前言：想要寫(xiě)出一篇令人眼前一亮的文章嗎？我們特意為您整理了5篇?jiǎng)游飳?shí)驗(yàn)研究范文，相信會(huì)為您的寫(xiě)作帶來(lái)幫助，發(fā)現(xiàn)更多的寫(xiě)作思路和靈感。

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究范文第1篇

關(guān)鍵詞：抗氧化實(shí)驗(yàn) 老齡小鼠 氧化應(yīng)激 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

氧化應(yīng)激是指體內(nèi)氧化與抗氧化作用失衡、傾向于氧化作用而導(dǎo)致組織損傷[1]。氧化應(yīng)激的發(fā)生，使機(jī)體內(nèi)許多細(xì)胞分子生物，如DNA、脂質(zhì)、蛋白質(zhì)等易受到自由基引起的氧化損傷，導(dǎo)致細(xì)胞和組織功能障礙，并與多種疾病的發(fā)生密切相關(guān)[2]。因此抗氧化物質(zhì)研究對(duì)各種氧化應(yīng)激相關(guān)疾病的防控意義重大。近年研究表明人工合成抗氧化劑副作用較多，可能對(duì)人體多種臟器產(chǎn)生不利影響，故天然的抗氧化物日漸受青睞[2]。本研究對(duì)含有多種藥食同源成分的某保健食品膠囊進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，探討其抗氧化功效。

1 材料與方法

1.1 樣品

由某廠家提供的保健食品膠囊，配方組成：三七450 g、紅景天450 g、枸杞子500 g、五味子300 g, 提取濃縮制成干膏粉255 g, 再加葡萄籽提取物33.4 g及其他輔料，制成1 000粒(0.5 g/粒)膠囊。人體服用推薦劑量2.7 g/d, 按成人體重60 kg推算折合劑量為0.045 g/kg·bw。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF級(jí)ICR種雄性8～10月齡小鼠40只(湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司),實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK(湘)2013-0004;實(shí)驗(yàn)期間小鼠飼養(yǎng)于22 ℃～26 ℃、濕度50%～56%的屏障環(huán)境中。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)：SYXK(湘)2015-0012。

1.3 儀器與試劑

動(dòng)物稱量秤、離心機(jī)、水浴箱和紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)等；丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)及蛋白質(zhì)羰基試劑盒(南京建成生物工程研究所)。

1.4 方法

試驗(yàn)初始、中期、末期均對(duì)小鼠進(jìn)行體重監(jiān)測(cè)。試驗(yàn)初始，采尾尖血制成4%溶血液，用試劑盒測(cè)定其MDA水平。根據(jù)MDA含量將40只小鼠平均分為1個(gè)對(duì)照組和低、中、高3個(gè)劑量組(0.225、0.450和1.350 g/kg·bw),保證各組試驗(yàn)前MDA值均衡。各劑量組小鼠經(jīng)口灌胃給予相應(yīng)劑量的某膠囊內(nèi)容物，溶劑對(duì)照組給予等體積蒸餾水，灌胃1次/d, 灌胃體積為0.2 mL/10 g·bw, 連續(xù)30 d。試驗(yàn)?zāi)┢?，采尾尖血測(cè)定4%溶血液中MDA含量、全血中GSH含量；摘眼球采血，離心后取血清測(cè)定SOD活力及蛋白質(zhì)羰基含量。

1.5 數(shù)據(jù)處理

計(jì)量數(shù)據(jù)以xˉ±s表示。用Excel 2007、spss 19.0軟件統(tǒng)計(jì)分析。4組數(shù)據(jù)如果方差齊，則用單因素方差分析進(jìn)行總體比較；方差不齊時(shí)Dunnett法進(jìn)行多個(gè)劑量組與1個(gè)對(duì)照組均數(shù)間的兩兩比較，P<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 老齡小鼠體重變化

實(shí)驗(yàn)初始、中期、末期，3個(gè)劑量組的小鼠體重及增重與對(duì)照組差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見(jiàn)表1。

2.2 抗氧化試驗(yàn)結(jié)果

試驗(yàn)?zāi)┢诟鹘M間小鼠溶血液中MDA含量差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=4.16,P=0.013);與對(duì)照組比較，高劑量組的MDA含量降低，見(jiàn)表2。

試驗(yàn)?zāi)┢诟鹘M間小鼠血清中SOD活力和全血中GSH含量差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=3.38,P=0.028;F=3.24,P=0.033);與對(duì)照組比較，高劑量組SOD活力增加、GSH含量升高；各劑量組小鼠血清中蛋白質(zhì)羰基含量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=0.54,P>0.05),見(jiàn)表3。

表1 某膠囊對(duì)小鼠體重的影響(g)

表2 某膠囊對(duì)小鼠4%溶血液中MDA含量的影響

表3 某膠囊對(duì)小鼠血清中GSH含量、SOD活力和蛋白質(zhì)羰基含量的影響

3 討 論

氧自由基反應(yīng)和脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)在機(jī)體代謝中起重要作用。MDA是機(jī)體內(nèi)自由基作用于脂質(zhì)過(guò)氧化的終末產(chǎn)物，大量產(chǎn)生時(shí)可導(dǎo)致細(xì)胞膜損傷[3]。SOD是生物體中清除自由基的主要物質(zhì)，SOD水平常作為象征衰老的直觀指標(biāo)[4]。GSH是機(jī)體內(nèi)一種強(qiáng)抗氧化劑，可消除自由基并參與細(xì)胞解毒及細(xì)胞損傷修復(fù)，有抑制脂質(zhì)過(guò)氧化、保護(hù)細(xì)胞膜、恢復(fù)細(xì)胞功能的作用[5]。蛋白羰基是機(jī)體內(nèi)多種氨基酸在蛋白質(zhì)氧化修飾過(guò)程中產(chǎn)生的早期標(biāo)志，能直接反映蛋白質(zhì)的損傷程度[6]。

