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雷人標(biāo)語(yǔ)范文第1篇

芬蘭是個(gè)小國(guó)，但這個(gè)國(guó)度的競(jìng)爭(zhēng)力排名在全球125個(gè)國(guó)家和地區(qū)中一度名列第二。在芬蘭經(jīng)濟(jì)成就的背后，是它充滿活力的高等教育體系。

教人子弟是崇高的職業(yè)

據(jù)《赫爾辛基郵報(bào)》調(diào)查，芬蘭年輕人最向往的職業(yè)是教師；社會(huì)上最受尊重的職業(yè)是教師；企業(yè)最受歡迎的人才也是教師。原因很簡(jiǎn)單，芬蘭中小學(xué)教師是最好學(xué)的一群人、是學(xué)歷很高的一群人、是最有成長(zhǎng)潛力的一群人。

盡管芬蘭重視教育，但教師的工資并不高。一個(gè)有著20多年教齡的中學(xué)數(shù)學(xué)教師的每月收入，稅后也就2000多歐元，折合人民幣1.6萬(wàn)元左右。

教師并不算高收入行業(yè)，卻是高門(mén)檻行業(yè)，在芬蘭，大學(xué)的教育專業(yè)相當(dāng)于中國(guó)的師范專業(yè)。但芬蘭教育專業(yè)的錄取率僅約10%。門(mén)檻這么高，為什么芬蘭年輕人還爭(zhēng)先恐后地報(bào)考師范、樂(lè)于從教呢？他們是這樣回答的：當(dāng)老師不是為了名利，而是因?yàn)檫@份工作對(duì)芬蘭無(wú)比重要，對(duì)個(gè)人深具價(jià)值。他們深信師資就是國(guó)力，教師素質(zhì)越高，國(guó)家就越強(qiáng)大。

芬蘭的教師們參考國(guó)家課程框架來(lái)教育不同階段的學(xué)生。但國(guó)家課程框架僅僅是指導(dǎo)性的，更多地需要教師發(fā)揮自主能動(dòng)性，通過(guò)自己的設(shè)計(jì)、創(chuàng)意、激情去按照自己的方式教育學(xué)生。

高度的教育自使教師在芬蘭成為一個(gè)有魅力的、受尊敬、受歡迎的職業(yè)。

后進(jìn)生更受關(guān)注

芬蘭中小學(xué)教育的宗旨是提攜后進(jìn)為主，齊頭并進(jìn)為目的。他們認(rèn)為，每一個(gè)中小學(xué)生在不久的將來(lái)都是國(guó)家非常寶貴的人力資源，不愿意看到有人掉隊(duì)。

在學(xué)校，教師們關(guān)注最多的是那些后進(jìn)生、反應(yīng)慢的學(xué)生，甚至是一些家庭有問(wèn)題的學(xué)生。對(duì)那些學(xué)習(xí)拔尖、一點(diǎn)就透的學(xué)生卻甚少關(guān)注，甚至壓根兒就不鼓勵(lì)冒尖激進(jìn)。

對(duì)于那些“吃不飽”的學(xué)生，教師會(huì)不動(dòng)聲色地讓他們超進(jìn)度學(xué)習(xí)，離開(kāi)班級(jí)，默默地在走廊上或電腦后自學(xué)。只有當(dāng)所有的同學(xué)都掌握了、學(xué)會(huì)了，老師才會(huì)繼續(xù)往下進(jìn)行新的課程。

對(duì)于那些有學(xué)習(xí)障礙的學(xué)生，學(xué)校有專人負(fù)責(zé)額外幫助，還有政府出資免費(fèi)參加的課外輔導(dǎo)。實(shí)在不行，就會(huì)被轉(zhuǎn)到特殊學(xué)校，那里有具備多年特殊教學(xué)經(jīng)驗(yàn)的資深教師。政府唯一嚴(yán)管嚴(yán)卡的，就是分片兒安排教育大臣，視察監(jiān)督是否有逃學(xué)不上學(xué)的孩子，不稱職的家長(zhǎng)和學(xué)校都會(huì)受到嚴(yán)厲的懲罰。

雷人標(biāo)語(yǔ)范文第2篇

[關(guān)鍵詞] 培養(yǎng)目標(biāo)；專業(yè)型；復(fù)合化；理工特色

[基金項(xiàng)目] 天津市高等教育學(xué)會(huì)“十二五”課題（125q164）。

【中圖分類號(hào)】 H36【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】 A【文章編號(hào)】 1007-4244（2014）06-281-2

一、我國(guó)高校日語(yǔ)專業(yè)人才的培養(yǎng)目標(biāo)

在我國(guó)高等教育中的外語(yǔ)專業(yè)始終被當(dāng)作是具有基礎(chǔ)學(xué)科性質(zhì)的專業(yè)教育，外語(yǔ)則一直被定位于文學(xué)學(xué)科門(mén)類中的“外國(guó)語(yǔ)言文學(xué)類”，而外語(yǔ)類專業(yè)肩負(fù)的使命則是“教授外國(guó)語(yǔ)言、文學(xué)和文化等課程，培養(yǎng)從事翻譯、教學(xué)、研究、管理工作的外語(yǔ)高級(jí)專門(mén)人才”，這樣的學(xué)科分類和專業(yè)界定明顯將外語(yǔ)獨(dú)立于其它學(xué)科之外，從而直接導(dǎo)致了我國(guó)外語(yǔ)專業(yè)人才培養(yǎng)的單科教育模式。日語(yǔ)專業(yè)人才的培養(yǎng)也是如此，也是單一的教育模式。近年來(lái)，信息高科技產(chǎn)業(yè)蓬勃發(fā)展，日語(yǔ)人才需求急速遞增。日本中小企業(yè)教學(xué)公庫(kù)2006年12月1日發(fā)表的調(diào)查結(jié)果表明，57%的在華企業(yè)的良好發(fā)展促使日語(yǔ)人才需求持續(xù)增長(zhǎng)。從用人單位反饋的情況來(lái)看，無(wú)論什么行業(yè)、哪類職位，對(duì)日語(yǔ)人才的需求，主要集中在“日語(yǔ)+專業(yè)”的復(fù)合型人才上。社會(huì)對(duì)日語(yǔ)人才的需求發(fā)生了巨大變化，傳統(tǒng)教育模式下培養(yǎng)出來(lái)的日語(yǔ)人才已不能適應(yīng)社會(huì)的需求了。在這種形勢(shì)下，我們勢(shì)必要對(duì)傳統(tǒng)的教育模式進(jìn)行改革，主動(dòng)適應(yīng)社會(huì)的需要，明確日語(yǔ)人才培養(yǎng)目標(biāo)，即培養(yǎng)復(fù)合型、專業(yè)化日語(yǔ)人才。

