前言：想要寫出一篇令人眼前一亮的文章嗎？我們特意為您整理了5篇流式細(xì)胞儀范文，相信會(huì)為您的寫作帶來幫助，發(fā)現(xiàn)更多的寫作思路和靈感。

流式細(xì)胞儀范文第1篇

【關(guān)鍵詞】 缺鐵性貧血；淋巴細(xì)胞免疫表型； 流式細(xì)胞儀；骨髓細(xì)胞學(xué)檢查

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.14.009

Investigation of flow cytometry in examination of lymphocyte immunophenotyping in iron-deficiency anemia patients YANG Hong， MENG Yan， WANG Chao. Department of Inspection， Beijing Fengtai Hospital， Beijing 100070， China

【Abstract】 Objective To research the changes of lymphocyte immunophenotyping in iron-deficiency anemia （IDA） patients. Methods There were 30 iron-deficiency anemia patients （IDA group） and 30 healthy people （normal control group）， and they all received flow cytometry three-color direct immunofluorescent method for detection of lymphocyte immunophenotyping. Comparison was made on the peripheral blood lymphocyte immunophenotyping between the two groups. Results IDA group had much lower levels of CD3+、CD3+CD4+， and CD4+/CD8+ ratio in peripheral blood than the normal control group （P<0.01）， and it also had higher CD3+ CD8+ value than the normal control group （P<0.05）. Conclusion Iron-deficiency anemia may affect proliferation and differentiation of T lymphocyte， resulting in decreased immune functions and immune regulatory dysfunction.

【Key words】 Iron-deficiency anemia； Lymphocyte immunophenotyping； Flow cytometry； Marrow cytology examination

缺鐵性貧血是因機(jī)體鐵的需要量增加和鐵吸收減少， 使體內(nèi)儲(chǔ)存鐵耗盡而缺乏， 又未得到足夠的補(bǔ)充， 導(dǎo)致合成血紅蛋白的鐵不足而引起的貧血。是人類最常見的慢性疾病之一。淋巴細(xì)胞免疫表型是了解機(jī)體免疫系統(tǒng)功能的狀態(tài)。在正常機(jī)體內(nèi)各淋巴細(xì)胞亞群的相互作用， 維護(hù)著機(jī)體正常的免疫功能， 當(dāng)淋巴細(xì)胞亞群的數(shù)量和功能發(fā)生異常時(shí)， 都可導(dǎo)致機(jī)體免疫功能紊亂并發(fā)生一系列的病理變化。淋巴細(xì)胞免疫表型的分析對(duì)一些疾病的診斷、治療、免疫功能重建、器官移植監(jiān)測(cè)等有重要的臨床意義。流式細(xì)胞儀檢測(cè)缺鐵性貧血與淋巴細(xì)胞免疫表型的關(guān)系， 國內(nèi)外報(bào)道較少?，F(xiàn)將本院2012年1月～2014年12月收治的30例IDA患者進(jìn)行了外周血淋巴細(xì)胞免疫表型（CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+及CD4+/CD8+）的檢測(cè)， 并與正常人對(duì)照?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 30例IDA患者作為IDA組， 男5例， 女25例， 年齡23～81歲， 中位年齡46.5歲。血紅蛋白48～92 g/L， 紅細(xì)胞（3.24～4.76）×1012/L， 網(wǎng)織紅細(xì)胞0.1%～1.0%， 外周血紅細(xì)胞呈小細(xì)胞低色素性改變。骨髓細(xì)胞學(xué)檢查示：骨髓增生明顯活躍-活躍， 粒/紅比值1.91～4.37， 紅系增生活躍， 以中晚幼紅細(xì)胞為主， 晚幼紅細(xì)胞核固縮明顯。成熟紅細(xì)胞大小不等， 以小者居多， 中心淡染區(qū)明顯擴(kuò)大。骨髓細(xì)胞鐵染色：外鐵（-）， 細(xì)胞內(nèi)鐵為0～13%， 骨髓報(bào)告：符合缺鐵性貧血骨髓象。血清鐵2.51～11.5 mol/L， 血清鐵蛋白3.15～12.4 ng/L。全部病例服用鐵劑治療有效。另選健康體檢者30例作為正常對(duì)照組， 其中男10例， 女20例， 為血常規(guī)、血清鐵、鐵蛋白各項(xiàng)指標(biāo)均在正常范圍內(nèi)， 且無其他器質(zhì)性病變。兩組一般資料比較， 差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）， 具有可比性。

1. 2 儀器與試劑 采用美國BD FACSCalibur流式細(xì)胞儀， 三色標(biāo)記McAb：CD3FITC/CD4PE/CD45PerCP、CD3FITC/CD8PE/CD45PerCP、紅細(xì)胞裂解液、熒光校準(zhǔn)微球 calibrate 3 Beads均購自美國BD公司。

1. 3 方法

1. 3. 1 樣品的制備 各管分別加入CD3FITC/CD4PE/CD45 PerCP、CD3FITC/CD8PE/CD45PerCP熒光抗體20 μl， 再分別加入新鮮EDTA-K3抗凝外周血100 μl， 混勻， 室溫避光孵育 20 min， 加入 1∶9 配制的溶血素 2 ml， 避光 10 min。2000 r/min 離心5 min， 倒掉上清液， 加入 PBS 緩沖液 2 ml， 2000 r/min 離心5 min。去上清， 加入500 μl PBS混勻待測(cè)。

1. 3. 2 流式細(xì)胞儀測(cè)定 以熒光微球calibrite 3-colour校準(zhǔn)儀器補(bǔ)償、使儀器分辨率CV<2%達(dá)到最佳工作狀態(tài)， 采用MultiSET 軟件獲取數(shù)據(jù)。建立SSC/CD45Percp、CD4PE/CD3 FITC、SSC/CD3FITC熒光點(diǎn)圖， 用CD45-PerCP/SSC-Gating和Back-Gating 細(xì)胞群雙圈門以排除碎片的干擾， 調(diào)節(jié) FSC、SSC、Detectors/Amps、Copensation， FL1-FL 2% 、FL2-FL 1% 熒光補(bǔ)償， 每管獲取1.5萬個(gè)細(xì)胞， 建立CD4+/CD3+、CD8+/CD3+散點(diǎn)圖， Th（CD4+）和Ts（CD8+）的表達(dá)情況， 同時(shí)計(jì)算出 Th/Ts 比值。

1. 4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)研究數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ x-±s）表示， 采用t檢驗(yàn)。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

IDA組外周血中CD3+、CD3+CD4+及CD4+/CD8+比值顯著低于正常對(duì)照組（P<0.01）， CD3+CD8+值高于正常對(duì)照組（P<0.05）。見表1。

3 討論

3. 1 缺鐵性貧血是一種全球性疾病， 雖然隨著現(xiàn)代物質(zhì)生活條件的改善， 各種營(yíng)養(yǎng)缺乏性疾病已大為減少， 但缺鐵性貧血仍然是人們所面臨的威脅健康的一大難題。為了了解缺血性貧血對(duì)機(jī)體免疫系統(tǒng)功能的影響， 本試驗(yàn)通過流式細(xì)胞儀三色免疫標(biāo)記法觀察30例成人缺鐵性貧血外周血淋巴細(xì)胞免疫表型的變化， 總結(jié)出缺鐵性貧血主要影響機(jī)體的細(xì)胞免疫功能， 可引起細(xì)胞免疫功能障礙和免疫調(diào)節(jié)紊亂。

