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本文作者：夏飛1,2梁利國(guó)2謝駿2作者單位：1南京農(nóng)業(yè)大學(xué)無(wú)錫漁業(yè)學(xué)院2中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院淡水漁業(yè)研究中心

菌落形態(tài)特征

以肝胰腺為樣本劃線接種于LB瓊脂平板上，30℃培養(yǎng)18h，培養(yǎng)基上長(zhǎng)出大量白色菌落，直徑1.5mm，表面光滑，中央隆起。

回歸感染試驗(yàn)結(jié)果

用分離菌株DF-1進(jìn)行人工回感試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1。菌液濃度為4×108CFU/mL時(shí)試驗(yàn)魚(yú)死亡率為100%，菌液濃度為4×107CFU/mL時(shí)試驗(yàn)魚(yú)只有部分死亡。菌液濃度為4×109CFU/mL時(shí)試驗(yàn)魚(yú)8h開(kāi)始死亡，20h時(shí)全部死亡，發(fā)病魚(yú)體表現(xiàn)出自然發(fā)病的癥狀。解剖病魚(yú)取肝胰腺分離到優(yōu)勢(shì)菌落，經(jīng)細(xì)菌學(xué)鑒定為維氏氣單胞菌。

生理生化特性

對(duì)分離菌株DF-1的生化特性的測(cè)定結(jié)果歸納見(jiàn)表2。

16SrRNA基因序列及系統(tǒng)進(jìn)化關(guān)系

分離菌株DF-1在GenBank的登錄號(hào)為:JQ301790，基因序列測(cè)序結(jié)果16SrRNA基因長(zhǎng)度為1453bp。將菌株所擴(kuò)增的16SrRNA基因序列在NCBI通過(guò)Blast進(jìn)行同源性檢索，結(jié)果其與氣單胞菌屬細(xì)菌16SrRNA基因序列自然聚類，且與維氏氣單胞菌聚為一個(gè)分支，采用鄰接法構(gòu)建菌株分子發(fā)育樹(shù)如圖1，分離菌株在系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)上與維氏氣單胞菌(登錄號(hào):JN083778)屬同一支，同源性達(dá)99%以上。結(jié)合形態(tài)學(xué)和生理生化特征將所分離菌株鑒定為維氏氣單胞菌。

藥敏試驗(yàn)結(jié)果

分離菌DF-1對(duì)37種抗生素的藥敏試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3。該菌對(duì)甲哌利福霉素、鏈霉素、卡那霉素、阿米卡星、慶大霉素、妥布霉素、新生霉素、氟苯尼考等16種抗生素敏感;對(duì)青霉素G、氨芐西林、苯唑西林、紅霉素、萬(wàn)古霉素、羅紅霉素、氟羅沙星等15種抗生素表現(xiàn)出耐藥性;對(duì)O/129弧菌抑制劑不敏感。

本研究分離得到菌株DF-1，進(jìn)行人工感染試驗(yàn)，該菌株表現(xiàn)出較強(qiáng)的致病力，能使健康鯽出現(xiàn)和自然病魚(yú)相似的病癥，并從病魚(yú)體中分離病原菌，菌體形態(tài)特征與菌株DF-1相同，同時(shí)生理生化反應(yīng)以及16SrRNA鑒定為維氏氣單胞菌。目前對(duì)于水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物的疾病大多仍采用抗菌藥物防治的辦法來(lái)控制其發(fā)生和流行?；瘜W(xué)藥物防治容易導(dǎo)致病原菌產(chǎn)生耐藥性，甚至是多重耐藥性［12］。本試驗(yàn)以37種抗菌藥物對(duì)維氏氣單胞菌進(jìn)行了藥物敏感性測(cè)定，結(jié)果發(fā)現(xiàn)試驗(yàn)菌株對(duì)甲哌利福霉素、鏈霉素、卡那霉素等16種藥中度敏感;而對(duì)青霉素、苯唑西林、氨芐西林等15種藥物表現(xiàn)出耐藥性;對(duì)弧菌抑制劑O/129不敏感。藥敏試驗(yàn)結(jié)果與唐毅等［13］的結(jié)果有所差異，這可能是由于細(xì)菌對(duì)抗生素類藥物的耐藥性具有頻繁的變異性，加之同一種菌在不同的環(huán)境條件下會(huì)有不同的藥物敏感性。因此應(yīng)根據(jù)藥敏試驗(yàn)結(jié)果和維氏氣單胞菌的耐藥性合理選擇抗菌藥物進(jìn)行治療，以減少耐藥菌株的產(chǎn)生。