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【摘要】目的研究女貞子炮制前后5-羥甲基糠醛（5-hydroxymethylfurfural，5-HMF）的含量變化。方法制備不同炮制條件的女貞子，采用HPLC法測(cè)定女貞子生品及炮制品中5-HMF的含量。結(jié)果女貞子生品未檢測(cè)到5-HMF，炮制后產(chǎn)生5-HMF，不同炮制品中的含量依次為：酒燉品＞清蒸品＞酒蒸品，且隨蒸制時(shí)間延長(zhǎng)含量增加。結(jié)論首次建立了HPLC測(cè)定女貞子中5-HMF含量的方法，該法穩(wěn)定可靠，可用于其質(zhì)量控制；蒸制方法和蒸制時(shí)間均對(duì)5-HMF的含量變化有影響，這種改變是否與炮制增效有關(guān)，值得進(jìn)一步研究。

【關(guān)鍵詞】女貞子；蒸制；5-羥甲基糠醛；高效液相色譜法

女貞子為木犀科植物女貞LigustrumlucidumAit.的干燥成熟果實(shí)，系臨床常用中藥，具有滋補(bǔ)肝腎，明目烏發(fā)之功效［1］。2005年版《中國(guó)藥典》規(guī)定其炮制方法為酒蒸或酒燉。女貞子酒制后補(bǔ)益作用增強(qiáng)。5-HMF是葡萄糖、果糖等六碳糖在酸水條件下的熱分解產(chǎn)物，廣泛存在于可發(fā)生糖的熱降解反應(yīng)的食品和植物中。研究表明，5-HMF具有抗氧化、抗心肌缺血、改善血管微循環(huán)、促進(jìn)免疫系統(tǒng)功能等藥理作用［2］，地黃、山茱萸等在蒸制過(guò)程中5-HMF含量均有較大幅度的增加［3,4］，目前尚未見(jiàn)女貞子中5-HMF的相關(guān)研究報(bào)道。因此，作者建立了女貞子中5-HMF的含量測(cè)定方法，并對(duì)不同蒸制方法制備的女貞子飲片中5-HMF的含量進(jìn)行比較，為進(jìn)一步研究女貞子的蒸制增效機(jī)理提供科學(xué)依據(jù)。

1材料

1.1儀器與試藥

Agilent1100高效液相色譜儀(在線脫氣機(jī)、四元泵、VWD檢測(cè)器)；電子分析天平（感量0.00001，北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）；TCQ-250型超聲波清洗器（北京醫(yī)療設(shè)備二廠）。

5-HMF對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)為111626-200804，HPLC色譜歸一化法測(cè)定純度＞98%）；圣塔黃酒（紹興市東湖酒業(yè)有限公司，總糖≤15.0g·L-1，酒精度≥8.0%）；乙腈為色譜純；娃哈哈純凈水；其他試劑均為分析純。

1.2實(shí)驗(yàn)藥材

女貞子藥材（產(chǎn)地浙江）購(gòu)自北京市白塔寺藥店，經(jīng)北京中醫(yī)藥大學(xué)張貴君教授鑒定為木犀科植物女貞LigustrumlucidumAit.的干燥成熟果實(shí)。

2方法與結(jié)果

2.1炮制品的制備生品：去除枝梗后干燥成熟的女貞果實(shí)；清蒸品：凈女貞子100g，置蒸鍋內(nèi)分別蒸4，8h，取出干燥；酒蒸品：凈女貞子100g，加黃酒20ml，拌勻，悶潤(rùn)后置蒸鍋內(nèi)分別蒸4，8h，取出干燥；酒燉品：凈女貞子100g，加黃酒20ml，拌勻，密閉，悶潤(rùn)后置蒸鍋內(nèi)分別燉4，8h，取出干燥。

2.25-HMF的含量測(cè)定

2.2.1對(duì)照品溶液的制備精密稱取5-HMF對(duì)照品5.98mg，置25ml的棕色容量瓶中，加無(wú)水甲醇至刻度，配成濃度為0.2392mg·ml-1的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。精密量取5-HMF標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液1.0ml，置25ml的棕色容量瓶中，加無(wú)水甲醇至刻度，配成濃度為9.568μg·ml-1的對(duì)照品溶液，搖勻，備用。

2.2.2供試品溶液的制備精密稱取樣品粉末（過(guò)40目篩）1.0g，精密加80%甲醇20ml，稱重，室溫超聲20min，放置，加80%甲醇補(bǔ)足重量，搖勻，過(guò)濾，然后過(guò)0.45μm的微孔濾膜，取續(xù)濾液，作為供試品溶液，備用。