3. 2 淋巴細(xì)胞是免疫系統(tǒng)的重要組成部分， 在人體細(xì)胞免疫中發(fā)揮核心作用。T 細(xì)胞免疫主要通過T 細(xì)胞的增殖分化來實(shí)現(xiàn)， 這是一個(gè)消耗能量 、依賴核酸及蛋白質(zhì)合成的復(fù)雜過程。CD3+ CD4+ T 細(xì)胞是輔/誘導(dǎo)性T淋巴細(xì)胞（Th細(xì)胞）， 也是遲發(fā)性超敏反應(yīng)的啟動(dòng)者、促使B細(xì)胞產(chǎn)生抗體的輔助細(xì)胞、抑制性T淋巴細(xì)胞的誘導(dǎo)細(xì)胞；CD3+CD8+ T 細(xì)胞是抑制性/細(xì)胞毒性T細(xì)胞（Ts細(xì)胞）， 是細(xì)胞毒性T 細(xì)胞介導(dǎo)反應(yīng)的效應(yīng)細(xì)胞， 也是抑制B細(xì)胞產(chǎn)生抗體的抑制性細(xì)胞； 當(dāng)CD4+/CD8+比值發(fā)生變化時(shí)， 可引起機(jī)體免疫功能降低。從而影響淋巴細(xì)胞的增殖和分化， 使T淋巴細(xì)胞功能受損， 導(dǎo)致免疫功能低下和免疫調(diào)節(jié)紊亂。

3. 3 缺鐵性貧血可對(duì)多系統(tǒng)造成危害， 但對(duì)免疫功能的具體影響具有爭(zhēng)議。Salaman 等認(rèn)為， IDA 可影響人體整個(gè)免疫系統(tǒng)， 使特異性和非特異性免疫功能均下降； 本研究從機(jī)體免疫功能角度出發(fā)， 分析IDA 對(duì)人體免疫功能的影響， 結(jié)果發(fā)現(xiàn)IDA 患者CD3+、CD3+CD4+T細(xì)胞比例減少、CD3+CD8+ T 細(xì)胞比例升高， 提示IDA影響T細(xì)胞的增殖分化， 導(dǎo)致細(xì)胞免疫功能障礙和免疫調(diào)節(jié)機(jī)制紊亂。

參考文獻(xiàn)

 張之南， 沈悌. 血液病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn). 北京： 科學(xué)出版社， 2007：6-9.

 王建中. 流式細(xì)胞術(shù)分析血液淋巴細(xì)胞免疫表型方法學(xué)研究. 中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志， 2000， 23（4）：203-206.

 王臘梅， 周紅彬. 3～6歲缺鐵性貧血患兒免疫功能變化研究 . 西南軍醫(yī)， 2004， 6（4）：9-10.

 禮征南， 王亞男， 董敏， 等. T-淋巴細(xì)胞亞群在血液病中的診斷應(yīng)用. 中國醫(yī)藥前沿， 2010， 5（4）：63-64.

流式細(xì)胞儀范文第2篇

[關(guān)鍵詞]秋海棠；愈傷組織；變異；DNA含量

離體保存是種質(zhì)資源保存的一條重要途徑，具有節(jié)省人力、物力、財(cái)力以及避免自然災(zāi)害和病蟲害等優(yōu)點(diǎn)。但是在離體保存過程中常有遺傳變異的發(fā)生，因此需要對(duì)離體保存材料進(jìn)行鑒定。目前的鑒定方法包括形態(tài)學(xué)標(biāo)記、細(xì)胞學(xué)標(biāo)記、分子標(biāo)記等。

秋海棠屬植物的染色體很小，計(jì)數(shù)十分困難。而且某些種類的細(xì)胞質(zhì)中含有許多小顆粒，與因縊縮而變得極小的染色體難以區(qū)分，觀察難度較大。本研究用流式細(xì)胞儀對(duì)3種培養(yǎng)多年的秋海棠進(jìn)行了DNA含量分析，以期為進(jìn)一步研究該屬植物離體培養(yǎng)的遺傳變異規(guī)律提供基礎(chǔ)。

1.材料與方法

1.1植物材料

供試材料為溫室中保存和以愈傷組織形式保存10年的的花葉秋海棠（β.cathayana）、掌葉秋海棠（β.hemsleyana）和假厚葉秋海棠（β.pseudodryadis）。培養(yǎng)基為1／2MS培養(yǎng)基，不加激素，每2個(gè)月繼代一次。實(shí)驗(yàn)前隨機(jī)選取3種秋海棠屬植物的愈傷組織進(jìn)行培養(yǎng)，直至幼嫩葉片長(zhǎng)出。

1.2方法

選取葉片約1cm2，加入0.5ml的Otto　I　buffer和2μl／ml的β巰基乙醇，用手術(shù)刀將其切碎，室溫孵育30min后用200目尼龍網(wǎng)過濾得到懸浮液。采用同樣的方法獲得水稻懸浮液。往懸浮液中加入1ml的Otto　IIbuffer（50μg·L-1的碘化丙啶和50μg·L-1的RNase），200目尼龍網(wǎng)過濾后置于常溫黑暗條件下染色1h。

1.3分析方法

流式細(xì)胞儀系統(tǒng)為FACSAria（美國BD公司）。以水稻為內(nèi)標(biāo)，每個(gè)種測(cè)定5個(gè)樣品，每個(gè)樣品至少收集20，000個(gè)細(xì)胞，變異系數(shù)控制在8％以內(nèi)。使用BDFACSDiva軟件分析數(shù)據(jù)。DNA含量差異顯著性分析采用SPSS13.0分析軟件。

2.結(jié)果與分析

結(jié)果表明，離體保存的三種秋海棠植物中，掌葉秋海棠的DNA含量發(fā)生了非整倍性變化，離體培養(yǎng)材料的DNA含量是保存在溫室中材料的1.5倍，其它兩種秋海棠無明顯變化（表1）。

3.討論

流式細(xì)胞術(shù)（Flow　Cytometry，F(xiàn)CM）是目前染色體倍性鑒別中一種快速、有效地方法，它可以直接或間接測(cè)定細(xì)胞的DNA含量。20世紀(jì)90年代國內(nèi)開始就有學(xué)者將FCM運(yùn)用到植物倍性分析中。

通過對(duì)3種秋海棠DNA含量的測(cè)定，我們發(fā)現(xiàn)，掌葉秋海棠的DNA含量發(fā)生了非整倍性變化，而其它兩種秋海棠屬植物的DNA含量沒有發(fā)生變化。這3種秋海棠植物于同時(shí)進(jìn)行離體保存，保存的時(shí)間和條件均相同，但它們的DNA含量變化的情況并不相同，說明植物體本身是影響變異的重要因素。另外，掌葉秋海棠的DNA含量為非整倍性變化，其原因可能是愈傷組織在培養(yǎng)的過程中由于單個(gè)染色體的丟失或獲得、不分離和染色體滯后所致。張俊娥等認(rèn)為，在愈傷組織中有DNA含量加倍的現(xiàn)象是否就一定是染色體數(shù)目發(fā)生變化，不能僅僅通過DNA含量分布曲線來下結(jié)論，還需對(duì)其進(jìn)性細(xì)胞周期分析。因?yàn)榧?xì)胞處在分裂間期的s期時(shí)DNA進(jìn)行復(fù)制，DNA含量也要加倍。所以，對(duì)于掌葉秋海棠DNA含量發(fā)生非整倍性變化的原因還有待于進(jìn)一步研究。