本研究樣品膠囊以三七、紅景天、枸杞子、五味子和葡萄籽提取物為主要原料。研究表明三七多糖有較強(qiáng)的體外抗氧化活性[7],明顯降低血清中的MDA含量，并提高GSH-Px活力[8];紅景天中主要抗氧化物質(zhì)包括紅景天苷和黃酮類物質(zhì)。侯紅平等[9]發(fā)現(xiàn)紅景天苷的抗氧化作用可有效保護(hù)慢性阻塞性肺疾病體外細(xì)胞模型，但機(jī)體攝取紅景天提取物有最佳劑量，劑量過(guò)大時(shí)反而降低機(jī)體的抗氧化能力[10];苗婷婷等[11]研究發(fā)現(xiàn)枸杞多糖可能通過(guò)清除自由基、提高抗氧化酶活性、上調(diào)免疫應(yīng)答、抑制神經(jīng)系統(tǒng)的老化、調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡等途徑延緩衰老進(jìn)程。多項(xiàng)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明枸杞多糖可通過(guò)提高小鼠體內(nèi)SOD活性、降低MDA含量[12],降低氧化產(chǎn)物含量[13],起到延緩衰老的作用；有研究發(fā)現(xiàn)，五味子提取物有效成分不僅可直接清除自由基[14],且對(duì)皮膚細(xì)胞的氧化應(yīng)激有保護(hù)作用[15]。此外五味子中多糖[16]、總木脂素類成分及五味子乙素[17]有良好的抗氧化能力；方歡樂(lè)等[18]發(fā)現(xiàn)葡萄籽原花青素對(duì)D-半乳糖致衰老模型小鼠氧化應(yīng)激反應(yīng)的各項(xiàng)生化指標(biāo)及肝臟組織病理狀態(tài)有一定改善作用，且葡萄籽對(duì)SD大鼠無(wú)胚胎毒性和致畸毒性，安全性較高[19]。

本研究用的樣品膠囊以幾種藥食同源物質(zhì)合理配伍，其中1.350 g/kg·bw劑量能降低小鼠血中MDA水平、提高小鼠血清中SOD活力、提高小鼠全血中GSH含量，說(shuō)明該膠囊內(nèi)容物可降低動(dòng)物體內(nèi)脂質(zhì)過(guò)氧化程度、增加抗氧化酶抑制自由基反應(yīng)能力及增強(qiáng)機(jī)體受到的氧化壓力程度，實(shí)驗(yàn)結(jié)果與以上單個(gè)成分的抗氧化資料基本類似。本研究各劑量組小鼠血清中蛋白質(zhì)羰基含量與對(duì)照組差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說(shuō)明此膠囊對(duì)動(dòng)物體內(nèi)蛋白質(zhì)氧化損傷的保護(hù)作用不明顯，也可能由于動(dòng)物血清中蛋白質(zhì)羰基含量較低，檢測(cè)值存在較大的人工誤差。

綜上所述，提示含有三七、紅景天、枸杞子、五味子和葡萄籽提取物為主要原料的某膠囊，對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有抗氧化功能。

參考文獻(xiàn)

[1] Al Shahrani M,Heales S,Hargreaves I,et al.Oxidative Stress:Mechanistic Insights into Inherited Mitochondrial Disorders and Parkinson’s Disease[J].J Clin Med,2017,6(11):100.

[2] 高冬，任成蓉，宋光運(yùn).氧化-抗氧化狀態(tài)與臨床疾病的相關(guān)性[J].海峽預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志，2015,21(2):24-26.

[3] Huang YY,Wu CC,Ye YB,et al.The increase of ROS caused by the interference of DEHP with JNK/p38/p53 pathway as the reason for hepatotoxicity[J].Int J Environ Res Public Health,2019,16(3):1-16.

[4] 李紅波，王小琴，熊飛，等.六味地黃丸對(duì)D-半乳糖致衰老大鼠抗氧化功能影響的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國(guó)中醫(yī)藥科技，2019,26(1):35-37.

[5] 張藝，葉升.還原型谷胱甘肽生理功能及其臨床應(yīng)用[J].生命的化學(xué)，2020,40(12):2226-2235.

[6] 羅勝勇，栗原博，樂(lè)智勇，等.冬蟲(chóng)夏草對(duì)氧化損傷小鼠抗氧化作用研究[J].食品研究與開(kāi)發(fā)，2019,40(13):63-67.

[7] 黃上峰，陸飛燕，黃元河，等.三七多糖抗氧化活性研究[J].微量元素與健康研究，2018,35(1):30-32.

[8] 周艷梅，馬妮，高明菊，等.三七葡萄籽軟膠囊抗氧化功能實(shí)驗(yàn)研究[J].人參研究，2020,32(2):40-42.

[9] 侯紅平，張廣平，高云航，等.紅景天苷對(duì)慢性阻塞性肺疾病體外細(xì)胞模型的保護(hù)作用及抗氧化應(yīng)激機(jī)制[J].中藥新藥與臨床藥理，2020,31(12):1389-1393.

[10] 羅蘭.紅景天提取物對(duì)運(yùn)動(dòng)小鼠抗氧化能力的影響[J].中國(guó)老年學(xué)雜志，2018,38(23):5815-5817.

[11] 苗婷婷，嚴(yán)青，王君潔，等.枸杞多糖抗衰老研究進(jìn)展[J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2019,15(6):178-180.

[12] 劉晴.枸杞多糖對(duì)CCl4誘導(dǎo)的大鼠肝纖維化的保護(hù)作用及機(jī)制研究[D].南京：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)，2016.