二、中國(guó)高校的日語(yǔ)人才培養(yǎng)模式存在的問(wèn)題及原因

（一）中國(guó)高校的日語(yǔ)人才培養(yǎng)模式存在的問(wèn)題

近年來(lái)，全國(guó)各高校日語(yǔ)專業(yè)的招生規(guī)模隨著社會(huì)實(shí)際需求在不斷擴(kuò)大，日語(yǔ)專業(yè)人才培養(yǎng)模式也隨之進(jìn)行了相應(yīng)的調(diào)整，各高校日語(yǔ)專業(yè)人才培養(yǎng)方案也從單一的語(yǔ)言文化型向科技型、經(jīng)貿(mào)型轉(zhuǎn)變。盡管如此，由于近95%的學(xué)生是從進(jìn)入大學(xué)以后才開(kāi)始學(xué)習(xí)日語(yǔ)（中國(guó)的中學(xué)生義務(wù)教育95%學(xué)校是英語(yǔ)）。學(xué)生們從“あいうえお”零起點(diǎn)開(kāi)始，且在大學(xué)4年學(xué)習(xí)里，同時(shí)完成相關(guān)公共基礎(chǔ)課、專業(yè)基礎(chǔ)課以及專業(yè)方向模塊等的學(xué)習(xí)。因此大部分學(xué)生只是求得課程通過(guò)，很少有同學(xué)將今后的就業(yè)與自己個(gè)性特長(zhǎng)的發(fā)揮聯(lián)系起來(lái)，學(xué)習(xí)缺乏主動(dòng)性，缺少動(dòng)力。平時(shí)的教學(xué)過(guò)于強(qiáng)調(diào)理論層面，忽視了第二課堂的社會(huì)實(shí)踐環(huán)節(jié)，所以學(xué)生缺乏具有針對(duì)性的語(yǔ)言實(shí)訓(xùn)的機(jī)會(huì)。日語(yǔ)專業(yè)的學(xué)生對(duì)其他管理、經(jīng)貿(mào)等專業(yè)的學(xué)習(xí)也都停留在表面膚淺的了解層面上而已。而其他工科專業(yè)的學(xué)生，又因?yàn)槿照Z(yǔ)本身能力不夠過(guò)硬等，無(wú)法勝任日資企業(yè)需求的專業(yè)+日語(yǔ)類人才的職位。這種狀況下培養(yǎng)的學(xué)生與日資企業(yè)實(shí)際需求的人才類型之間存在著以下兩個(gè)缺陷：一是日語(yǔ)專業(yè)學(xué)生缺特長(zhǎng)；二是專業(yè)型人才日語(yǔ)不過(guò)硬，即通常所說(shuō)的復(fù)合型、專業(yè)化人才塑造不到位的現(xiàn)象。

（二）人才培養(yǎng)與日企實(shí)際需求相脫節(jié)的原因

1.學(xué)生方面：目前求職于日資企業(yè)的絕大部分是各高校日語(yǔ)專業(yè)學(xué)生，生源類型決定了生源種類的單一性。況且各高校的人才培養(yǎng)是建立在專業(yè)平臺(tái)基礎(chǔ)之上。就拿天津理工大學(xué)來(lái)說(shuō)，我校共有二十多個(gè)學(xué)院，五十幾個(gè)專業(yè)，學(xué)生人數(shù)近2萬(wàn)人。各專業(yè)學(xué)生學(xué)習(xí)主要是以本專業(yè)課程為主，就業(yè)也主要以各自所學(xué)專業(yè)對(duì)口為前提進(jìn)行考慮。因此，掌握一定專業(yè)知識(shí)和技能的工科學(xué)生，缺乏外語(yǔ)能力；而掌握外語(yǔ)的日語(yǔ)專業(yè)學(xué)生，又不懂專業(yè)知識(shí)這一現(xiàn)象成為普遍。

2.師資方面：培養(yǎng)日資企業(yè)所需復(fù)合型、專業(yè)化人才，要求我們的教師必須精通外語(yǔ)，且具備至少一門(mén)或多門(mén)專業(yè)知識(shí)技能。而目前國(guó)內(nèi)的師資結(jié)構(gòu)以及高校的管理體制無(wú)法實(shí)現(xiàn)這一目標(biāo)。各二級(jí)學(xué)院只關(guān)注自己學(xué)科的發(fā)展未來(lái)，教學(xué)工作的重點(diǎn)放在如何提高本專業(yè)學(xué)生的專業(yè)技能上，即使引進(jìn)新的師資人才，也只考慮對(duì)方的專業(yè)水平等條件，對(duì)復(fù)合型、專業(yè)化的師資要求考慮比較少。近年來(lái)在這方面，天津理工大學(xué)領(lǐng)導(dǎo)積極開(kāi)動(dòng)腦筋、不斷開(kāi)拓進(jìn)取，為培養(yǎng)出適于天津經(jīng)濟(jì)發(fā)展需要的復(fù)合型專業(yè)人才，開(kāi)辦了雙輔修專業(yè)。但由于對(duì)輔修專業(yè)學(xué)生資格審查門(mén)檻高，師資等問(wèn)題使得學(xué)生對(duì)第二學(xué)位的選擇受到一定限制。

三、具有理工特色的培養(yǎng)目標(biāo)的思考

作為理工科院校的外語(yǔ)專業(yè)，如何能突顯出其理工類大學(xué)的特色。如何進(jìn)一步利用理工類大學(xué)的優(yōu)勢(shì)，筆者認(rèn)為應(yīng)從人才培養(yǎng)模式和師資力量?jī)煞矫嬷帧?/p>

（一）人才培養(yǎng)模式的思考

隨著我國(guó)經(jīng)濟(jì)建設(shè)的發(fā)展和改革開(kāi)放的不斷深化，對(duì)日語(yǔ)人才也提出的迫切要求。結(jié)合本校的理工類院校優(yōu)勢(shì)，提出了“培養(yǎng)復(fù)合型、專業(yè)化日語(yǔ)人才”這一培養(yǎng)目標(biāo)。以往的教育模式往往把日語(yǔ)人才的培養(yǎng)目標(biāo)設(shè)定在日語(yǔ)專業(yè)本身，注重具有扎實(shí)的日語(yǔ)語(yǔ)言基礎(chǔ)，以培養(yǎng)學(xué)生掌握語(yǔ)言學(xué)、文學(xué)或語(yǔ)言文學(xué)相結(jié)合的知識(shí)為培養(yǎng)目標(biāo)，在教學(xué)中，不注重日語(yǔ)專業(yè)與其他理工學(xué)科的結(jié)合、交叉和滲透，培養(yǎng)的人才是單純的語(yǔ)言文學(xué)和基礎(chǔ)技能型的日語(yǔ)人才。然而理工院校應(yīng)依據(jù)自身的學(xué)科和專業(yè)優(yōu)勢(shì)特點(diǎn)，重視文理交叉和融合，培養(yǎng)既具有扎實(shí)的日語(yǔ)語(yǔ)言基礎(chǔ)和人文文化素質(zhì)，又具有突出的理工科背景的日語(yǔ)高級(jí)專業(yè)人才。

（二）師資力量

教師在教學(xué)過(guò)程的中的角色是無(wú)可替代的，無(wú)論是專業(yè)的設(shè)置、教材的修改，還是教學(xué)方法的改革，哪一個(gè)環(huán)節(jié)都離不開(kāi)廣大外語(yǔ)教師的積極參與。為了實(shí)現(xiàn)“培養(yǎng)復(fù)合型人才”這一目標(biāo)，當(dāng)前的日語(yǔ)專業(yè)的師資隊(duì)伍無(wú)論從知識(shí)結(jié)構(gòu)還是技能結(jié)構(gòu)上都難以勝任日語(yǔ)以外的教學(xué)任務(wù)，所以更應(yīng)該發(fā)揮理工類院校的優(yōu)勢(shì)，引進(jìn)其它學(xué)院的有留學(xué)日本背景專業(yè)教師為日語(yǔ)專業(yè)學(xué)生講解專業(yè)知識(shí)。或者和其它學(xué)院聯(lián)合開(kāi)辦選修課，既可以讓日語(yǔ)專業(yè)的學(xué)生選修更多具有專業(yè)化較強(qiáng)的理工課程，也可以讓更多的理工專業(yè)學(xué)生選修日語(yǔ)課程或日本文化等相關(guān)課程。