流式細(xì)胞儀范文第3篇

關(guān)鍵詞：自噬；凋亡；3-甲基腺嘌呤（3-MA）；順鉑（DDP）；骨肉瘤細(xì)胞

1實(shí)驗(yàn)材料

1.1細(xì)胞來源 骨肉瘤MG63細(xì)胞購于中科院上海細(xì)胞庫。

1.2主要試劑 3-甲基腺嘌呤（3-MA）、二甲基亞砜（DMSO）、四甲基偶氮唑鹽（MTT）、單丹黃酰尸胺（MDC）購于美國Sigma公司。Annexin-FITC/PI凋亡試劑盒購于上海碧云天公司。

1.3實(shí)驗(yàn)儀器 流式細(xì)胞儀（美國BD公司）、酶標(biāo)儀（美國Thermo公司）、倒置熒光顯微鏡（德國LEICA公司）、低溫高速旋轉(zhuǎn)離心機(jī)（美國Beckman公司）、細(xì)胞培養(yǎng)孔板（美國NEST公司）。

1.4試劑配制

1.4.1 MDC溶液 將1 mg MDC粉末溶于1 mL無菌水中，可獲得3 mmol/L的MDC溶液，取上述溶液100 μL加到6 mL無菌水中，獲得實(shí)驗(yàn)用50 μmol/L的最終溶液，置于4℃冰箱避光保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4.2 DDP溶液 取1 mL濃度為5 mg/mL的DDP，用無菌水稀釋到250 mL，即獲得20 μg/mL的DDP用于實(shí)驗(yàn)，4℃冰箱保存。

2實(shí)驗(yàn)分組

該實(shí)驗(yàn)分為4組：空白對(duì)照組（加入等量的培養(yǎng)液做對(duì)照）、3-MA組（僅添加濃度為12.5 μg/mL的3-MA）、DDP組（僅添加濃度為20 μg/mL的DDP）、3-MA+DDP組（12.5 μg/mL的3-MA和20 μg/mL DDP同時(shí)添加）。

3實(shí)驗(yàn)方法

3.1細(xì)胞培養(yǎng) 骨肉瘤MG63細(xì)胞培養(yǎng)于提前配置好的含有10%胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基中，其中含有100 U/mL的青霉素和100 μg/mL的鏈霉素。在濕度飽和的情況下，培養(yǎng)于5%CO2、37°的培養(yǎng)箱中，隔天換一次培養(yǎng)液，3 d傳代1次，取適量對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)研究。

3.2 MTT比色法 外源性MTT在活細(xì)胞線粒體內(nèi)的琥珀酸脫氫酶作用下能夠還原成藍(lán)紫色結(jié)晶甲，且該結(jié)晶物質(zhì)不溶于水，DMSO可使不溶于水的甲溶解，在490 nm波長(zhǎng)處可以用酶標(biāo)儀檢測(cè)光吸收值，在死亡細(xì)胞中不存在上述反應(yīng)過程，檢測(cè)不到吸光度值，從而可以用來比較不同組之間細(xì)胞增殖率。取細(xì)胞數(shù)為1×108個(gè)/L，種植于96孔板中，分別在每孔添加等量的細(xì)胞懸液，細(xì)胞培養(yǎng)液培養(yǎng)10 h后根據(jù)實(shí)驗(yàn)分組在3個(gè)組中加入相應(yīng)的藥物，在恒溫（37℃）5%CO2的環(huán)境下培養(yǎng)24 h后，將每孔加入等量的MTT溶液作用4 h，然后PBS溶液洗1遍，再加入等量的DMSO溶液，搖擺15 min，然后在酶標(biāo)儀上檢測(cè)不同組的吸光度值（A）。結(jié)合以下公式計(jì)算細(xì)胞增殖率：細(xì)胞增殖率（%）=（實(shí)驗(yàn)組A/對(duì)照組A）×100%。

3.3 MDC染色法 單丹黃酰尸胺（MDC）被細(xì)胞吸收后蓄積于嗜酸性的細(xì)胞囊泡中，在熒光顯微鏡下可以看到藍(lán)綠色或黃綠色點(diǎn)狀結(jié)構(gòu)出現(xiàn)在細(xì)胞核周圍，經(jīng)常被用來檢測(cè)細(xì)胞自噬囊泡的存在。取處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的骨肉瘤MG63細(xì)胞（細(xì)胞數(shù)為1×105個(gè)/mL）加入24孔細(xì)胞培養(yǎng)板中培養(yǎng)12 h待細(xì)胞貼壁后根據(jù)實(shí)驗(yàn)分組加入相應(yīng)濃度的藥物繼續(xù)培養(yǎng)24 h，24 h后加入MDC溶液（濃度為50 μmol/L）避光環(huán)境中培養(yǎng)1 h，PBS洗滌3次，4%多聚甲醛固定，用PBS洗滌，然后用倒置熒光顯微鏡觀察自噬空泡差異；同樣方法，經(jīng)相應(yīng)藥物處理24 h后，MDC染色、4%多聚甲醛固定，PBS洗滌，然后分別收集各組細(xì)胞（不能收集倒置熒光顯微鏡觀察過的細(xì)胞，以免影響細(xì)胞熒光強(qiáng)度），用流式細(xì)胞儀檢測(cè)不同組細(xì)胞熒光強(qiáng)度。

3.4流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率 磷脂酰絲氨酸位于正常細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè)，但是在細(xì)胞凋亡的初期，磷脂酰絲氨酸從細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè)翻轉(zhuǎn)到細(xì)胞膜的表面，出現(xiàn)在細(xì)胞外環(huán)境中，也就是所謂的磷脂酰絲氨酸外翻。Annexin-V是一種分子量為35~36 KD的Ca2+依賴性磷脂結(jié)合蛋白，能與磷脂酰絲氨酸高親和力特異性結(jié)合。 Annexin-FITC/PI凋亡試劑盒是用帶綠色熒光燈熒光探針FITC標(biāo)記的Annexin，直接用流式細(xì)胞儀檢測(cè)磷脂酰絲氨酸外翻這一細(xì)胞凋亡的重要特征，可以使壞死細(xì)胞呈綠色熒光。而碘化丙啶（PI）可以將壞死細(xì)胞和凋亡晚期失去細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞染成紅色。因正常細(xì)胞不被FITC和PI染色，所以二者結(jié)合可以較準(zhǔn)確檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況。將細(xì)胞數(shù)為1×105個(gè)/mL的骨肉瘤MG63細(xì)胞種植于6孔板中培養(yǎng)，待細(xì)胞貼壁后，結(jié)合試驗(yàn)分組加入相應(yīng)藥物干預(yù)24 h，然后分組收集、離心細(xì)胞，PBS洗滌，按照Annexin-FITC/PI凋亡試劑盒說明進(jìn)行操作，經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡率，比較各組間差異。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

3.5統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示實(shí)驗(yàn)結(jié)果，在SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件幫助下進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，多組間差異用單因素方差分析進(jìn)行比較，取P

4結(jié)果

4.1 MTT法檢測(cè)各組細(xì)胞增殖抑制率 MTT法檢測(cè)結(jié)果顯示：與對(duì)照組相比，單獨(dú)添加3-MA對(duì)細(xì)胞增殖沒有明顯影響；單獨(dú)添加DDP細(xì)胞增殖率為（47.6±3.1）%；與單獨(dú)添加DDP相比，同時(shí)添加3-MA和DDP組細(xì)胞增殖率為（27.1±2.8）%，增殖率下降，P