[13] 王彩霞.枸杞多糖對(duì)衰老小鼠皮膚組織總抗氧化能力及脂褐質(zhì)的影響[J].中國(guó)民族民間醫(yī)藥2020,29(6):7-9.

[14] 李振，孟憲緯，管延珍，等.南、北五味子提取物的抑菌及抗氧化作用研究[J].中國(guó)調(diào)味品，2017,42(1):28-30.

[15] 曹波，路婷婷，魏菲，等.南五味子提取物對(duì)UVB輻射的防護(hù)作用觀察[J].中國(guó)皮膚性病學(xué)雜志，2016,30(8):771-775,798.

[16] 王珊珊，李泰雅，谷舞，等.北五味子多糖熱水浸提工藝優(yōu)化及體外抗氧化性能研究[J].糧油食品科技，2017,25(1):64-69.

[17] 馬瑩慧，馮波，朱鶴云，等.北五味子中總木脂素類成分的抗氧化及抗炎活性研究[J].食品研究與開(kāi)發(fā)，2019,40(11):25-29.

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究范文第2篇

一、研究專題和期限

專題1、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物比較、相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)研究領(lǐng)域

研究目標(biāo)：對(duì)常用嚙齒類實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行比較研究并建立數(shù)據(jù)庫(kù)；制定填補(bǔ)國(guó)內(nèi)空白的若干實(shí)驗(yàn)動(dòng)物地方標(biāo)準(zhǔn)；凡涉及本專題項(xiàng)目需將有關(guān)研究成果納入*實(shí)驗(yàn)動(dòng)物資源中心統(tǒng)一管理。

研究?jī)?nèi)容：

1、對(duì)常用大、小鼠、豚鼠和地鼠進(jìn)行比較生物學(xué)和比較醫(yī)學(xué)系統(tǒng)研究，提出各自在生物醫(yī)學(xué)等主要研究領(lǐng)域應(yīng)用和回避的依據(jù)、選擇原則、運(yùn)用方法；

2、對(duì)常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物組織器官超微形態(tài)學(xué)結(jié)構(gòu)進(jìn)行比較研究并建立數(shù)據(jù)庫(kù)；

3、建立兔、犬、猴心血管和心電圖數(shù)據(jù)庫(kù)并進(jìn)行分析評(píng)價(jià)；

4、制定實(shí)驗(yàn)用羊標(biāo)準(zhǔn)、嚙齒類實(shí)驗(yàn)動(dòng)物墊料標(biāo)準(zhǔn)，大、小鼠運(yùn)輸標(biāo)準(zhǔn)（鼓勵(lì)多家單位聯(lián)合申報(bào)）。

進(jìn)度要求：年9月30日前完成

專題2、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物新技術(shù)的建立及應(yīng)用研究

研究目標(biāo)：建立若干種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量檢測(cè)、遺傳工程和保種育種新技術(shù)；建立斑馬魚(yú)主要臟器三維電子圖像。

研究?jī)?nèi)容：

1、從病原學(xué)、血清學(xué)以及分子生物學(xué)領(lǐng)域研究實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中支原體、泰澤氏菌、螺桿菌、CAR桿菌的特性，確立先進(jìn)、可靠的檢測(cè)方法；

2、以DNA和RNA各一種病毒的主要抗原基因進(jìn)行真核表達(dá)，結(jié)合單克隆抗體技術(shù)建立診斷技術(shù)平臺(tái)，提升實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量控制水平；

3、選擇4-6個(gè)品系作為供體和受體，構(gòu)建2-5個(gè)染色體替換的小鼠新品系，初步建立PCR-LDR小鼠基因分型技術(shù)平臺(tái)；

4、建立新的小鼠內(nèi)源基因修飾技術(shù)，實(shí)現(xiàn)對(duì)小鼠內(nèi)源基因的即時(shí)可逆調(diào)節(jié)，提高小鼠遺傳操作的效率，完善小鼠遺傳操作生物技術(shù)平臺(tái)的建設(shè)；

5、在組織學(xué)研究的基礎(chǔ)上，采用IT技術(shù)初步建立斑馬魚(yú)的某種三維電子臟器；

6、建立大鼠體外授精技術(shù)、冷凍技術(shù)、輔助體外受精技術(shù)（人工授精、ICSI）；

7、建立2-4種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物人工哺乳和無(wú)菌技術(shù)，并培育2-4種無(wú)菌動(dòng)物。

進(jìn)度要求：年9月30日前完成

專題3、動(dòng)物模型及其效果評(píng)價(jià)體系的建立與應(yīng)用研究

研究目標(biāo)：建立若干種人類重要疾病的動(dòng)物模型，并要求對(duì)每一種模型建立效果評(píng)價(jià)體系；凡涉及本專題項(xiàng)目需將有關(guān)研究成果納入*實(shí)驗(yàn)動(dòng)物資源中心統(tǒng)一管理。

研究?jī)?nèi)容：

1、建立若干種人類重要疾病的動(dòng)物模型，重點(diǎn)建立不育大鼠模型、大、小鼠腦卒中模型、前列腺疾病模型、小型豬腹壁拉鏈模型、原位大腸癌模型等，并要求對(duì)以上模型建立效果評(píng)價(jià)體系；