（三）充分利用現(xiàn)代化教學(xué)手段

21世紀(jì)，世界進(jìn)入信息時(shí)代，日語(yǔ)教學(xué)方法也應(yīng)適應(yīng)時(shí)展，在傳統(tǒng)教學(xué)的基礎(chǔ)上，充分發(fā)揮校園網(wǎng)、互聯(lián)網(wǎng)、多媒體技術(shù)的優(yōu)勢(shì)，使教學(xué)更加便利、更加趣味化。

在日常教學(xué)中，應(yīng)充分利用好各類資源，以多媒體手段提高教學(xué)質(zhì)量與課堂效率。多媒體教學(xué)不僅能充分發(fā)掘同學(xué)們聽(tīng)、說(shuō)、讀、寫(xiě)的日語(yǔ)綜合能力，還能以豐富的文化背景(如日本的風(fēng)土人情、飲食生活習(xí)慣等)都能激發(fā)學(xué)生熱愛(ài)日語(yǔ)的興趣，增長(zhǎng)同學(xué)們的見(jiàn)識(shí)，大大提高教學(xué)效率。多媒體教學(xué)中，可以使用圖片、影像、音樂(lè)等教學(xué)內(nèi)容，提高教學(xué)效率，而不能受限于課本，進(jìn)行填鴨式的灌輸。要善于結(jié)合多媒體手段，化抽象為具體、化難為易、化繁為簡(jiǎn)，引導(dǎo)學(xué)生擺脫思維定勢(shì)，學(xué)會(huì)舉一反三，從而充分調(diào)動(dòng)學(xué)生眼耳口鼻等感官，從而鍛煉聽(tīng)說(shuō)讀寫(xiě)的綜合日語(yǔ)能力。此外，隨著互聯(lián)網(wǎng)的日漸普及，我們除了可以充分利用多媒體參與教學(xué)外，還可以充分利用互聯(lián)網(wǎng)時(shí)代的優(yōu)勢(shì)，使日語(yǔ)教學(xué)從傳統(tǒng)的封閉模式轉(zhuǎn)變?yōu)榘腴_(kāi)放模式或開(kāi)放模式。由此一來(lái)，不僅能有效提高課堂上有效時(shí)間內(nèi)的信息容量，還能激發(fā)學(xué)生的學(xué)習(xí)興趣，使他們易于接受新鮮事物，并有效地培養(yǎng)了學(xué)生的自學(xué)能力以及理解力，為其成為復(fù)合型人才打下堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)。

參考文獻(xiàn)：

[1]教育部高等學(xué)校外語(yǔ)專業(yè)教學(xué)指導(dǎo)委員會(huì)日語(yǔ)組，高等院校日語(yǔ)專業(yè)基礎(chǔ)階段教學(xué)大綱[M].大連：大連理工大學(xué)出版社，2001.

[2]教育部高等學(xué)校外語(yǔ)專業(yè)教學(xué)指導(dǎo)委員會(huì)日語(yǔ)組，高等院校日語(yǔ)專業(yè)高年級(jí)階段教學(xué)大綱[M].大連：大連理工大學(xué)出版社，2001.

[3]天津理工大學(xué).日語(yǔ)專業(yè)培養(yǎng)方案（2009版），

[4]陳瀟.日語(yǔ)人才培養(yǎng)對(duì)專業(yè)的要求[J].飛天，2012，（06）.

雷人標(biāo)語(yǔ)范文第3篇

近年來(lái)，為了使我院的大學(xué)英語(yǔ)教學(xué)目標(biāo)的確定能趨向科學(xué)化，參照了國(guó)外教學(xué)目標(biāo)研究的成果，從我院實(shí)際出發(fā)，也提出了一些設(shè)想，進(jìn)行了可貴的嘗試。而本文作者根據(jù)布魯姆認(rèn)知領(lǐng)域教育目標(biāo)分類的理論，結(jié)合我院大學(xué)英語(yǔ)教學(xué)的實(shí)際，對(duì)各個(gè)領(lǐng)域中的亞領(lǐng)域進(jìn)行了調(diào)整，并對(duì)各個(gè)部分所達(dá)到的結(jié)果做出了具體的闡述。

1.布魯姆在認(rèn)知領(lǐng)域教育目標(biāo)分類法

在認(rèn)知領(lǐng)域的教育目標(biāo)可分成：知道（知識(shí)），領(lǐng)會(huì)（理解），應(yīng)用，分析，綜合和評(píng)價(jià)。

1.1知道（知識(shí)）（knowledge）

是指認(rèn)識(shí)并記憶。這一層次所涉及的是具體知識(shí)或抽象知識(shí)的辨認(rèn)，用一種非常接近于學(xué)生當(dāng)初遇到的某種觀念和現(xiàn)象時(shí)的形式，回想起這種觀念或現(xiàn)象。

（特定知識(shí)：術(shù)語(yǔ)和事實(shí)；處理特殊問(wèn)題的方法或途徑的知識(shí)：序列、分類、標(biāo)準(zhǔn)、方法等；一般或抽象的知識(shí)：原理、理論、知識(shí)框架等。）

提示：回憶，記憶，識(shí)別，列表，定義，陳述，呈現(xiàn)。

1.2領(lǐng)會(huì)（comprehension）

是指對(duì)事物的理解，但不要求深刻的領(lǐng)會(huì)，而是初步的，可能是膚淺的、低水平的。

（能把握材料的意義。轉(zhuǎn)換：用自己的話或用與原先的表達(dá)方式不同的方式表達(dá)自己的思想；解釋：對(duì)一項(xiàng)信息加以說(shuō)明或概述；推斷：估計(jì)將來(lái)的趨勢(shì)或后果。）

提示：說(shuō)明，識(shí)別，描述，解釋，區(qū)別，重述，歸納，比較。

1.3應(yīng)用（application）

是指對(duì)所學(xué)習(xí)的概念、法則、原理的運(yùn)用。它要求在沒(méi)有說(shuō)明問(wèn)題解決模式的情況下，學(xué)會(huì)正確地把抽象概念運(yùn)用于適當(dāng)?shù)那闆r。這里所說(shuō)的應(yīng)用是初步的直接應(yīng)用，而不是全面地、通過(guò)分析、綜合地運(yùn)用知識(shí)。

（高水平的理解。能將習(xí)得的材料應(yīng)用于新的具體情境。概念、規(guī)則、方法、規(guī)律和理論的應(yīng)用。）

提示：應(yīng)用，論證，操作，實(shí)踐，分類，舉例說(shuō)明，解決。

1.4分析（analysis）

是指把材料分解成它的組成要素部分，從而使各概念間的相互關(guān)系更加明確，材料的組織結(jié)構(gòu)更為清晰，詳細(xì)地闡明基礎(chǔ)理論和基本原理。