4.2 MDC染色檢測(cè)細(xì)胞自噬 MDC染色后在細(xì)胞核周圍出現(xiàn)黃綠色的自噬空泡，與單獨(dú)添加DDP組相比，3-MA和DDP同時(shí)添加組細(xì)胞自噬空泡較少。經(jīng)倒置熒光顯微鏡拍片后顯示，見圖1。通過流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組熒光強(qiáng)度差異，結(jié)果提示：對(duì)照組為（83.1±8.2）%，單獨(dú)添加3-MA組為（89.8±9.5）%，單獨(dú)添加DDP組為（183.1±14.8）%，3-MA和DDP同時(shí)添加組為（121.5±10.4）%。3-MA和DDP同時(shí)添加組與單獨(dú)添加DDP組相比，P

圖1 不同組MDC染色后自噬空泡的變化

4.3流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡 經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測(cè)我們發(fā)現(xiàn)，單獨(dú)添加3-MA組細(xì)胞凋亡率為（2.5±0.4）%；單獨(dú)添加DDP組為（12.5±1.1）%，與對(duì)照組相比，P

圖2 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組細(xì)胞凋亡率

5討論

骨肉瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性是決定治療效果的關(guān)鍵因素，據(jù)統(tǒng)計(jì)仍有10%~25%患者對(duì)化療反應(yīng)較差，根本原因在于對(duì)化療藥物產(chǎn)生耐藥性[1-2]。另外，臨床上不合理、不規(guī)范的使用化療藥物也可引起腫瘤細(xì)胞對(duì)藥物產(chǎn)生耐藥性，將嚴(yán)重影響治療效果。近些年多數(shù)研究[3-4]認(rèn)為骨肉瘤的耐藥性與多種腫瘤基因位點(diǎn)或傳導(dǎo)通路有關(guān)，如骨肉瘤的生長(zhǎng)、發(fā)展或耐藥性與信號(hào)傳導(dǎo)子STAT3通路的激活存在一定的相關(guān)性；腫瘤細(xì)胞對(duì)甲氨蝶呤耐藥與異位轉(zhuǎn)染miR-140存在聯(lián)系等。由于新的化療方案的實(shí)施，外加新的化療輔助藥物的應(yīng)用，能很大程度上控制骨肉瘤的發(fā)展，產(chǎn)生良好治療效果[5-6]。為了尋找更有效、更廣泛的腫瘤化療輔助藥物，自噬抑制劑3-甲基腺嘌呤對(duì)腫瘤耐藥性的影響日益引起大家的關(guān)注[7-8]。

順鉑屬于細(xì)胞周期非特異性藥物，結(jié)構(gòu)類似于雙功能烷化劑，在DNA復(fù)制過程中發(fā)揮抑制作用。在骨肉瘤、肺癌、食管癌、卵巢癌等實(shí)體惡性腫瘤中應(yīng)用較廣泛。自噬是細(xì)胞通過自身來消除細(xì)胞內(nèi)部衰老或死亡細(xì)胞來維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的過程。3-甲基腺嘌呤可以通過抑制磷脂酰肌醇-3激酶（ClassⅢPI3K），阻止自噬體與溶酶體形成自噬溶酶體，進(jìn)而發(fā)揮抑制作用，是一種常見的自噬抑制劑，廣泛應(yīng)用于自噬相關(guān)基礎(chǔ)研究[9]。MDC是特異性自噬體標(biāo)記物，被MDC染色的細(xì)胞核周圍可見藍(lán)綠色或黃綠色點(diǎn)狀結(jié)構(gòu)，常用來檢測(cè)細(xì)胞自噬囊泡[10]。

本研究結(jié)合臨床中順鉑在骨肉瘤化療中的應(yīng)用，借助自噬抑制劑3-甲基腺嘌呤來說明自噬在骨肉瘤化療過程中的作用。經(jīng)MTT比色法檢測(cè)，我們發(fā)現(xiàn)3-MA+DDP組細(xì)胞增殖率明顯低于單獨(dú)添加DDP組，P

隨著人們對(duì)自噬與腫瘤發(fā)生、發(fā)展機(jī)制研究的深入，我們不難發(fā)現(xiàn)通過調(diào)控自噬可以克服腫瘤耐藥性，促進(jìn)細(xì)胞凋亡，為臨床獲得良好的治療效果提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，該研究也證實(shí)調(diào)控自噬在改進(jìn)腫瘤治療方案中有更寬闊的研究前景。但是如今，自噬抑制劑不能在臨床上應(yīng)用的主要原因主要有：①自噬在臨床上還沒有特異性的抑制劑，實(shí)驗(yàn)中應(yīng)用的藥物還不能直接應(yīng)用于臨床。②在臨床上對(duì)自噬水平的檢測(cè)到目前為止還沒有一個(gè)客觀定量的方法，比如根據(jù)一個(gè)血液標(biāo)本或者腫瘤組織就可以檢測(cè)到自噬水平。這兩點(diǎn)也正是我們下一步繼續(xù)努力研究的方向。

參考文獻(xiàn)：

[1]Longhi A,Errani C,Depaolis M,et al.Primary bone osteosarcoma in the pediatric age:state of the art[J].Cancer Treat Rev,2006,32:423-436.

[2]Mehta RG,Murillo G,Naithani R,et al.Cancer chemoprevention by natural products:how far have we come[J].Pharm Res,2010,27:950-961.

[3]Lee JW,Kim KS,An HK,et al.Dendropanoxide induces autophagy through ERK1/2 activation in MG-63 human osteosarcoma cells and autophagy inhibition enhance dendropanoxide-induced apoptosis[J].PLoS One,2013,8:e83611.

[4]Funderburk SF,Wang QJ,Yue Z.The Beclin 1-VPS34 complex-at the crossroads of autophagy and beyond[J].Trends Cell Biol,2010,20:355-362.

[5]Bacci G,Longhi A,Fagioli F,et al.Adjuvant and neoadjuvant chemotherapy for osteosarcoma of the extremities:27 year experience at Rizzoli Institute,Italy[J].Eur J Cancer,2005,41:2836-2845.

[6］Tanida I,Ueno T,Kominami E.Human light chain 3-MAPI-LC3-B is cleaved at its carboxyl-teminal met121 to exposegiy 120 for lipidation and targeting to autophagosomal membranes[J].Biol Chem,2007,279:47004-47710.

[9]Kim HJ,Lee SG,Kim YJ,et al.Cytoprotective role of autophagy during paclitaxel-induced apoptosis in Saos-2 osteosarcoma cells[J].Int J Oncol,2013,42:1985-1992.

[7]Chiu HW,Lin W,Ho SY,et al.Synergistic effects of arsenic trioxide and radiation in osteosarcoma cells through the induction of both autophagy and apoptosis[J].Radiat Res,2011,175:547-560.

[8]Zhang Z,Shao Z,Xiong L,et al.Expression of Beclin1 in osteosarcoma and the effects of down-regulation of autophagy on the chemotherapeutic sensitivity[J].J Huazhang Univ Sci Technology Med Sci,2009,29:737-740.