2、建立和完善腫瘤高轉(zhuǎn)移動(dòng)物模型篩選技術(shù)。

進(jìn)度要求：年9月30日前完成

二、申請(qǐng)方式

1)本指南公開(kāi)。凡符合課題制要求、有意承擔(dān)研究任務(wù)的法人、自然人均可以從“*科技”網(wǎng)站上進(jìn)入“在線受理科研計(jì)劃項(xiàng)目課題可行性方案”，并下載相關(guān)表格《*市科學(xué)技術(shù)委員會(huì)科研計(jì)劃項(xiàng)目課題可行性方案（*版）》，按照要求認(rèn)真填寫(xiě)。書(shū)面可行性報(bào)告要求同時(shí)附上相應(yīng)的知識(shí)產(chǎn)權(quán)狀況查新報(bào)告。鼓勵(lì)多家單位聯(lián)合申報(bào)，實(shí)行資源共享，并在申請(qǐng)材料中明確各自承擔(dān)的工作和職責(zé)，并附上合作協(xié)議或合同。

2)課題責(zé)任人年齡不限。鼓勵(lì)通過(guò)課題培養(yǎng)優(yōu)秀的中青年學(xué)術(shù)骨干。作為課題責(zé)任人和主要科研人員，不得同期參與承擔(dān)的863、973、國(guó)家科技攻關(guān)和*市重大、重點(diǎn)科研課題數(shù)超過(guò)三項(xiàng)。

3)每一課題的申請(qǐng)人可以提出不超過(guò)2名的擬回避自己課題評(píng)審的同行專家名單（名單可以隨課題可行性方案一同提交）。

4)本專項(xiàng)課題的申請(qǐng)起始日年7月4日，截止日期為年7月25日。課題申報(bào)時(shí)需提交書(shū)面可行性方案一式8份，并通過(guò)“*科技”網(wǎng)站提交可行性方案和所有表格。書(shū)面可行性方案集中受理時(shí)間為*年7月21日至7月25日，每個(gè)工作日上午9：00—下午4：30。所有書(shū)面文件請(qǐng)采用A4紙雙面印刷，普通紙質(zhì)材料作為封面，不采用膠圈、文件夾等帶有突出棱邊的裝訂方式。

5)網(wǎng)上填報(bào)備注：

1）登陸“*科技”網(wǎng)，進(jìn)入網(wǎng)上辦事專欄；

2）點(diǎn)擊《科研計(jì)劃項(xiàng)目課題可行性方案》受理并進(jìn)入申報(bào)頁(yè)面：

-【初次填寫(xiě)】轉(zhuǎn)入申報(bào)指南頁(yè)面，點(diǎn)擊"專題名稱"中相應(yīng)的指南專題后開(kāi)始申報(bào)項(xiàng)目（需要設(shè)置“項(xiàng)目名稱”、“依托單位”、“登錄密碼”）；

-【繼續(xù)填寫(xiě)】輸入已申報(bào)的項(xiàng)目名稱、依托單位、密碼后繼續(xù)該項(xiàng)目的填報(bào)。

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究范文第3篇

[關(guān)鍵詞] 補(bǔ)腎中藥；骨髓基質(zhì)干細(xì)胞；堿性磷酸酶；礦化結(jié)節(jié)

[中圖分類號(hào)] R274 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1673-9701（2013）08-0001-03

骨質(zhì)疏松癥是中老年人最常見(jiàn)的慢性病之一，其特征主要表現(xiàn)為骨的微觀結(jié)構(gòu)退化、骨量減少。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為骨質(zhì)疏松癥發(fā)生的重要原因是腎氣虛衰，補(bǔ)腎中藥方劑是治療骨質(zhì)疏松癥較為有效的藥方。目前在補(bǔ)腎中藥促進(jìn)成骨的基礎(chǔ)研究方面取得了一些成果[1]，但是目前有關(guān)補(bǔ)腎中藥復(fù)方的研究仍在探索階段。本實(shí)驗(yàn)自擬對(duì)成骨有作用的補(bǔ)腎中藥進(jìn)行組合， 對(duì)體外培養(yǎng)的大鼠骨髓基質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行誘導(dǎo)，從細(xì)胞水平檢測(cè)補(bǔ)腎復(fù)方對(duì)骨髓基質(zhì)干細(xì)胞的影響，觀察成骨情況。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物

選用出生6周齡雄性SD大鼠，體重不限，購(gòu)于溫州醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，合格證書(shū)：SCXK（浙）2006-0026。

1.2 中藥藥材

藥材（羊霍、杜仲、骨碎補(bǔ)、補(bǔ)骨脂、黨參、熟地、川牛膝、云苓、白術(shù)、煅龍骨、炒山藥、生蠣、丹皮）購(gòu)自浙江溫州地區(qū)醫(yī)藥公司。

1.3 儀器與試劑

Thermo二氧化碳培養(yǎng)箱；Nikon 倒置生物顯微鏡；掃描電鏡，上海泰思肯貿(mào)易有限公司；RPMI-1640培養(yǎng)基、胰蛋白酶、MTT試劑、地塞米松、維生素C、β-甘油磷酸鈉、四環(huán)素鹽酸鹽， 均為Sigma 公司產(chǎn)品；胎牛血清，上海勁馬生物科技有限公司；堿性磷酸酶試劑盒，南京建成生物工程研究所。

1.4 方法

1.4.1 補(bǔ)腎中藥水提取液的制備 取羊霍、杜仲、骨碎補(bǔ)、補(bǔ)骨脂、黨參、熟地、川牛膝、云苓、白術(shù)、煅龍骨、炒山藥、生蠣、丹皮，按比例稱重混合后，加蒸餾水浸泡并煮沸3次，每次3 h，合并濾液并濃縮，用75%乙醇沉淀后靜置于冰箱過(guò)夜，次日過(guò)濾回收乙醇，用0.5%NaOH調(diào)pH至7.0，制成含生藥1 g/mL的藥液，冷藏備用。