提示：分析，檢查，實(shí)驗(yàn)，組織，對(duì)比，比較，辨別，區(qū)別。

1.5綜合（synthesis）

是以分析為基礎(chǔ)，全面加工已分解的各要素，并再次把它們按要求重新地組合成整體，以便綜合地創(chuàng)造性地解決問(wèn)題。它涉及具有特色的表達(dá)，制定合理的計(jì)劃和可實(shí)施的步驟，根據(jù)基本材料推出某種規(guī)律等活動(dòng)。它強(qiáng)調(diào)特性與首創(chuàng)性，是高層次的要求。

提示： 組成，建立，設(shè)計(jì)，開(kāi)發(fā)，計(jì)劃，支持，系統(tǒng)化。

1.6評(píng)價(jià)（evaluation）

這是認(rèn)知領(lǐng)域里教育目標(biāo)的最高層次。這個(gè)層次的要求不是憑借直觀的感受或觀察的現(xiàn)象作出評(píng)判，而是理性的深刻的對(duì)事物本質(zhì)的價(jià)值作出有說(shuō)服力的判斷，它綜合內(nèi)在與外在的資料、信息，作出符合客觀事實(shí)的推斷。

提示：評(píng)價(jià)，估計(jì)，評(píng)論，鑒定，辯明，辯護(hù)，證明，預(yù)測(cè)，預(yù)言，支持。

2.布魯姆的教學(xué)目標(biāo)分類法在大學(xué)英語(yǔ)的教學(xué)中對(duì)設(shè)計(jì)問(wèn)題的啟發(fā)

所提問(wèn)題可以從簡(jiǎn)單逐漸發(fā)展到復(fù)雜。

可以按學(xué)習(xí)目標(biāo)的要求，分層次提出問(wèn)題。

2.1認(rèn)知性問(wèn)題：它是對(duì)知識(shí)的回憶和確認(rèn)。

如：“老師的工作職責(zé)是什么？”（definition），“上次的英語(yǔ)考試，你及格了嗎？” （Yes or No）

2.2理解性問(wèn)題：它主要考察學(xué)生對(duì)概念、規(guī)律的理解，讓學(xué)生進(jìn)行知識(shí)的總結(jié)、比較和證明某個(gè)觀點(diǎn)。

如“微笑（smile）和大笑（laugh）的區(qū)別和聯(lián)系是什么？”，“你能用自己的語(yǔ)言來(lái)轉(zhuǎn)述被動(dòng)語(yǔ)態(tài)（passive voice）嗎？”

2.3應(yīng)用性問(wèn)題：它主要是指對(duì)所學(xué)習(xí)的概念、法則、原理的運(yùn)用。

如“怎么用公式來(lái)體現(xiàn)（if引導(dǎo)的真實(shí)條件狀語(yǔ)從句）的‘主將從現(xiàn)’這種現(xiàn)象？ ”，“英語(yǔ)中有哪些詞體現(xiàn)了‘名前動(dòng)后’這個(gè)規(guī)律？”

2.4分析性問(wèn)題：它主要讓學(xué)生透徹地分析和理解，并能利用這些知識(shí)來(lái)對(duì)自己的觀點(diǎn)進(jìn)行辯護(hù)。

如“在英語(yǔ)學(xué)習(xí)中為什么會(huì)發(fā)生用錯(cuò)關(guān)系代詞的情況？”，“為什么說(shuō)大學(xué)英語(yǔ)的學(xué)習(xí)逐步偏向?qū)嶋H應(yīng)用？”

2.5綜合性問(wèn)題：它能使學(xué)生系統(tǒng)地分析和解決某些有聯(lián)系的知識(shí)點(diǎn)集合。

如“什么情況下that 不能代替which？”，“如果全世界普及漢語(yǔ)，英語(yǔ)的學(xué)習(xí)將會(huì)怎樣？”

2.6評(píng)價(jià)性問(wèn)題：理性地、深刻地對(duì)事物本質(zhì)的價(jià)值作出有說(shuō)服力的判斷。

如“大學(xué)英語(yǔ)四級(jí)成績(jī)成為用人單位衡量英語(yǔ)水平的標(biāo)準(zhǔn)，好還是不好？為什么？”，“大學(xué)英語(yǔ)的學(xué)習(xí)對(duì)未來(lái)所從事的職業(yè)有什么樣的實(shí)際意義？”

這六種類型的問(wèn)題中，前三類是屬于初級(jí)層次的認(rèn)知問(wèn)題，它一般有直接的、明確的、無(wú)歧義的答案，而后三類問(wèn)題屬于高級(jí)認(rèn)知問(wèn)題，通常沒(méi)有唯一的正確答案，從不同的角度有不同的回答。

在問(wèn)題設(shè)計(jì)中，提倡課堂教學(xué)不能僅僅局限于初級(jí)認(rèn)知的問(wèn)題，在適當(dāng)?shù)臅r(shí)機(jī)，高級(jí)認(rèn)知問(wèn)題更能夠激發(fā)學(xué)生的思維，從而培養(yǎng)學(xué)生的思維能力、觀念和自我評(píng)價(jià)體系。

3.布魯姆認(rèn)知領(lǐng)域教育目標(biāo)分類法在大學(xué)英語(yǔ)實(shí)踐教學(xué)中的運(yùn)用

設(shè)想這樣一個(gè)情景：你看到馬路上圍著一群人（a crowd of people），其中還有警察 （policemen）。

用“布魯姆目標(biāo)分類法”的六個(gè)層次，結(jié)合該情景，說(shuō)說(shuō)什么是“知道”、“領(lǐng)會(huì)”、“應(yīng)用”、“分析”、“綜合”和“評(píng)價(jià)”。

4.總結(jié)

雷人標(biāo)語(yǔ)范文第4篇

關(guān)鍵詞：增殖放流；魚(yú)類；標(biāo)記技術(shù)；大規(guī)模標(biāo)記

中圖分類號(hào)：S931.5；S932.4 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：0439-8114（2017）07-1206-05

DOI：10.14088/ki.issn0439-8114.2017.07.002

Advances in Fish Labeling Technology and Its Application

in Artificial Proliferation and Release

ZHOU Hui-xia1，GAN Wei-xiong2

（1.Animal Husbandry Food Stuff Bureau of Shehong County， Sichuan Province， Shehong 629200， Sichuan，China；

2.Yalong River Hydropower Development Company， Ltd.， Chengdu 610051， China）

Abstract： Marking-replenishment floating fry is a common method for assessing the effect of proliferation and release. The key to successful marker release is the choice of marker technology. Small-scale markings are focused on marker mortality， marker retention times， and so on. In addition， in the large-scale marking need to consider the marked labor intensity， cost and other factors. This paper summarizes the research and their advantages and disadvantages of listed， passive integrated radar， otolith and molecular standard， and introduces the application of large-scale marking technology in artificial proliferation and release at home and abroad， Which can provide reference for the selection of discharge marking technology under different background conditions.