流式細(xì)胞儀范文第4篇

【關(guān)鍵詞】   cd36 免疫表型 多參數(shù)流式細(xì)胞術(shù)

    cd36 expression in leukemia  cells checked with multiparameter flow cytometry and its significance

    tang huarong, wang fachun, jiang yunwei, fei xia, jiang qian1,   xu wenlin,

    lin jiang

    central laboratory, people hospital, jiangsu university, zhenjiang 212002, china; 1department of medical laboratory examination, jiangbing hospital, jiangsu university, zhenjiang 212002, china

    abstract    the aim of study was to investigate the expression of cd36 in leukemia cells and to explore its significance in diagnosis and differntial diagnosis for leukemia in patients. blood samples from 133 cases of  leukemias were analyzed by cd45/ssc double parameters and multicolor flow cytometry in order  to determine the cd36 and other leukocyte differentiation antigens. the results show that  the cd36 positive rate was 21.8% (29/133) in 133 cases of  leukemia, 41.9% (26/62) in 62 cases of  aml(acute myeloid leukemia),  and none of the 54 cases of  lymphocytic leukemia was positive for this antigen. the positive rate of cd36 in m4(8/10), m5(12/12) and m6(3/3) was significantly higher than that in m1(0/9), m2(3/12), m3(0/16) (all p<0.001). the percent of positive cells  of cd36 in m5a was significantly higher than in m5b(p=0.001). a significantly negative regression was found between cd36 and cd117 in aml(r=-0.751, p=0.005). and a significantly positive regression was found between cd36 and cd14 in m4 and m5b (r=0.870, p= 0.011).  in monocyte lineage involved leukemia (mlil), the positive rate of cd36( 92.6%, 25/27 ) was significantly higher than that of cd14 ( 48.1%, 13/27)（p=0.001）.   none of the 7 cases with m5a was positive for cd14, but 4 of 5 cases of m5b were positive. the positive rate of cd117 in m5a was significantly higher than that of in m5b（p=0.01）. the positive rate of cd34 in m5 was low (33.3%,4/12). it is concluded that the combination of  cd36 with lymphoid and myeloid antigens is helpful to the diagnosis and differential diagnosis of lymphoid, myeloid and mlil. the positive rate of cd36 is higher than that of cd14 in mlil.

    key words    leukemia; cd36 antigen; immunophenotyping; multiparameter  flow cytometry

    j exp hematol 2007; 15(1):29-34

    近年來的研究表明,流式細(xì)胞術(shù)( fcm) 檢測(cè)結(jié)果對(duì)于確定白血病的診斷與分型至關(guān)重要。以往采用橫向分析的方法對(duì)白血病進(jìn)行免疫分型的報(bào)道較多,而對(duì)于某一個(gè)特定標(biāo)志在白血病免疫學(xué)診斷中的作用報(bào)道較少。

    單核細(xì)胞相關(guān)性白血病(monocyte lineage involved leukemia, mlil)包括急性粒細(xì)胞單核細(xì)胞白血病(amlm4a、m4b、m4c、m4eo)、急性單核細(xì)胞白血病未分化型（amlm5a）、急性單核細(xì)胞白血病部分分化型（amlm5b）、以幼稚單核細(xì)胞增生作為白細(xì)胞成分的急性紅白血病（amlm6）、慢性髓細(xì)胞白血病急性單核細(xì)胞變（cmlmobc）、慢性粒細(xì)胞單核細(xì)胞白血?。╟mml）等均存在單核細(xì)胞成分。目前國際上普遍采用cd14作為單核細(xì)胞的表面標(biāo)志而應(yīng)用于白血病的免疫學(xué)診斷，但cd14 的陽性表達(dá)率較低，這給白血?。ㄓ戎袊鴮?shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志  j exp hematol 2007; 15(1)多參數(shù)流式細(xì)胞術(shù)觀察cd36在白血病細(xì)胞上的表達(dá)及其意義其是單核細(xì)胞相關(guān)性白血病）的免疫學(xué)診斷與鑒別帶來了一定的困難［1］。

    cd36為一種膜糖蛋白，在造血細(xì)胞上主要表達(dá)于單核細(xì)胞、巨核細(xì)胞、紅系前體細(xì)胞［2］。我們采用多種高質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)單克隆抗體和cd45/ssc設(shè)門多參數(shù)fcm對(duì)133例各類白血病患者白血病細(xì)胞中cd36的表達(dá)情況作了深入的分析,重點(diǎn)分析其在單核細(xì)胞相關(guān)性白血病上的表達(dá)情況，并分析了它與其它白血病細(xì)胞相關(guān)抗原如cd117、hladr、cd34等的相互關(guān)系, 結(jié)果報(bào)道如下。

    材料和方法

    對(duì)象

    2003 年10月-2005 年12 月來本院就診以及外院送本院作細(xì)胞表面標(biāo)記檢查的白血病患者共133例,其中男性71例,女性62例,均為初診病例。患者年齡1.5歲-86歲,中位年齡44歲。急性白血病95例, 按fab 標(biāo)準(zhǔn)［3］診斷為急性淋巴細(xì)胞白血病(all)32例;急性髓細(xì)胞白血病(aml )62例,其中m1 9例,m2 12例,m3 16 例,m4 10例,m5a 7例, m5b 5例,m6 3例；參照1994 年歐洲白血病免疫分型研究組( egil)關(guān)于急性混合細(xì)胞白血病(acute mixed lineage leukemia,  amll) 診斷積分標(biāo)準(zhǔn)［4］, 診斷為amll 1例。慢性白血病38例, 其中慢性淋巴細(xì)胞白血病(cll) 22例,慢性髓細(xì)胞白血病(cml) 15例,慢性期13例及單核細(xì)胞白血病急性變2例，慢性粒細(xì)胞單核細(xì)胞白血?。╟mml）1例。       

    樣本制備

    每管加入肝素抗凝的骨髓100 μl（細(xì)胞數(shù)1×105-1×106）及3種直接標(biāo)記的熒光抗體各5-10 μl, 20℃反應(yīng)20分鐘,再加入2 ml細(xì)胞溶解液(becton dickinson產(chǎn)品) ,振蕩后于室溫下置10 分鐘,用pbsbsa 洗滌細(xì)胞1 次,加入0.5 ml   pbs，待測(cè) 。

    試劑 

    所用標(biāo)準(zhǔn)單克隆抗體包括fitc、pe、percp 標(biāo)記的cd10、cd19、cd20、cd22、cd2、cd3、cd5、cd7、cd56、cd11b、cd41a 、cd61、cd117、cd38、cd45、hla  dr、mpo（髓過氧化物酶） 單克隆抗體均購自美國becton  dickinson 公司，cd13、cd14、cd33、cd34、cd36單克隆抗體購自美國coulter公司。

    流式細(xì)胞術(shù)分析

    fcm 檢測(cè)用facscaliburtm流式細(xì)胞儀(becton  dickinson產(chǎn)品) 和cell quest 軟件獲取并分析10 000個(gè)細(xì)胞。通過cd45/ssc 設(shè)門識(shí)別幼稚細(xì)胞群, 再分析計(jì)算該幼稚細(xì)胞群各白血病相關(guān)抗原的陽性百分?jǐn)?shù)。以白血病細(xì)胞表面抗原陽性百分?jǐn)?shù)≥20%為抗原陽性病例。

    統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

    用spss 10.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,作相關(guān)分析、χ2 檢驗(yàn)或fisher確切概率法，以p<0.05表示有顯著差異。

    結(jié)    果

    cd36在白血病細(xì)胞中的表達(dá)

    圖1為一正常骨髓cd45/ ssc散點(diǎn)圖。根據(jù)各群細(xì)胞cd45熒光強(qiáng)度與側(cè)向角反射（ssc）的差異可將骨髓細(xì)胞分為淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、粒細(xì)胞、

    figure 1.  dot plot of cd45-side scatter (ssc) of normal bm cells. r1 is blast cells ; r2 is nucleated erythrocytes; r3 is granulocytes; r4 is monocytes; r5 was lymphocytes.