1.4.2 大鼠骨髓基質(zhì)干細(xì)胞的分離與培養(yǎng)鑒定[2] 取出生6周左右的雄性SD大鼠，體重不限（由溫州醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供）。頸椎脫位法處死，無(wú)菌條件下取股骨，剪斷兩骨端，無(wú)血清培養(yǎng)液吹打髓腔并沖出骨髓。將組織均勻平鋪加10%DMEM培養(yǎng)基接種于10 cm培養(yǎng)皿內(nèi)，放置于5%CO2、37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)。3 d換液1次，待細(xì)胞長(zhǎng)滿瓶底時(shí)后傳代，利用第3代細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)并用鈣鈷法進(jìn)行堿性磷酸酶染色。

1.4.3 細(xì)胞增殖功能測(cè)定 采用MTT法[3]測(cè)定補(bǔ)腎中藥方劑對(duì)大鼠成骨細(xì)胞增殖的影響。細(xì)胞消化傳代后，調(diào)整細(xì)胞濃度加入96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，每孔加入培養(yǎng)液，放入5% CO2 37℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。24 h后顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)合適后，分別換入含1 mg/L、10 mg/L、20 mg/L、40 mg/L、100 mg/L、200 mg/L補(bǔ)腎中藥的DMEM培養(yǎng)基，共6組，每組12孔；對(duì)照為空白組，為單用20ng/mL的地塞米松。含不同濃度補(bǔ)腎方劑培養(yǎng)1、3、7、10 d。采用MTT法于490 nm波長(zhǎng)，在酶標(biāo)儀上測(cè)試各孔光吸收值。本檢測(cè)方法重復(fù)3次，分別計(jì)算對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組的增殖率。

1.4.4 細(xì)胞功能的表達(dá) 大鼠骨髓基質(zhì)干以每孔1×105個(gè)/孔的密度被接種于6孔培養(yǎng)板，加入培養(yǎng)液，3 d后分別換入含0 mg/L、1 mg/L、10 mg/L、20 mg/L、40 mg/L、100 mg/L、200 mg/L補(bǔ)腎中藥的DMEM培養(yǎng)基，定期更換培養(yǎng)液及干預(yù)藥物，不進(jìn)行傳代直至檢測(cè)。

①細(xì)胞分化功能測(cè)定（ALP活性測(cè)定） 分別取各組（藥液濃度分別為0 mg/L、1 mg/L、10 mg/L、20 mg/L、40 mg/L、100 mg/L、200 mg/L，共7組）培養(yǎng)至第7天的成骨細(xì)胞，倒除原培養(yǎng)液，經(jīng)胰蛋白酶消化后吸出消化液，加入0.9%NaCl吹打后低溫凍溶至破碎，離心后上清液行酶免法測(cè)定堿性磷酸酶含量。②細(xì)胞礦化功能測(cè)定 同上述方法培養(yǎng)至第14天，利用von Kossa染色法顯示礦化結(jié)節(jié)。培養(yǎng)14 d后采用多聚甲醛進(jìn)行固定。以直徑>200 μm邊界清晰的結(jié)節(jié)，為礦化結(jié)節(jié)的計(jì)數(shù)標(biāo)準(zhǔn)[1]。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS16.0軟件處理，數(shù)據(jù)以（x±s）表示，多組間采用方差分析，然后行兩兩t檢驗(yàn)，以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 成骨細(xì)胞的鑒定

倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)，培養(yǎng)1 d后大部分的細(xì)胞為圓形，大小不等漂浮于培養(yǎng)液；培養(yǎng)2 d后部分細(xì)胞貼壁，形態(tài)主要為梭形、多角形或紡錘形等幾種形狀（圖1）。培養(yǎng)后7 d貼壁細(xì)胞增多可見(jiàn)偽足，瓶底長(zhǎng)滿梭形或多角形細(xì)胞（圖2）；10 d可見(jiàn)貼壁細(xì)胞形多呈梭形（圖3）。von Kossa染色礦化結(jié)節(jié)（圖4）。

2.2 補(bǔ)腎中藥方劑對(duì)大鼠MSCs增殖的影響

如表1所示，在1 d時(shí)100 mg/組高于空白組（t = 6.21，P < 0.001），且200 mg/組也高于空白組（t = 10.27，P < 0.001），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）；在3 d時(shí)濃度為20 mg/L（t = 6.89，P < 0.001）、40 mg/L（t = 6.63，P < 0.001）、100 mg/L（t = 14.49，P < 0.001）、200 mg/L（t = 22.21，P < 0.001）的OD值均高于空白組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）；在7 d時(shí)濃度為20 mg/L（t = 15.39，P < 0.001）、40 mg/L（t = 24.36，P < 0.001）、100 mg/L（t = 32.84，P < 0.001）、200 mg/L（t = 29.80，P < 0.001） 的OD值均高于空白組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P

2.3 對(duì)礦化結(jié)節(jié)數(shù)的影響

如表2所示，選取第14天，濃度20 mg/L組、40 mg/L組、100 mg/組、200 mg/組的礦化結(jié)節(jié)數(shù)與空白組比較，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P

3 討論

骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞是存在于骨髓中的間充質(zhì)干細(xì)胞，它具有多向分化潛能，能夠自我更新，可在體外培養(yǎng)。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在一定的誘導(dǎo)條件下可以向軟骨細(xì)胞、成骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞、心肌細(xì)胞等多個(gè)方向分化[4]。成骨細(xì)胞是體內(nèi)骨形成的主要細(xì)胞也是骨代謝的重要功能細(xì)胞，對(duì)維持骨的代謝平衡非常重要[5]。成骨細(xì)胞功能障礙或數(shù)量減少，都會(huì)導(dǎo)致骨組織代謝異常、骨質(zhì)疏松等多種疾病的發(fā)生。骨質(zhì)疏松癥在中醫(yī)學(xué)上被認(rèn)為是腎氣虛衰所致，因此近年來(lái)越來(lái)越多的研究利用補(bǔ)腎中藥來(lái)治療骨質(zhì)疏松癥。

