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1資料與方法

1.1一般資料

患者的入選是根據(jù)美國胸科協(xié)會制定的診斷指南，存在大于3周以上的咳嗽癥狀，有至少一條哮喘癥狀，并且體格檢查出現(xiàn)相應體征的兒童患者隨機納入研究，研究時間從2012年1月～2014年6月。

1.2方法采用

流式細胞術。所收集樣本冷凍保存，統(tǒng)一檢測，末梢血樣采集于肝素鈉抗凝管中，取100μL血樣加入中含有20μL白介素-3的緩沖液中，室溫孵育10min，然后加入100μL兒童哮喘患者或健康對照組的血清，室溫孵育20min，其中緩沖液包含0.12MNaCI，0.005MKCI，0.025MTris，pH7.6。N-甲酰-甲硫氨酰-亮氨酰-苯丙氨酸（fMLP0.4mmol/L）（Sigma-Aldrich公司，圣路易，MO，USA），一種非特異性細胞活化劑，被用于陽性對照，洗滌緩沖液（0.01M磷酸緩沖鹽水包括0.01M的磷酸二氫鈉，0.01M磷酸氫二鈉，pH為7.2～7.4）被用于陰性對照。孵育結束后將樣品置于冷卻的冰上防止嗜堿性粒細胞活化和降解，繼而與熒光FITC結合的抗CD63抗體孵育BectonDickinson，F(xiàn)ranklinLakes，NJ，USA），與熒光PE結合的抗IgE抗體（Pharmacia，Uppsala，Sweden），以及PerCP結合的抗CD45抗體（BectonDickinson）避光孵育20min，加入紅細胞溶解液。2500rpm離心10min，將沉淀用緩沖液懸浮，BDFACSCantoⅡ流式細胞儀進行分析。在采集過程中，紅色熒光（FL2）和前向散射（FSC）和側向角散射（SSC）的特點是采用至少1000嗜堿性粒細胞的表達高IgE介導的面密度的選框進行分析，使用FSC/SSC特性淋巴細胞的定義。然后，從這些細胞，F(xiàn)L3/FL2圖上嗜堿性粒細胞的認定為CD45低/IgE的高表達。

1.3統(tǒng)計學方法

使用SPSS®軟件進行統(tǒng)計分析（SPSS公司，芝加哥，IL，美國）。x2檢驗用于比較患者組和對照組之間各個受體的表達情況。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2結果

共納入研究的哮喘兒童有72名，健康對照組32例。嗜堿性粒細胞的識別依賴表面受體的CD45的低表達和IgE的高表達，CD63的表達可用于識別嗜堿性粒細胞是否被患者或者健康對照組的血清激活。接受來自非過敏的健康志愿者的血清刺激后，抗FcεRI的自身抗體CD63的表達數(shù)目和比例如表1所示。29/78（37.2％）的哮喘患者血清表達CD63+的嗜堿性粒細胞，CD63+嗜堿性粒細胞的人數(shù)比例是為（36.9±8.3）％。與此相反，在健康組中的血清只有4/32（12.5％）對照表明CD63+嗜堿性粒細胞和嗜堿性粒細胞的“x±s”的比例人口，這是CD63+為（26.3±5.6）％。哮喘中的比重差患者與健康的比例。有CD63+嗜堿性粒細胞的對照組差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。

3討論

當前的研究表明高親和性免疫球蛋白（IgE）和蕁麻疹受體在哮喘癥的發(fā)病機制發(fā)揮著重要的角色。使用流式細胞儀的嗜堿性粒細胞活化試驗（BAT）表明，哮喘患者的在免疫蕁麻疹（FcεRI）的自身抗體明顯比正常人水平要高（分別為37.2%和12.5%），這與我們之前的研究是一致的。除了特異反應性之外，哮喘機制還包括氣道反應性和相關的炎癥。同時，自身免疫性疾病也是內(nèi)因性哮喘的癥狀。高親和性IgE受體FcεRI是一種多聚蛋白質的表面受體，在嚙齒動物細胞中，以四聚物高分子的形式表達；在人體中以三聚物高分子的形式存在。而在肥大細胞和嗜堿粒細胞中，F(xiàn)cεRI則是IgE介質導致的急性過敏反應的結果。IgE高親和受體FcεRI和多價體抗原的交叉感染可能導致肥胖細胞的活化，或者導致多種炎癥中介的后續(xù)反應。此外，過敏和過高的自身免疫的部分原因可能來自于免疫系統(tǒng)的失調(diào)，而這恰恰可能導致蕁麻疹和哮喘。因為這兩種癥狀存在著某種的聯(lián)系，比如一致的發(fā)病機制。在哮喘和自身免疫疾病中，通過觀察肥大細胞，抗體，T細胞和細胞激素可以看到，免疫系統(tǒng)的調(diào)節(jié)原理和方法是一致的。因此FcεRI和IgE的自身抗原可能是哮喘的發(fā)病體制中的一環(huán)。另外，我們的研究表明，哮喘患者和健康對照組比較，F(xiàn)cεRI抗原引發(fā)的自身抗體陽性，更加支持了上述結論：自身免疫反應可能參與了哮喘的發(fā)病機制。

作者：饒冬東張福輝趙靜毛劍芳單位：福建省婦幼保健院檢驗科廈門市婦幼保健院檢驗科