Key words： proliferation and release； fish； marking technology； mass-marking

~類人工增殖放流是主動(dòng)增殖水域魚(yú)類資源的活動(dòng)，是國(guó)內(nèi)外通用的養(yǎng)護(hù)水生生物資源，修護(hù)水域生態(tài)和促進(jìn)漁業(yè)增效的有效手段[1]。近年來(lái)，中國(guó)各地政府在不同水域都組織開(kāi)展了大規(guī)模的增殖放流活動(dòng)，國(guó)內(nèi)大中型水電站也將人工增殖放流作為保護(hù)工程河段魚(yú)類的一種重要措施。對(duì)放流魚(yú)類進(jìn)行標(biāo)記，可跟蹤其在野外環(huán)境的擴(kuò)散和存活情況，以及與野外種群的遺傳關(guān)系和生態(tài)關(guān)系，可科學(xué)評(píng)估增殖放流效果，對(duì)漁業(yè)資源管理具有較強(qiáng)的指導(dǎo)性。本文介紹了當(dāng)前幾種常用的魚(yú)類標(biāo)記技術(shù)，比較各標(biāo)記技術(shù)的優(yōu)缺點(diǎn)，并對(duì)適合人工增殖放流的大規(guī)模標(biāo)記技術(shù)進(jìn)行了綜述，旨在為不同背景下的放流標(biāo)記技術(shù)的選擇提供參考。

1 常用魚(yú)類標(biāo)記技術(shù)

1.1 掛牌標(biāo)記

掛牌標(biāo)志是將寫(xiě)有標(biāo)志魚(yú)信息的掛牌用專門(mén)材料（不銹鋼絲、聚酯纖維等）固定在魚(yú)體上，依據(jù)固著方式不同，可分為3類：穿體標(biāo)、箭形標(biāo)和內(nèi)錨標(biāo)，前2類標(biāo)常常固著在魚(yú)體背部肌肉，后者則固著在魚(yú)體腹部[2]。掛牌標(biāo)志操作方法較簡(jiǎn)單，成本低，且肉眼可識(shí)別，因此被廣泛應(yīng)用，但一般用于個(gè)體較大的魚(yú)，如體長(zhǎng)在15 cm以上的[3]，因?yàn)樾⌒汪~(yú)類可能難以忍受固著時(shí)的操縱壓力，難以承受額外的代謝負(fù)擔(dān)[4]。但國(guó)內(nèi)學(xué)者成功應(yīng)用標(biāo)志牌標(biāo)記全長(zhǎng)7 cm以上的牙鲆（Paralichthys olivaceus）[5]和褐牙鲆[6]，對(duì)全長(zhǎng)10 cm以上的半滑舌鰨（Cynoglossus semilaevis）也可用T型標(biāo)志牌標(biāo)記[7]。在利用標(biāo)志牌對(duì)放流魚(yú)進(jìn)行標(biāo)記時(shí)，不可避免地在魚(yú)體標(biāo)志部位形成傷口，若標(biāo)記后不經(jīng)處理直接放入野外環(huán)境中，標(biāo)志魚(yú)的標(biāo)志部位容易惡化，形成壞死，直接導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)魚(yú)的死亡或生長(zhǎng)抑制[8]。黃國(guó)光等[9]研究發(fā)現(xiàn)標(biāo)志部位對(duì)黃鰭鯛（Acanthopagrus latus）幼魚(yú)的存活有顯著影響，以背鰭棘基部肌肉標(biāo)志的存活率最高，而背鰭條基部肌肉標(biāo)志的存活率最低。

1.2 被動(dòng)整合式雷達(dá)標(biāo)

被動(dòng)整合式雷達(dá)標(biāo)（Passive integrated transponder，PIT）在魚(yú)類上的應(yīng)用始于20世紀(jì)80年代，該標(biāo)志系統(tǒng)包括標(biāo)、勵(lì)磁系統(tǒng)和信號(hào)接收與處理單元[10]。每個(gè)PIT標(biāo)都對(duì)應(yīng)一個(gè)惟一的由字母數(shù)字組成的編碼，通過(guò)專門(mén)注射器將其注入魚(yú)體肌肉或腹腔而實(shí)現(xiàn)標(biāo)記，可直接用便攜式檢測(cè)器掃描確認(rèn)，應(yīng)用范疇極為廣泛[11]。探討PIT標(biāo)記魚(yú)類的存活生長(zhǎng)情況和標(biāo)志保留率是評(píng)價(jià)該標(biāo)記方法是否適用于被標(biāo)記對(duì)象的重要指標(biāo)。研究表明PIT標(biāo)記死亡主要發(fā)生在標(biāo)記后10 d內(nèi)[12，13]，一般標(biāo)記死亡的魚(yú)類都規(guī)格偏小的，如體重小于3 g的金頭鯛（Sparus aurata）[14]和尼羅羅非魚(yú)（Tilapia nilotica）[12]標(biāo)記后都有極高的死亡率。標(biāo)記后一段時(shí)間內(nèi)的生長(zhǎng)抑制現(xiàn)象在幾種鮭科魚(yú)類上明顯存在[15]，但隨后的補(bǔ)償生長(zhǎng)能彌補(bǔ)前期不足[10]。PIT標(biāo)志保持率與標(biāo)記魚(yú)類大小密切相關(guān)，Acolas等[15]對(duì)叉長(zhǎng)57～63 mm的褐鱒（Salmo trutta）PIT腹腔標(biāo)記，脫標(biāo)率超過(guò)20%，而Prentice等[10]和Matthew[13]發(fā)現(xiàn)叉長(zhǎng)56～190 mm的大鱗大馬哈魚(yú)（Oncorhynchus tshawytscha）PIT標(biāo)志保持率可達(dá)99%～100%。

1.3 耳石標(biāo)記

1.3.1 耳石化學(xué)標(biāo)記 耳石化學(xué)標(biāo)記主要是使用與鈣具有親和性的熒光化合物作用于標(biāo)記對(duì)象，使其沉積在耳石上以形成在熒光顯微鏡下可識(shí)別的熒光標(biāo)志[16]。自Douglas等[17]發(fā)現(xiàn)鹽酸四環(huán)素（TC）可沉積在魚(yú)類骨骼和鱗片上，便開(kāi)始了魚(yú)類耳石化學(xué)標(biāo)記的系統(tǒng)研究，化學(xué)標(biāo)記可在魚(yú)類任何生活史包括受精卵階段開(kāi)展，且耳石標(biāo)志永久保存[18]，常用于大規(guī)模標(biāo)記[19]。至今已篩選出可用于標(biāo)記的常用物質(zhì)有土霉素（OTC）、鹽酸四環(huán)素、茜素絡(luò)合物（ALC）、茜素紅S（ARS）、鈣黃綠素等[19]，四環(huán)素類是使用時(shí)間最長(zhǎng)的標(biāo)記物質(zhì)，但標(biāo)記效果卻稍遜于ALC和ARS[20，21]，鈣黃綠素能較好地標(biāo)記很多魚(yú)類，但其使用的安全濃度較小，作用時(shí)間不易掌握[22]。

標(biāo)記途徑有注射、浸泡或投喂含有標(biāo)記物的飼料，研究表明茜素投喂或注射的標(biāo)記效果都不理想[23]，而浸泡標(biāo)記效果明顯[24]，而鈣黃綠素通過(guò)注射的標(biāo)記效果優(yōu)于浸泡[25]。選用何種標(biāo)記物及標(biāo)記手段一般主要根據(jù)標(biāo)記魚(yú)的大小、生活史階段、標(biāo)記數(shù)量及資金預(yù)算等綜合考慮[26]。