本研究發(fā)現(xiàn)，不同濃度組的補(bǔ)腎中藥均可促進(jìn)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的增殖， 增強(qiáng)堿性磷酸酶的活性。堿性磷酸酶是骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化的主要特征性酶，也是最早出現(xiàn)的指標(biāo)，其由成骨細(xì)胞產(chǎn)生并可反映分化程度的高低。目前比較普遍的觀點(diǎn)認(rèn)為，堿性磷酸酶在體外的鈣化中起著關(guān)鍵的作用[6]，堿性磷酸酶活性的高表達(dá)標(biāo)志著成骨細(xì)胞的分化成熟[7]。相較于堿性磷酸酶，礦化結(jié)節(jié)為骨形成的標(biāo)志，它的形成代表了細(xì)胞進(jìn)一步成骨分化成熟[8]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，不同濃度的補(bǔ)腎中藥在不同程度上能刺激骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的增殖分化成骨。

傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)認(rèn)為“腎主藏精”，腎精可以生骨養(yǎng)髓的。本方劑所涵蓋的多味補(bǔ)腎中藥中部分作為單味中藥在體外有促進(jìn)向骨髓基質(zhì)干細(xì)胞成骨分化的作用。殷曉雪等[9]的研究發(fā)現(xiàn)羊藿可以上調(diào)BMP-2基因的表達(dá)，促進(jìn)成骨細(xì)胞的增殖和分化。徐展望等[10]的研究發(fā)現(xiàn)補(bǔ)骨脂能促進(jìn)大鼠成骨細(xì)胞的增殖。張立等[11]的研究發(fā)現(xiàn)杜仲也能通過(guò)刺激成骨細(xì)胞的增殖分化促進(jìn)骨的重建。此外，Wang等[12]的研究指出骨碎補(bǔ)能促進(jìn)人成骨細(xì)胞增殖作用。本實(shí)驗(yàn)中的補(bǔ)腎中藥是在上述單味補(bǔ)腎藥物的基礎(chǔ)上經(jīng)過(guò)組合構(gòu)成，它能夠促進(jìn)大鼠體外骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖及其向成骨細(xì)胞分化。

通過(guò)本實(shí)驗(yàn)可以發(fā)現(xiàn)，補(bǔ)腎中藥對(duì)骨髓基質(zhì)干細(xì)胞增值的影響。在低濃度不但沒(méi)有毒害作用，而且隨著濃度的增加，細(xì)胞增值作用遞增。中藥具有誘導(dǎo)分化的作用，和空白組相比（空白組也加入了誘導(dǎo)成骨液），中藥有誘導(dǎo)基質(zhì)干細(xì)胞向成骨細(xì)胞分化的作用。中期的ALP和細(xì)胞分化成熟晚期的礦化結(jié)節(jié)表明，藥物對(duì)細(xì)胞的分化成熟作用明顯，特別是對(duì)成骨晚期的骨礦化，補(bǔ)腎中藥顯示出極佳的促成骨作用。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 金慰芳，朱文菁，王洪復(fù)，等. 補(bǔ)腎中藥HUECS對(duì)培養(yǎng)成骨細(xì)胞增殖、分化及礦化功能的影響[J]. 中國(guó)骨質(zhì)疏松雜志，2001，7（8）：9-10.

[2] 補(bǔ)腎方劑對(duì)大鼠骨髓基質(zhì)干細(xì)胞增殖與分化的影響[J]. 中國(guó)藥物與臨床，2007，7（5）：329-331.

[3] 張榮華，舒曉春. 中藥復(fù)方補(bǔ)腎活血液對(duì)成骨細(xì)胞影響的實(shí)驗(yàn)研究[J]. 中國(guó)病理生理雜志，2003，19（6）：769-772.

[4] Mahmood A，Lu D，Wang L，et al. Intracerebral transplantation of marrow stromal cells cultured with neurotrophic factors promotes functional recovery inrats subjected to traumatic brain injury[J].Neurotrauma，2002，9（12）：1609-1617.

[5] Iwamoto J，Sato Y，Takeda T，et al. Bone quality and vitamin K2 in type 2 diabetes：Review of preclinical and clinical studies[J]. Nutrition Reviews，2011，69（3）：162-1676.

[6] Hwang R，Lee EJ，Kim MH，et al. Calcyclin，a Ca2+ ion-binding protein，contributes to the anabolic effects of simvastatin on bone[J]. J Bio Chem，2004，279（20）：21239-21247.

[7] Nguyen H，Qian JJ，Bhatnagar RS，et al. Enhanced cell attachment and osteoblastic activity by P15 peptide coated matrix in hydrogels[J]. Biochem Biophys Res Commun，2003，311（1）：179-186.

[8] Bellows CG，Aubin JE，Heersche JN，et al. Mineralized bone nodules formed in vitro from enzymatically released rat calvaria cell populations[J]. Calcif Tissue Int，1986，38（3）：143-154.

[9] 殷曉雪，陳仲?gòu)?qiáng)，黨耕町，等. 羊藿苷對(duì)人成骨細(xì)胞增殖與分化的影響[J]. 中國(guó)中藥雜志，2005，30（4）：289-291.

[10] 徐展望，張建新，譚國(guó)慶，等. 中藥骨碎補(bǔ)提取液對(duì)兔骨髓基質(zhì)細(xì)胞體外成骨分化的影響[J]. 中醫(yī)正骨，2006，18（6）：15-17.

[11] 張立，葛煥琦，白立緯，等. 杜仲葉醇防治糖尿病合并去勢(shì)大鼠骨質(zhì)疏松癥的實(shí)驗(yàn)研究[J]. 中國(guó)老年學(xué)雜志，2003，23（6）：370-372.