    有核紅細(xì)胞和原始細(xì)胞群，對(duì)不同的細(xì)胞群體框定（即射門）后，即可知各群細(xì)胞所占的比例，并可明確顯示幼稚細(xì)胞群體的免疫表型（圖2）。

    figure 2. dot plot of cd45-side scatter (ssc) of leukemia bm cells. r1 is blast cells ;  r2 is nucleated erythrocytes; r3 is granulocytes; r4 is lymphocytes.

    133例病人中cd36陽性29例（陽性率21.8%），62例aml患者中表達(dá)cd36者26例，陽性率為41.9%。但54例淋系白血病中（其中all 32例， cll 22例）未見cd36陽性病例。15例cml中慢性期13例未見cd36陽性表達(dá)，另外2例cml單核細(xì)胞白血病急性變的患者cd36陽性，1例患者的免疫表型為： cd34+、cd38+，cd10+，cd13+、hladr+、cd36+、cmpo+/-；另1例患者的免疫表型： cd38+，hladr+，cd14+， cd36+、cd13+，cd33+，cd11b+。1例amll患者cd36表達(dá)為陰性。1例慢性粒細(xì)胞單核細(xì)胞白血病（cmml）cd36表達(dá)陽性，該患者表型為：cd13+、cd33+、cd14+、cd10+、hladr+、cd36+、cd11b+（表1）。

  在aml 各亞型中的表達(dá)

    在62例aml中cd36在m1 、m2 、m3、m4、m5a 、m5b 、m6中陽性率分別為0.0% (0/ 9) 、25.0% (3/ 12) 、0.0% (0/ 16) 、80%(8/10) 、100.0 %(7/ 7) 、100.0%(5/5) 、100.0%(3/3)?？梢奵d36陽性表達(dá)主要見于m4、m5、m6, 其陽性率明顯高于m1、m2、m3，差異具有顯著性（χ2=25.593, p<0.001； χ2=17.422, p<0.001； χ2=33.529, p<0.001）。在m4中，2例m4eo的患者全部為陰性，陽性細(xì)胞百分率分別為7.1%和8.6%。余8例m4a/b/c均為陽性，陽性細(xì)胞百分率20.5%-89.2%，中位數(shù)為28.4%。9例m5患者中cd36表達(dá)均為陽性，陽性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)25.3%-95.2%，中位數(shù)為50.8%。但在m5b組的陽性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)（50.8%-95.2%，中位數(shù)為89.6%）明顯高于m5a組（25.3%-36.5%，中位數(shù)為32.7%），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（f=15.273,p=0.001）。3例m6中2例為急性紅白血病，1例為急性紅血病。在2例急性紅白血病的骨髓細(xì)胞群體中有兩個(gè)異常細(xì)胞群體，一個(gè)群體為幼稚紅系群體，另一個(gè)群體為幼稚粒細(xì)胞單核細(xì)胞群體。在幼稚粒單核細(xì)胞群體中2例均為cd36陽性表達(dá)，陽性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)為40.0%和73.4%。1例急性紅血病的骨髓細(xì)胞中只有1個(gè)異常群體即幼稚紅細(xì)胞群體。在3例患者的幼稚紅細(xì)胞系群體中的cd36陽性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)33.60%-77.8%，中位數(shù)為73.2%。 這例急性紅血病患者的免疫表型為：cd33+、hladr+、cd36+、cd235a+、cd117+、cd71+、cd38+。在m1、m2、m3中只有3例m2a患者cd36表達(dá)陽性，其陽性細(xì)胞數(shù)百分?jǐn)?shù)分別為22.1%-27.4%，中位數(shù)為24.3%（表2）。

    在aml組中，cd36表達(dá)的陽性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)與cd117表達(dá)的陽性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)呈負(fù)相關(guān)(r=-0.751, p=0.005)。在12例m2中2例為cd36+cd117+,1例cd36+cd117-， 8例cd36cd117+，1例cd36-cd117-; m4組7例cd36+cd117+，1例cd36+cd117-，2例cd36-cd117+。7例m5a全為cd36+cd117+，5例m5b中1例為cd36+cd117+，4例為cd36+cd117-。在m6 3例患者中全為cd36+cd117+（圖3）。在aml組中，cd36的陽性表達(dá)與hladr的陽性表達(dá)不相關(guān)（r=0.142, p=0.677）.在12例m2中3例cd36+hladr+，4例cd36-hladr+，5例cd36-hladr-。10例m4中6例cd36+hladr+，2例cd36+hladr-，1例cd36-hladr+，1例cd36-hladr- 。在7例m5a組中4例cd36+ hladr+, 3例cd36+hladr-。在5例m5b組中4例cd36+hladr+，1例cd36+hladr-。在m6均為3例患者均為cd36+hladr+。另外，在aml組中cd36的陽性表達(dá)與cd34的陽性表達(dá)不相關(guān)（r=-0.472, p=0.076）。在12例m2中3例cd36+cd34+，0例cd36+cd34-，6例cd36-cd34+，3例cd36-cd34-。10例m4中5例cd36+cd34+，3例cd36+cd34-，1例cd36-cd34+，1例cd36-cd34- 。在7例m5a組中3例cd36+ cd34+, 4例cd36+cd34-。在5例m5b組中1例cd36+cd34+，4例cd36+cd34-。在m6中1例為cd36+cd34+，2例為cd36+cd34-。在m4與m5b組別中cd36與cd14表達(dá)的陽性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)呈正相關(guān)(r=0.870, p=0.011)。在12例m2中3例cd36+cd14-，9例cd36-cd14-； 

     cd36陽性白血病其它髓系主要相關(guān)抗原的表達(dá)

    cd14在cmml、cmlmobc、m2、 m4、m5a、m5b、m6中陽性表達(dá)率分別為100.0%（1/1）、50.0%（1/2）、0.0%（0/12）、60.0%（6/10）、0.0%（0/7）、100.0%（5/5）、0.0%（0/3）。cd117在cmml、cmlmobc、m2、 m4、m5a、m5b、m6中陽性率分別為0.0%（0/1）、0.0%（0/2）、83.3（10/12）、90.0%(9/10)、100.0%(7/7)、20.0%(1/5)、100.0%（3/3）。cd117在m5a中陽性率明顯高于m5b（χ2=8.400, p=0.010）。cd34在其分別在cmml、cmlmobc、m2、m4、m5a、m5b、m6的陽性表達(dá)率為0.0%（0/1）、50.0%（1/2）、75% (9/12)、60.0%(6/10)、42.9%(3/7)、20.0%(1/5)、33.3%（1/3）。cd34在m5的陽性率較低，為33.3%（4/12）。hladr分別在cmml、cmlmobc、m2、m4、m5a、m5b、m6的陽性表達(dá)分別為100%（1/1）、100%（2/2）、66.7% (8/12)、70.0%(7/10)、57.1%(4/7)、80.0%(4/5)、100%（3/3）。cd13分別在cmml、cmlmobc、m2、m4、m5a、m5b、m6的陽性表達(dá)率分別為100%（1/1）、100.0%（2/2）、100%(12/12)、90.0%(9/10)、85.70%(6/7)、60.0%(3/5)、66.7%（2/3）。cd33分別在cmml、cmlmobc、m2、m4、m5a、m5b、m6的陽性表達(dá)率分別為100%（1/1）、50.0%（1/2）、91.7%(11/12)、80.0%(8/10)、58.7%(6/7)、100.0%(5/5)、66.7%（2/3）（表3）。