2.2.3色譜條件色譜柱：DiamonsilC18（4.6mm×250mm，5μm），流動(dòng)相：乙腈-水（12∶88），流速：1.0ml·min-1，柱溫：25℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：284nm，進(jìn)樣量：10μl。

2.2.4方法學(xué)考察標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：分別精密吸取5-HMF對(duì)照品溶液1，2，4，6，8，10μl，注入高效液相色譜儀，分別在上述色譜條件下測(cè)定峰面積。以標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)量為橫坐標(biāo)，峰面積積分值為縱坐標(biāo)，得回歸方程：Y=7568.8X+9.1066，r=0.9999。結(jié)果表明，5-HMF在9.568×10-3～95.68×10-3μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

精密度實(shí)驗(yàn)：取9.568μg·ml-1的5-HMF對(duì)照品溶液連續(xù)進(jìn)樣6次，每次10μl，測(cè)定峰面積，結(jié)果RSD為0.80%，表明儀器精密度良好。

重復(fù)性實(shí)驗(yàn)：精密稱取酒燉8h女貞子飲片1.0g，照“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，進(jìn)樣10μl，測(cè)定峰面積，結(jié)果RSD為2.73%，表明該方法重復(fù)性良好。

穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)：精密稱取酒燉8h女貞子飲片0.9995g，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，于配置后0，2，4，6，8，10h分別進(jìn)樣10μl，測(cè)定峰面積，計(jì)算RSD為1.89%，表明供試品溶液在10h內(nèi)穩(wěn)定。

回收率實(shí)驗(yàn)：精密稱取酒燉8h女貞子飲片0.5g，加入濃度為0.2392mg·ml-1的對(duì)照品儲(chǔ)備液100μl，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備樣品溶液，進(jìn)樣10μl測(cè)定峰面積，重復(fù)6次，計(jì)算平均回收率為100.03%，RSD為2.70%。

2.2.5炮制品含量測(cè)定將不同蒸制方法制備的女貞子炮制品，照“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，進(jìn)樣10μl，依法測(cè)定峰面積，計(jì)算含量。色譜圖見(jiàn)圖1，結(jié)果見(jiàn)表1。表1女貞子樣品5-HMF含量測(cè)定結(jié)果（略）

3討論

由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，女貞子生品不含5-HMF，蒸制后產(chǎn)生，其含量依次為酒燉8h＞清蒸8h＞酒燉4h＞清蒸4h＞酒蒸8h＞酒蒸4h。即相同蒸制時(shí)間下，酒燉品＞清蒸品＞酒蒸品。若蒸制方法相同，則隨蒸制時(shí)間的延長(zhǎng)5-HMF含量明顯升高。表明蒸制方法和蒸制時(shí)間對(duì)女貞子中5-HMF含量的影響不同。

酒燉品收率和5-HMF含量均明顯高于清蒸品和酒蒸品，可能與密閉蒸時(shí)可防止酒的揮散及水溶性成分流失有關(guān)。表明女貞子傳統(tǒng)常采用酒燉的方法炮制具有一定的科學(xué)性。

本文建立了女貞子中5-HMF的HPLC含量測(cè)定方法，該方法操作簡(jiǎn)單，結(jié)果穩(wěn)定可靠，可為女貞子的質(zhì)量控制提供科學(xué)依據(jù)。

女貞子蒸制過(guò)程中5-HMF含量的變化規(guī)律與糖類成分的變化之間的關(guān)系以及與補(bǔ)益作用增強(qiáng)的關(guān)系正在進(jìn)一步研究中。超級(jí)秘書網(wǎng)：

【參考文獻(xiàn)】

［1］國(guó)家藥典委員會(huì)．中國(guó)藥典,Ⅰ部［S］．北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：31．

［2］耿放，王喜軍．5-羥甲基-2-糠醛（5-HMF）在中藥復(fù)方中研究現(xiàn)狀及相關(guān)藥效探討［J］．世界科學(xué)技術(shù)-中醫(yī)藥現(xiàn)代化，2005，7（6）：52．

［3］朱梅芬，劉向前，吳柱熹，等．地黃的炮制對(duì)梓醇和5-羥甲基糠醛含量的影響［J］．中國(guó)中藥雜志，2007，32（12）：1155.

［4］杜偉鋒，丁霞，蔡寶昌．山茱萸炮制前后5-羥甲基糠醛的含量變化研究［J］．中成藥，2007，29（12）：1801.