1.3.2 耳石熱標(biāo)記 魚(yú)類耳石能準(zhǔn)確記錄生活史中的經(jīng)歷事件，如溫度波動(dòng)、攝食及饑餓、光周期等，通過(guò)閱讀耳石輪紋生成的周期性、寬度及光密度等信息即可推斷歷史背景[27]。耳石熱標(biāo)記是通過(guò)人為短期地對(duì)水溫進(jìn)行調(diào)控以改變耳石上的一個(gè)或多個(gè)生長(zhǎng)輪紋的特征，形成終身可識(shí)別的標(biāo)記[28]。Brothers[29]首先發(fā)現(xiàn)紅點(diǎn)鮭耳石生長(zhǎng)紋特征與水溫變化密切相關(guān)，形成的特殊輪紋可被永久識(shí)別，Bergstedt等[30]對(duì)此進(jìn)行了印證。隨后，耳石熱標(biāo)記在大西洋鮭（Salmo salar）[31]、太平洋q（Oncorhynchus）[32]、胭脂魚(yú)（Myxocyprinus asiaticus）[33]等魚(yú)類上成功應(yīng)用。僅僅通過(guò)人工調(diào)控溫度波動(dòng)就能對(duì)胚胎、仔魚(yú)耳石進(jìn)行有效地大規(guī)模標(biāo)記，方法簡(jiǎn)單，且費(fèi)用低廉。該標(biāo)記技術(shù)已在世界范圍內(nèi)得到廣泛推廣使用[27]。

1.4 微衛(wèi)星DNA標(biāo)記

微衛(wèi)星DNA又稱簡(jiǎn)單重復(fù)序列，是由1～6個(gè)堿基組成的短串聯(lián)重復(fù)序列，其座位高度豐富，變異率高并且散布于整個(gè)真核生物基因組[34]。微衛(wèi)星技術(shù)是近年來(lái)廣泛應(yīng)用的DNA標(biāo)記技術(shù)，利用它制備的DNA指紋圖譜也具有極高的個(gè)體特異性，這些特點(diǎn)使得它尤其適合于親子鑒定和血緣關(guān)系分析方面的應(yīng)用[35]。篩選出多態(tài)性高的微衛(wèi)星位點(diǎn)，并根據(jù)它們的序列設(shè)計(jì)出合適的PCR引物，就可對(duì)物種身份進(jìn)行精準(zhǔn)的無(wú)損鑒定分析。國(guó)內(nèi)學(xué)者已對(duì)鳙（Aristichthys nobilis）[36]、長(zhǎng)薄鰍（Leptobotia elongata）[37]、鱸鯉（Percocypris pingi）[38]、胭脂魚(yú)[39]等魚(yú)類的微衛(wèi)星位點(diǎn)進(jìn)行了篩選，為應(yīng)用微衛(wèi)星標(biāo)記評(píng)估增殖放流效果奠定了基礎(chǔ)[40]。目前的微衛(wèi)星親子鑒定方法主要來(lái)源于對(duì)人類的研究，分析軟件對(duì)常規(guī)二倍體的物種支持率很高，而對(duì)鱸鯉等這樣的四倍體或其他多倍體物種的支持率較低。需要探索新的方法，而且需要降低成本。

2 常用魚(yú)類標(biāo)記技術(shù)的比較

標(biāo)記效果是衡量一種標(biāo)記技術(shù)的重要指標(biāo)，通常選取標(biāo)記對(duì)象的存活率、生長(zhǎng)情況及標(biāo)志保持率等參數(shù)。不同魚(yú)類規(guī)格大小對(duì)標(biāo)記效果影響甚大，因此，選擇合適的標(biāo)記規(guī)格是某種標(biāo)記技術(shù)成功應(yīng)用的前提。相比耳石標(biāo)記和微衛(wèi)星標(biāo)記，掛牌和PIT標(biāo)記主要針對(duì)大規(guī)格魚(yú)種，若對(duì)規(guī)格偏小的魚(yú)類，其存活率、標(biāo)志保持率都將降低，且生長(zhǎng)受抑制[15]，因需要對(duì)標(biāo)記對(duì)象逐尾進(jìn)行標(biāo)記，勞動(dòng)強(qiáng)度大，不宜大規(guī)模標(biāo)記；但二者標(biāo)記檢測(cè)相對(duì)簡(jiǎn)單，都可做到無(wú)損、快速檢測(cè)。耳石標(biāo)記最大的優(yōu)點(diǎn)就是可以大規(guī)模批量處理標(biāo)記樣本，勞動(dòng)強(qiáng)度低且標(biāo)記效果好[19]，但標(biāo)記檢測(cè)需要取出耳石，利用熒光顯微鏡或光學(xué)顯微鏡逐一識(shí)別，工作量大。而對(duì)于微衛(wèi)星標(biāo)記，無(wú)需進(jìn)行任何形式的物理標(biāo)志，對(duì)魚(yú)體沒(méi)有傷害，并且終生存在而不影響魚(yú)類生活史[40]，但親本和子代遺傳信息提取耗時(shí)費(fèi)錢(qián)，專業(yè)門(mén)檻高。表1對(duì)常用標(biāo)記技術(shù)做了一簡(jiǎn)單比較，為標(biāo)記技術(shù)的選擇提供參考。

3 大規(guī)模標(biāo)記技術(shù)研究及應(yīng)用

本文主要以耳石標(biāo)記為例，綜述當(dāng)前大規(guī)模標(biāo)記研究現(xiàn)況。

3.1 標(biāo)記方法的建立

藥品濃度與浸泡時(shí)間是耳石化學(xué)標(biāo)記方法建立的關(guān)鍵參數(shù)，與標(biāo)記效果成正比[24]，通常是以最低死亡率和最好標(biāo)記效果為依據(jù)[22]。研究表明不同魚(yú)類對(duì)藥品的敏感性不一致，藥品使用濃度差異較大，虹鱒（Oncorhynchus mykiss）仔魚(yú)ALC的使用濃度超過(guò)20 mg/L就會(huì)有較高的死亡率[24]，而日本牙鲆ALC使用濃度可達(dá)到300 mg/L[41]。已有研究表明，對(duì)于不同種類的魚(yú)ALC使用濃度范圍為25～800 mg/L[20，42]，一般具體到某種魚(yú)類都需做預(yù)實(shí)驗(yàn)。

熱標(biāo)記可以通過(guò)降溫或升溫而實(shí)現(xiàn)耳石標(biāo)記。一般水溫突然降低2 ℃，持續(xù)4～24 h就能在耳石上產(chǎn)生明顯的暗紋[32，43]，暗紋密度與降溫幅度和低溫持續(xù)時(shí)間高度相關(guān)，溫差變化越大，或低溫持續(xù)時(shí)間越長(zhǎng)，耳石上暗紋的光密度就越大[44]。通過(guò)加熱使水溫高于環(huán)境水溫，期間形成一寬帶低光密度的耳石輪紋，與低環(huán)境水溫下產(chǎn)生的窄帶高光密度的輪紋差異明顯[45]。升溫2.5 ℃即可產(chǎn)生較好的標(biāo)記效果[27]，Bergstedt等[46]報(bào)道12 h熱周期下可形成標(biāo)記，但Volk等[27]認(rèn)為小于24 h熱周期的標(biāo)記效果都不好，延長(zhǎng)熱周期至48 h能產(chǎn)生非常清楚的亮帶。