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究范文第4篇

【關(guān)鍵詞】　中藥；　治療；　靜脈炎

The Research of Goat Animal Experiment in Vein Preventing Superficial Transfusion Phlebitis with Self Made “Qiwei Tongmai Heated Application”/FANG Xiao-li.//Medical Innovation of China，2012，9(25):003-005

【Abstract】　Objective:To discuss the effect of intervening superficial transfusion phlebitis with self made “Qiwei tongmai heated application”.Method:UUO group:No intervention was given to goat every time except for injecting 20% mannit through superficial vein in hind leg.Control group:After injecting 20% mannit through superficial vein in hind leg of goat，50% magnesium sulfate was used for wet packing every time around the venipuncture site.Treatment group:After injecting 20% mannit through superficial vein in hind leg of goat，self made “Qiwei tongmai heated application” was used for heat packing every time around the venipuncture site，and moved before next puncture.Observe the change of cell around the goat superficial vein wall with light microscope.Result:In the UUO group，plenty of inflammatory cells were observed assembling in the the goat superficial vein wall，and thrombus formed.In the control group，some inflammatory cells were also observed gathering in the goat superficial vein wall，and the cell from cells wall were seen dropsy，but slighter than that of UUO group.In the experimental group，no inflammatory cells were observed assembling in the goat superficial vein wall，and the vein wall intact relatively and not dropsy.Conclusion:Partial external application of self made “Qiwei tongmai heated application”can promote blood circulation，remove blood stasis，clear heat，ease pain，and prevent the form of superficial phlebophlogosis，much better than wet dressing with 50% magnesium sulfate.It is cheap，and has easy operability in nursing，no side effect such as skin stimulus.It is worth promoting in clinical practice.

【Key words】　Chinese medicine；　Treatment；　Phlebitis

First-author’s address:The Orthopedic Hospital of Wendeng，Wendeng 264400，China

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究范文第5篇

【摘要】實(shí)驗(yàn)研究是現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的常用方法和手段，動(dòng)物模型中醫(yī)藥研究中發(fā)揮著巨大作用。復(fù)制中醫(yī)動(dòng)物模型的難度大，造模方法多樣，有待進(jìn)一步研究。我們從中醫(yī)藥研究應(yīng)用動(dòng)物模型意義、應(yīng)用價(jià)值、復(fù)制模型的要求及存在的問(wèn)題等方面談幾點(diǎn)看法。

【關(guān)鍵詞】中醫(yī)藥；實(shí)驗(yàn)研究；動(dòng)物模型；應(yīng)用價(jià)值；

1 中醫(yī)藥實(shí)驗(yàn)研究中開(kāi)展動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的意義和動(dòng)物模型的應(yīng)用價(jià)值

1.1 提供發(fā)病率低、潛伏期長(zhǎng)和病程長(zhǎng)的疾病材料 臨床上不易見(jiàn)到的疾病可用動(dòng)物模型隨時(shí)復(fù)制出來(lái)，如遺傳性疾病、免疫性疾病等在臨床上發(fā)病率較低，研究人員可以有意識(shí)地提高在動(dòng)物種群中的發(fā)病率，隨時(shí)進(jìn)行研究；腫瘤、呼吸道疾病、心血管疾病等，發(fā)生發(fā)展緩慢、潛伏期和病程較長(zhǎng)，在人體上很難進(jìn)行長(zhǎng)期觀察，而許多動(dòng)物生命周期較短，在實(shí)驗(yàn)室可以進(jìn)行長(zhǎng)期實(shí)驗(yàn)和研究。

1.2 嚴(yán)格控制實(shí)驗(yàn)條件，比較可靠地證實(shí)治療效果 人類疾病的轉(zhuǎn)歸除藥物治療外還受著多種因素的影響，如：氣候環(huán)境、精神情緒、飲食勞逸等，這些因素在一定條件下會(huì)導(dǎo)致疾病好轉(zhuǎn)或惡化。臨床上還可見(jiàn)到由于患者產(chǎn)生強(qiáng)烈的治愈欲求，對(duì)接受治療產(chǎn)生良好的療效愿望，心理上產(chǎn)生一種有效偏見(jiàn)，從而出現(xiàn)治療有效的反應(yīng)，即所謂“假陽(yáng)性”現(xiàn)象；反之，臨床上也常見(jiàn)到患者在治療中因飲食起居不慎或受到精神刺激等因素的影響，導(dǎo)致疾病惡化。這些都會(huì)造成醫(yī)生在治療疾病中產(chǎn)生錯(cuò)誤的療效判斷。所以要比較可靠地評(píng)論藥物治療效果就需要嚴(yán)格控制，而對(duì)于動(dòng)物來(lái)說(shuō)則較容易嚴(yán)格控制。

1.3 有利于樣品收集和簡(jiǎn)化實(shí)驗(yàn)操作，縮短研究周期，加快中醫(yī)發(fā)展 動(dòng)物模型作為人類疾病的“縮影”或“復(fù)制品”，便于研究者按實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐c需要隨時(shí)采集各種樣品，或處死動(dòng)物收集樣品，以了解疾病的全過(guò)程，這在臨床上是根本辦不到的。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的小型化發(fā)展趨勢(shì)也有利于動(dòng)物飼養(yǎng)管理和簡(jiǎn)化實(shí)驗(yàn)操作。有些問(wèn)題單憑臨床經(jīng)驗(yàn)積累需要花費(fèi)很長(zhǎng)時(shí)間才能得到解決，或者雖花費(fèi)很長(zhǎng)時(shí)間，問(wèn)題仍有得不到解決，而通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)有些問(wèn)題就可以得到迅速解決。