     討    論

    cd45 抗原表達(dá)于所有白細(xì)胞表面,雖然cd45 抗原存在3 個(gè)異構(gòu)體,不同異構(gòu)體在造血干/ 祖細(xì)胞及t 細(xì)胞表面表達(dá)不同,但本研究所用的cd45 抗體為識(shí)別3種異構(gòu)體的共同抗體。cd45 在淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、粒細(xì)胞及幼稚細(xì)胞的表達(dá)量不同,表現(xiàn)為cd45熒光強(qiáng)度不同。淋巴細(xì)胞最強(qiáng),單核細(xì)胞次之,粒細(xì)胞比單核細(xì)胞弱,幼稚細(xì)胞比成熟細(xì)胞弱。結(jié)合細(xì)胞的ssc 值(反映細(xì)胞的顆粒性) ,可將骨髓細(xì)胞分為淋巴細(xì)胞,單核細(xì)胞,粒細(xì)胞及幼稚細(xì)胞群。cd45/ ssc 設(shè)門法的突出特點(diǎn)在于它可將異常的幼稚細(xì)胞與正常的成熟細(xì)胞區(qū)分開,因而能夠做到特異地對(duì)幼稚細(xì)胞進(jìn)行分析［5］。我們?cè)诓捎胏d45/ssc雙參數(shù)射門的基礎(chǔ)上應(yīng)用一系列高質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)單克隆抗體對(duì)較大樣本白血病細(xì)胞cd36 的表達(dá)作了較為詳細(xì)的分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在133例白血病患者中aml組有41.9%（26/62）的患者cd36表達(dá)陽性，在54例淋巴細(xì)胞白血病中無1例cd36陽性表達(dá)。cd36是一種細(xì)胞膜糖蛋白，在造血細(xì)胞中它主要表達(dá)于單核細(xì)胞、紅細(xì)胞前體、血小板、巨核細(xì)胞上。本研究中12例伴有單核細(xì)胞分化的amlm4和amlm5亞型的病人中cd36表達(dá)全部為陽性，cml單核細(xì)胞白血病急性變2例及cmml 1例為cd36陽性，12例amlm2亞型組有3例cd36表達(dá)陽性。另外2例以單核細(xì)胞增生的amlm6 cd36表達(dá)全部陽性。作為單核細(xì)胞分化的抗原之一，其敏感性為92.6%（25/27）。雖然cd14 是單核細(xì)胞的特異性標(biāo)志,但cd14 只有在成熟的單核細(xì)胞表達(dá)為陽性,幼稚單核細(xì)胞cd14表達(dá)為陰性。而多數(shù)m4/ m5 患者為幼稚單核細(xì)胞增多。因此免疫分型難以根據(jù)單項(xiàng)cd14 是否陽性而診斷m4/ m5。在本研究中cd14在單核細(xì)胞相關(guān)性白血病上的陽性率僅為48.1%（13/27），低于cd36的陽性率（92.6%，25/27）。cd14在m5a上陽性率為0.0%(0/7)，在m5b中陽性率為100%（5/5）。因此，在診斷單核細(xì)胞相關(guān)性白血病中結(jié)合cd36與其它單核細(xì)胞分化抗原(如cd14、cd64等)分析，有利于提高其診斷率。在amlm2組中有3例患者的cd36表達(dá)陽性，其原因可能與白血病細(xì)胞群體中混有部分單核細(xì)胞成分有關(guān)。cd36除了表達(dá)在單核細(xì)胞外，還在巨核細(xì)胞和早期紅細(xì)胞上有表達(dá)。在本研究中3例m6患者，在幼稚紅系群體上都有cd36的高表達(dá)，但他們同時(shí)都有g(shù)lya和cd71的表達(dá)。因此同時(shí)加做cd41和（或）cd61（巨核系標(biāo)志）、glya和/或cd71（紅系標(biāo)志）及單核系其它標(biāo)志抗原，可以將巨核細(xì)胞、早期紅細(xì)胞及單核細(xì)胞區(qū)分開來。這也同時(shí)說明，在白血病的診斷分型中須綜合多參數(shù)信息來分析。

    在單核細(xì)胞上cd36隨細(xì)胞的分化成熟而表達(dá)增加。在m4與m5b組中cd36與cd14的表達(dá)呈正相關(guān)。急性單核細(xì)胞白血病m5b的白血病細(xì)胞與m5a相比，前者在分化程度上較后者要成熟些，盡管本研究結(jié)果中顯示cd36在m5中都為陽性表達(dá)，但其在m5b上的表達(dá)的陽性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)明顯高于m5a，因此將cd36和cd14結(jié)合分析有助于m5的診斷及分型。m4為粒細(xì)胞和單核細(xì)胞成份同時(shí)存在，m4eo除了具有前面的特征外，嗜酸性粒細(xì)胞比例增多大于5%-30%。在本研究結(jié)果中顯示2例m4eo均為cd36表達(dá)陰性，他們的cd14表達(dá)也為陰性。其余的6例m4患者cd36表達(dá)均為陽性。cd36是否有助區(qū)分m4的亞型還需要更多的病例數(shù)來分析。cd14在m4患者中陽性率為60.0%（6/10），這與馮國安等［6］和寧鉑濤等［7］報(bào)道的較為相似。在aml組中cd36的表達(dá)與cd117呈負(fù)相關(guān)，m5a中cd117陽性率為100%（7/7），陽性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)為28.6%-92.5%，中位數(shù)為53.9%；cd36的陽性為100%（7/7），但其陽性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)為21.3%-36.5%，中位數(shù)為32.7%；m5b中cd117陽性率為20%（1/5），陽性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)為21.0%，而cd36的陽性率為100%，陽性細(xì)胞數(shù)為50.8%-95.2%，中位數(shù)為89.6%。cascavilla等［8］檢測(cè)了9例m5a患者，其白血病細(xì)胞都表達(dá)cd117，而在11例m5b中僅有1例表達(dá)該抗原。由此可見cd117主要在較幼稚的單核細(xì)胞上高表達(dá)，而cd36隨著單核細(xì)胞的成熟而表達(dá)增高。因此，結(jié)合cd117的表達(dá)情況也有助于區(qū)分亞型并可了解單核細(xì)胞的分化程度。另外，在aml組中cd36與hladr、cd34的陽性表達(dá)不相關(guān)。cd34在m5患者中多數(shù)（66.7%，8/12）為陰性表達(dá)，這與weir［9］和劉艷榮等［10］報(bào)道相似。

    綜上所述，本組資料說明：cd36陽性者可以排除淋系白血?。╝mll除外）；cd36作為單核細(xì)胞系分化的指標(biāo)之一，其敏感性（92.6%，25/27）高于cd14（48.1%，13/27），但cd36還表達(dá)于紅系前體細(xì)胞、巨核細(xì)胞上，因此須結(jié)合cd36與其它單核細(xì)胞分化抗原分析才有助于提高單核相關(guān)性白血病的診斷率；另外cd36結(jié)合cd14和（或）cd117有助于區(qū)分m5亞型及了解單核細(xì)胞分化程度。

【參考文獻(xiàn)】

  1khalidi hs, medeiros lj, cheng kl, et al. the immunophenotype of adult acute myeloid leukemia: high frequency of lymphoid antigen expression and comparison of immunophenotype, frenchamericanbritish classification, and karyotypic abnormalities. am j clin pathol, 1998; 109 : 211-220

2傅緒杰. 細(xì)胞膜糖蛋白cd36的研究現(xiàn)狀. 國外醫(yī)學(xué)·心血管疾病分冊(cè)， 1998； 25：329-331

3王鳳計(jì). 現(xiàn)代血液細(xì)胞診斷學(xué). 天津：科技翻譯出版公司，2004: 269-270

4張之南. 血液病. 北京：人民衛(wèi)生出版社，2003: 873-873

5li w, chen z, liu z, et al. application of cd45/ssc gating multiparameter flow cytometry in the classification of acute leukemia —— an analysis of 139 cases. j tongji med univ, 2001; 21:209-211