3.2 在人工增殖放流中的應(yīng)用

耳石標(biāo)記能一次性大規(guī)模標(biāo)記仔稚魚(yú)及受精卵，在人工增殖放流中的應(yīng)用前景廣闊。但不管是耳石化學(xué)標(biāo)記或是熱標(biāo)記，在放流標(biāo)記前，都需要在實(shí)驗(yàn)室建立標(biāo)記方法，明確關(guān)鍵標(biāo)記參數(shù)。Baer等[47]用150 mg/L的ARS成功標(biāo)記放流褐鱒1萬(wàn)尾，Caraguel等[48]也用150 mg/L的ARS標(biāo)記放流歐洲鰻鱺（Anguilla anguilla）36萬(wàn)尾，7個(gè)月后成功回捕檢驗(yàn)了放流效果。相比耳石化學(xué)標(biāo)記，熱標(biāo)記在國(guó)外增殖放流中應(yīng)用較多，Munk等[49]報(bào)道在1988～1998年期間，北太平洋沿岸國(guó)家熱標(biāo)記放流大量鮭鱒魚(yú)苗，俄羅斯熱標(biāo)記放流約880萬(wàn)尾，加拿大標(biāo)記約1.2億尾，而美國(guó)標(biāo)記超過(guò)60億尾。楊君興等[1]報(bào)道在2007～2009年間，中國(guó)在近海海域和內(nèi)陸重要江河湖泊放流各類重要水生生苗種636.6億尾（粒），2010年共放流苗種289.4億尾，但標(biāo)志放流個(gè)體比例少。

近些年，國(guó)內(nèi)科研院所在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)也探索建立了大規(guī)模標(biāo)記技術(shù)，但推廣應(yīng)用至大型增殖放流實(shí)踐中的力度不夠，2012年雅礱江流域水電開(kāi)發(fā)有限公司委托四川大學(xué)在錦屏?官地水電站魚(yú)類增殖放流站開(kāi)展標(biāo)記放流技術(shù)研究及應(yīng)用，2013～2014年間應(yīng)用熱標(biāo)記技術(shù)成功標(biāo)記出膜15 d后的短須裂腹魚(yú)（Schizothorax wangchiachii）仔魚(yú)約21萬(wàn)尾，占當(dāng)年放流魚(yú)苗總量的1/4；2015年使用20～40 mg/L的茜素紅S溶液先后分7批，成功浸泡標(biāo)記短須裂腹魚(yú)苗約60萬(wàn)尾，占放流魚(yú)苗總量的50%。

4 存在的問(wèn)題及建議

魚(yú)類標(biāo)記技術(shù)發(fā)展至今已有幾十種，有簡(jiǎn)單的物理標(biāo)記，也有復(fù)雜的分子標(biāo)記。一種理想的標(biāo)記技術(shù)至少應(yīng)具備以下特點(diǎn)：①標(biāo)記后魚(yú)苗死亡率低；②標(biāo)記保留時(shí)間長(zhǎng)；③標(biāo)記易識(shí)別；④能大規(guī)模標(biāo)記且勞動(dòng)強(qiáng)度低；⑤標(biāo)記費(fèi)用低。但目前所有的標(biāo)記技術(shù)在使用中都存在一定的缺陷，如掛牌、切鰭等傳統(tǒng)標(biāo)記技術(shù)最大的缺陷就是對(duì)魚(yú)造成機(jī)械性損傷，勞動(dòng)強(qiáng)度大，不宜大規(guī)模標(biāo)記；而耳石標(biāo)記或分子標(biāo)記等大規(guī)模標(biāo)記手段的標(biāo)志又不易直接識(shí)別；分子標(biāo)記價(jià)格較為昂貴，通常需要專業(yè)的科研人員才能實(shí)施，不利于大規(guī)模的推廣。尋找一種能夠從外觀上快速識(shí)別標(biāo)記個(gè)體，又能夠包含豐富信息的標(biāo)記技術(shù)，同時(shí)花費(fèi)低廉，是魚(yú)類標(biāo)記技術(shù)研究的目標(biāo)，但事實(shí)上卻困難重重。因而，利用現(xiàn)有標(biāo)記手段，針對(duì)不同的放流種類和研究目的，選擇合適的標(biāo)記技術(shù)才是切實(shí)可行的。

對(duì)于繁殖親本或中華鱘等國(guó)家級(jí)珍稀魚(yú)類時(shí)，可以使用PIT標(biāo)簽，便于追蹤和R別，能對(duì)個(gè)體進(jìn)行精細(xì)化管理。而標(biāo)記數(shù)十萬(wàn)的放流個(gè)體，則應(yīng)重點(diǎn)考慮適合大規(guī)模標(biāo)記的方法。短期研究較大規(guī)格放流魚(yú)苗的生長(zhǎng)情況，則可以在魚(yú)體皮下注射熒光染料，直接肉眼辨識(shí)即可。

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雷人標(biāo)語(yǔ)范文第5篇

【關(guān)鍵詞】 白細(xì)胞介素6；髓樣細(xì)胞白血病1；宮頸癌；凋亡

The correlation and clinical significance of interleukin6 and　myeloid cell leukelia1 expression in human cervical cancer

ABSTRACT: Objective To investigate the expression and correlation of interleukin6 (IL6)， myeloid cell leukelia1 (MCL1) protein and MCL1mRNA in cervical cancer， cervical intraepithelial neoplasia (CIN) and normal cervix. Methods Immunohistochemistry was used to detect the expression of IL6 and MCL1 protein in 30 samples of cervical squamous cell carcinoma， 10 samples of CIN and 10 samples of normal cervix， and RTPCR was used to detect the expression of MCL1mRNA. Results The protein levels of IL6 and MCL1 were significantly higher in cervical cancer tissues than in normal cervix and CIN tissues (P

KEY WORDS: interleukin6; myeloid cell leukelia1; cervical cancer; apoptosis

白細(xì)胞介素6(interleukin6)是具有多種生物活性的多能細(xì)胞因子，同時(shí)也是女性生殖道感染中重要的促炎癥因子，其對(duì)宮頸癌細(xì)胞的增殖和血管生成有重要影響[1]。體外研究表明，IL6可能還存在一定的抗凋亡作用，即通過(guò)改變BCL2家族蛋白的水平來(lái)調(diào)節(jié)凋亡[2]。髓樣細(xì)胞白血病1(myeloid cell leukelia1)在人類宮頸癌組織中的表達(dá)是BCL2家族抗凋亡蛋白中最豐富的[3]。目前國(guó)內(nèi)關(guān)于宮頸癌細(xì)胞中IL6與MCL1的相關(guān)性尚未見(jiàn)報(bào)道。本研究通過(guò)測(cè)定宮頸癌及癌前病變患者宮頸組織中IL6和MCL1蛋白及MCL1mRNA水平，探討IL6在宮頸癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的作用及與細(xì)胞凋亡的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象 選擇2005年10月至2006年3月在西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院手術(shù)治療的宮頸鱗癌患者30例，術(shù)前均無(wú)化療、放療及其他治療史，不合并其他炎癥性疾病?；颊吣挲g為32-72歲，中位數(shù)年齡44歲。選擇同期宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)及正常宮頸組織各10例作為對(duì)照。CIN患者年齡37-50歲，中位數(shù)年齡46.5歲；正常對(duì)照患者年齡29-53歲，中位數(shù)年齡47.5歲。所有病例均經(jīng)病理檢查確診。所有標(biāo)本取材兩份，一份福爾馬林固定行免疫組化分析，一份-80℃保存待測(cè)。