2 復(fù)制中醫(yī)動(dòng)物模型的基本要求

2.1 符合中醫(yī)的理論特點(diǎn) 中醫(yī)學(xué)具有完整獨(dú)特的理論體系，在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型制作方面，必須以中醫(yī)學(xué)的基本理論為指導(dǎo)，采用氣溫變化、飲食失宜、過(guò)服藥物及手術(shù)結(jié)扎等造型法，所做出的動(dòng)物模型表現(xiàn)的“ 證” 基本符合中醫(yī)臨床實(shí)際，能較好地反映中醫(yī)病因病機(jī)理論的重點(diǎn)。

2.2 重復(fù)性好，較好再現(xiàn)所研究人類疾病 理想的動(dòng)物模型應(yīng)是規(guī)范化的，能夠準(zhǔn)確地重復(fù)再現(xiàn)。建立疾病動(dòng)物模型的最終目的是為了研究探求防治人類疾病的規(guī)律，無(wú)論復(fù)制何種病理動(dòng)物模型，其表現(xiàn)和體證與中醫(yī)證的臨床表現(xiàn)特征大體一致。因此，對(duì)疾病動(dòng)物模型的評(píng)估主要取決于模型與人類疾病的相似或可比程度。一個(gè)理想的疾病動(dòng)物模型應(yīng)能再現(xiàn)所要研究的人類疾病，即動(dòng)物疾病表現(xiàn)與人類疾病相似。

2.3 簡(jiǎn)單易行，造模時(shí)間較短 復(fù)制的動(dòng)物模型應(yīng)力求可靠地反映人類疾病，即可特異性地反映某種疾病或某種功能、代謝與結(jié)構(gòu)變化。動(dòng)物模型應(yīng)具備某種疾病的主要癥狀和體征，還應(yīng)考慮到今后的臨床應(yīng)用和便于控制其疾病發(fā)展，以利于進(jìn)行研究。故要求模型復(fù)制方法簡(jiǎn)單易行，實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)力求以急性實(shí)驗(yàn)為主，縮短造模時(shí)間，一般應(yīng)選小動(dòng)物復(fù)制人類疾病模型。

2.4 觀察指標(biāo)具有直觀性與客觀性 動(dòng)物模型的觀測(cè)指標(biāo)力求客觀性、直觀性及重復(fù)性，既能如實(shí)反映實(shí)驗(yàn)所提問(wèn)題的特征變化，又便于操作。如把小鼠的體溫、心率、活動(dòng)度、精神表現(xiàn)、眼球的凹凸、耳廓色澤、游泳時(shí)間作為“陽(yáng)證”、“陰證”的觀測(cè)指標(biāo)，兩者呈鮮明的對(duì)比，形象地顯示了“陽(yáng)”與“陰”的特征。

3 中醫(yī)動(dòng)物模型應(yīng)用中存在的問(wèn)題

3.1 動(dòng)物模型很難用“四診”方法加以判別 在病人身上通過(guò)望、聞、問(wèn)、切可以得到完整的四診資料，做出較為準(zhǔn)確的診斷辨證，但是對(duì)復(fù)制動(dòng)物模型要想得到詳盡的四診資料困難較大，動(dòng)物既無(wú)主訴，又無(wú)法通過(guò)脈診、舌診來(lái)給動(dòng)物辨證。例如陽(yáng)虛、氣虛和寒證的造模動(dòng)物都可出現(xiàn)進(jìn)食減少、大便溏、耐寒力低等現(xiàn)象，因此單憑這些癥狀、體征較難判斷此模型屬何證。應(yīng)加強(qiáng)對(duì)中醫(yī)“證”動(dòng)物模型本質(zhì)的研究，制定出動(dòng)物模型的各項(xiàng)定量、半定量客觀指標(biāo)。

3.2 造模因素選擇缺少標(biāo)準(zhǔn) 目前有關(guān)造模的因素很多，究竟哪種造模因素比較符合臨床實(shí)際，能造出較為典型的中醫(yī)證型，目前還有待于進(jìn)一步研究。

3.3 照搬西醫(yī)動(dòng)物模型 未能以中醫(yī)理論為依據(jù)，單純把西醫(yī)疾病模型當(dāng)成中醫(yī)證的模型，中醫(yī)的證候不完全等同于西醫(yī)疾病的癥狀，臨床上?？梢钥吹酵环N西醫(yī)疾病，中醫(yī)可能診斷為多種證候，而對(duì)不同的西醫(yī)疾病，中醫(yī)也可能診治方法完全相同，所以要研究中醫(yī)、發(fā)展中醫(yī)，不能完全照搬西醫(yī)動(dòng)物模型，應(yīng)根據(jù)中醫(yī)特點(diǎn)，復(fù)制體現(xiàn)中醫(yī)藥特色的動(dòng)物模型，但這并不排除運(yùn)用西醫(yī)現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)對(duì)中醫(yī)藥進(jìn)行深人細(xì)致的研究。

隨著現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的發(fā)展，實(shí)驗(yàn)研究越來(lái)越受到人們的重視。經(jīng)過(guò)近幾十年的不懈努力，我國(guó)目前已建立中醫(yī)動(dòng)物模型150余種，這僅僅是初步的探索，還有待于進(jìn)一步研究。中醫(yī)藥只有通過(guò)大量實(shí)驗(yàn)研究，借用現(xiàn)代先進(jìn)技術(shù)和方法，才能使中醫(yī)藥逐漸發(fā)揚(yáng)光大，逐步走向世界，為人類健康事業(yè)做出更大貢獻(xiàn)。

參考文獻(xiàn)

［1］ 施新猷主編?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué).北京 人民軍醫(yī)出版社，2000

［2］ 馬超英主編.實(shí)驗(yàn)中醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)，北京.中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)出版社，2000