長(zhǎng)的影響，從而獲得更高的生物學(xué)效益。消毒時(shí)間對(duì)平菇菌絲生長(zhǎng)有一定的影響。培養(yǎng)料內(nèi)二氧化氯的殘存量與消毒時(shí)間有關(guān)，隨著消毒時(shí)間的延長(zhǎng)，殘留在料袋內(nèi)的二氧化氯相對(duì)減少，其對(duì)平菇菌絲生長(zhǎng)的抑制作用也隨之減弱，所以消毒時(shí)間短，平菇菌絲長(zhǎng)勢(shì)較弱；消毒時(shí)間長(zhǎng)，平菇菌絲長(zhǎng)勢(shì)較旺。活化時(shí)間與二氧化氯的釋放有關(guān)，二氧化氯釋放速度對(duì)平菇菌絲生長(zhǎng)影響的機(jī)理有待進(jìn)一步研究。

3）二氧化氯作為一種新型的消毒劑，越來(lái)越多地應(yīng)用于食用菌栽培領(lǐng)域，在生產(chǎn)實(shí)踐中，為了獲得最佳的效益，必須綜合考慮二氧化氯的濃度、消毒時(shí)間以及活化時(shí)間三者的優(yōu)化組合。在當(dāng)前大力推廣綠色種植、生態(tài)工藝、節(jié)能減排的形勢(shì)下，利用二氧化氯消毒劑拌料栽培食用菌具有積極的意義，雖然它可以代替?zhèn)鹘y(tǒng)的滅菌方法，簡(jiǎn)化栽培工藝，降低栽培成本，節(jié)省人力物力，但是食品安全問(wèn)題不容忽視。在食用菌栽培過(guò)程中使用二氧化氯消毒劑，有必要對(duì)藥物殘留及相關(guān)問(wèn)題做進(jìn)一步的調(diào)查論證，以確保安全。