6馮國安，郭農(nóng)建，黃平等. 單核細(xì)胞相關(guān)性白血病fcm免疫表型分析. 白血病·淋巴瘤， 2005；14：148-150

7寧鉑濤, 湯永民, 沈紅強(qiáng)等. 多參數(shù)流式細(xì)胞術(shù)觀察251例白血病細(xì)胞cd14表達(dá)的意義. 實(shí)用腫瘤學(xué)雜志，2003；18：101-105

8cascavilla n, musto p, d'arena g, et ai. cd117 (ckit) is a restricted antigen of acute myeloid leukemia and characterizes early differentiative levels of m5 fab subtype. haematologica, 1998, 83 : 392-397

流式細(xì)胞儀范文第5篇

【關(guān)鍵詞】流式細(xì)胞術(shù)，血小板，特發(fā)性血小板減少性紫癜，IgG，陽性

有研究發(fā)現(xiàn)血小板相關(guān)抗體的檢測(cè)在ITP的診斷和治療中有重要價(jià)值，但是傳統(tǒng)的檢測(cè)方法會(huì)增加患者的不適和痛苦、不利于患者的治療、采血量較多、家屬和患者難以接受等，更重要的是傳統(tǒng)方法是導(dǎo)致醫(yī)療糾紛的主要原因【1】。所以，尋找新的檢測(cè)方法，提高ITP患者的血小板相關(guān)抗體檢出率，對(duì)ITP患者的康復(fù)和減少醫(yī)療糾紛有重要作用。流式細(xì)胞儀對(duì)血小板相關(guān)抗體的檢測(cè)具有簡(jiǎn)單、重復(fù)性高、結(jié)果準(zhǔn)確、采血量少等優(yōu)點(diǎn)，隨著對(duì)其研究的深入，發(fā)現(xiàn)流式細(xì)胞儀對(duì)臨床治療ITP的療效判定有一定的意義【2】，在臨床檢測(cè)當(dāng)中，應(yīng)用的范圍越來越廣。本文就流式細(xì)胞儀在檢測(cè)ITP患者血小板相關(guān)抗體中的意義作進(jìn)一步探討，其探討結(jié)果如下：

1一般資料和方法

1.1一般資料 選取在2010年5月到2013年5月，來我院接受治療的100名特發(fā)性血小板減少性紫癜患者，隨機(jī)分成兩組，對(duì)照組和觀察組，每組各50人。觀察組患者中男28人，女22人，年齡在21到60歲之間，平均年齡為41.3歲；對(duì)照組患者中男29人，女21人，年齡在23到59歲之間，平均年齡為38.9歲。所有患者經(jīng)詳細(xì)詢問病史、系統(tǒng)的體格檢查和實(shí)驗(yàn)室檢查后確診為特發(fā)性血小板減少性紫癜。兩組患者在性別、年齡、病程及病情等一般資料上的差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義即p>0.05。

1.2方法 首先進(jìn)行采血及血漿分離，經(jīng)肘靜脈采血后，加入EDTA-Na?2抗凝，然后離心10min，離心速度為1000轉(zhuǎn)每分鐘，用TEN洗滌分離出上層血漿，再對(duì)余血離心10min，離心速度為2500轉(zhuǎn)每分鐘，去上清，重復(fù)操作3次，分離出血漿；然后對(duì)以上標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，對(duì)照組患者采用ELISA檢測(cè)，將洗滌后血小板的濃度調(diào)整為100×109/L，加入Triton懸液，4℃下破碎離心，用人IgG包被，封閉后加入人IgG標(biāo)準(zhǔn)液或者血小板破碎液，再加入羊抗人IgG稀釋液，培育后顯色，測(cè)定OD490吸光度值。觀察組患者采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)IgG，首先將血小板進(jìn)行標(biāo)記，將羊抗鼠抗體或者羊抗人抗體與血小板懸液混合，洗滌兩次，孵育25分鐘后，進(jìn)行檢測(cè)，然后進(jìn)行流式分析，調(diào)整激光器的波長(zhǎng)為488nm，調(diào)整儀器處于正常狀態(tài)，采用熒光強(qiáng)度道數(shù)對(duì)血小板表面的IgG含量進(jìn)行測(cè)定。

統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行分析，分析結(jié)果如下：

2結(jié)果

對(duì)經(jīng)流式細(xì)胞儀和ELISA法檢測(cè)特發(fā)性血小板減少性紫癜患者的IgG結(jié)果進(jìn)行比較，其結(jié)果如下：

表1經(jīng)流式細(xì)胞儀和ELISA檢測(cè)兩組患者的IgG結(jié)果比較

分組 人數(shù) IgG平均含量 陽性人數(shù) 陽性率

觀察組 50 191±78b 43 86%

對(duì)照組 50 28±21 36 72%

從以上結(jié)果可以看出，觀察組患者的IgG陽性率明顯高于對(duì)照組患者，兩組患者在IgG陽性率上的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義即，P

對(duì)觀察組患者經(jīng)激素治療后，經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測(cè)其治療前后的IgG平均熒光強(qiáng)度結(jié)果如下：

表2經(jīng)激素治療前后的IgG平均熒光強(qiáng)度比較

患者 熒光強(qiáng)度

治療前 治療后

1到10名 81.32 49.20

11到20名 121.15 51.38

21到30名 69.39 31.41

31到40名 92.13 44.30

41到50名 86.36 50.12

從以上結(jié)果可以看出，流式細(xì)胞儀檢測(cè)ITP患者的IgG靈敏度較高，對(duì)患者的治療效果有一定的評(píng)估作用。

3討論：

診斷血小板相關(guān)疾病的關(guān)鍵是，檢測(cè)出血小板生存時(shí)間和血小板相關(guān)抗體【3】，流式細(xì)胞儀在判定血小板功能、對(duì)出血性疾病的診斷、診斷血栓性疾病和檢測(cè)血小板相關(guān)抗體等方面上有一定的優(yōu)勢(shì)。傳統(tǒng)方法在檢測(cè)血小板相關(guān)抗體上有采血量較多、影響患者的治療效果、易引起患者的不適和痛苦、不能指導(dǎo)治療、可引起多種醫(yī)療糾紛等缺點(diǎn)【4】，因此，采用流式細(xì)胞儀進(jìn)行血小板相關(guān)抗體的檢測(cè)方法逐漸在臨床檢驗(yàn)上發(fā)展起來。本研究通過分別采用流式細(xì)胞儀和傳統(tǒng)方法對(duì)兩組患者進(jìn)行血小板相關(guān)抗體的檢測(cè)，對(duì)檢測(cè)出的IgG陽性率進(jìn)行比較，可以看出經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測(cè)的患者IgG陽性率明顯高于經(jīng)傳統(tǒng)方法檢測(cè)的患者IgG陽性率；對(duì)觀察組患者進(jìn)行激素治療后，經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測(cè)其IgG的熒光強(qiáng)度，靈敏度較高，可在一定程度上評(píng)估治療效果，對(duì)臨床治療血小板相關(guān)疾病有重要價(jià)值。

參考文獻(xiàn)：

[1] 余暉，高曉陽. 全血法流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)血小板相關(guān)抗體[J].細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志，2010，（12）：1296-1297.

[2] 聶詠梅. 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)小鼠全血中人血小板方法的建立[J].廣東醫(yī)學(xué)，2010，31（16）：2049-2052.