1.2 方法

1.2.1 免疫組化SABC法檢測(cè)IL6和MCL1蛋白表達(dá) 10%(體積分?jǐn)?shù))甲醛溶液固定標(biāo)本，石蠟包埋后制成7μm連續(xù)切片，采用免疫組化染色。鼠抗人IL6單克隆抗體購(gòu)自德國(guó)AppliChem公司，鼠抗人MCL1單克隆抗體購(gòu)自福建邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)公司，操作嚴(yán)格按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。以PBS代替一抗做陰性對(duì)照組，用已知陽(yáng)性組織作陽(yáng)性對(duì)照。

結(jié)果判斷：瘤細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒判斷為陽(yáng)性。運(yùn)用灰度分析系統(tǒng)將陽(yáng)性細(xì)胞染色強(qiáng)弱轉(zhuǎn)化為灰度值，灰度值的大小與染色強(qiáng)弱成反比。

1.2.2 RTPCR法檢測(cè)MCL1mRNA的表達(dá) 取-80℃保存標(biāo)本，Trizol抽提總RNA，15μL逆轉(zhuǎn)錄體系中加入2.0μg總RNA，用cDNA合成試劑盒逆轉(zhuǎn)錄。 以獲得的cDNA為模板，在25μL體系中行PCR。MCL1上游引物為5′CACGAGA CGGTCTTCCAAGGCATGCT3′，下游引物為5′CTAGGTTGC TAGGGTGCAACTCTAGA3′。內(nèi)參對(duì)照βactin上游引物為5′AGCGGGAAATTGTGCATG3′，下游引物為5′CAGGGTACCTGGTGGTGC3′。PCR反應(yīng)條件為95℃預(yù)變性3min，95℃變性30s57.4℃退火30s72℃延伸30s，共30個(gè)循環(huán)72℃延長(zhǎng)10min4℃靜置30min。

結(jié)果判斷：電泳條帶用BioRad凝膠成像系統(tǒng)拍照，并用Dophin1D凝膠分析軟件分析。結(jié)果用特異基因和βactin電泳帶吸光度的比值表示。

1.2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 數(shù)據(jù)以±s表示，采用SPSS13.0軟件進(jìn)行一維方差分析、Pearson相關(guān)分析與顯著性檢驗(yàn)，以P

2 結(jié)果

2.1 宮頸組織中IL6、MCL1蛋白的表達(dá) 宮頸癌組織中，IL6蛋白主要表達(dá)于癌細(xì)胞的細(xì)胞膜和(或)細(xì)胞質(zhì)(圖1A)，MCL1蛋白呈彌漫性、片狀、灶狀分布，主要表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)及細(xì)胞核(圖1B)；CIN組織中IL6蛋白、MCL1蛋白均表達(dá)于鄰近基底層的上皮細(xì)胞；正常宮頸組織中，IL6蛋白主要表達(dá)于上皮基底層細(xì)胞和上皮細(xì)胞的細(xì)胞膜和(或)細(xì)胞質(zhì)；MCL1蛋白在正常鱗狀上皮的基底層、棘細(xì)胞層呈散在性分布。IL6蛋白在鱗癌組的表達(dá)高于CIN組(F=8.68， P

表1 宮頸癌、CIN和正常宮頸組織中IL6、MCL1蛋白表達(dá)的比較（略）

Table 1 Expression of IL6 and MCL1 protein in cervical cancer， CIN and normal cervix

CIN: cervical intraepithelial neoplasia; *P

圖1 IL6(A)、MCL1(B)在宮頸癌組織中的表達(dá)（略）

Fig.1 Expression of IL6(A) and MCL1(B) in cervical cancer (SABC×100)

2.2 宮頸組織中MCL1mRNA的表達(dá) MCL1 mRNA在宮頸癌組中的表達(dá)(2.02±0.72)高于正常組(0.73±0.02)(F=20.34， P

2.3 IL6、MCL1蛋白表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系 IL6蛋白的表達(dá)在宮頸癌病理學(xué)1級(jí)與2級(jí)和1級(jí)與3級(jí)之間有顯著性差異(P

2.4 宮頸組織中IL6與MCL1蛋白及MCL1蛋白與MCL1mRNA表達(dá)水平的相關(guān)性 直線相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)，隨著IL6蛋白水平的增高，MCL1蛋白水平也逐漸增高，呈正相關(guān) (r=0.566， P

圖2 RTPCR檢測(cè)MCL1及βactin mRNA的表達(dá)（略）

Fig.2 Expression of MCL1 and βactin mRNA by RTPCR

1， 4， 5， 6， 7， 9， 11: cervical cancer; 2， 3: CIN; 8， 10，12: normal cervix

表2 臨床病理參數(shù)與宮頸癌組織中IL6及MCL1水平的比較（略）

Fig.2 Comparison of IL6 and MCL1 protein expression in different clinical and pathological parameters in cervical cancer

*P

圖3 IL6與MCL1蛋白表達(dá)相關(guān)性的散點(diǎn)圖（略）

Fig.3 Correlation of IL6 and MCL1 protein expression

3 討論

宮頸癌的發(fā)生大多歸因于致瘤型人瘤病毒(HPV)的感染，慢性抗原暴露可能引起一個(gè)連續(xù)性的循環(huán)，即誘導(dǎo)前炎癥細(xì)胞因子及Th1細(xì)胞因子上調(diào)COX2，從而導(dǎo)致慢性Th2細(xì)胞因子的產(chǎn)生和前炎癥反應(yīng)中細(xì)胞免疫應(yīng)答的下調(diào)，最終導(dǎo)致一個(gè)體液免疫應(yīng)答占優(yōu)勢(shì)的環(huán)境[46]。然而，病毒的清除卻依靠細(xì)胞免疫應(yīng)答，這就造成腫瘤逃逸免疫監(jiān)視而生長(zhǎng)，并向其他組織部位轉(zhuǎn)移及種植。因此，提示我們?cè)诼匝装Y向?qū)m頸癌發(fā)展的過(guò)程中免疫逃逸可能是必要的誘發(fā)因素。

IL6是Th2細(xì)胞因子，是女性生殖道感染中重要的促炎癥因子，可由多種淋巴細(xì)胞及非淋巴細(xì)胞產(chǎn)生。在感染后引發(fā)的宿主防御反應(yīng)中，這些細(xì)胞通過(guò)自分泌及旁分泌機(jī)制產(chǎn)生IL6，在局部發(fā)揮作用[78]。目前已明確IL6在宮頸癌中可以通過(guò)促增殖和血管生成而表現(xiàn)為促生長(zhǎng)的特性[1]。Tartour等[9]用PCR技術(shù)證實(shí)了正常宮頸、CIN和宮頸癌組織中都有IL6基因的表達(dá)。

MCL1基因是在研究人髓樣白血病細(xì)胞系ML1用佛波酯誘導(dǎo)后，沿單核/巨噬細(xì)胞途徑分化過(guò)程中，作為早期誘導(dǎo)基因被首次發(fā)現(xiàn)的。MCL1在防止細(xì)胞凋亡方面的作用首先在中國(guó)田鼠的卵巢細(xì)胞中得以證實(shí)。Crawford等[3，10]在對(duì)人類宮頸癌組織中所含的抗凋亡蛋白的分析中得出，MCL1是在人類宮頸癌組織中數(shù)量最豐富的抗凋亡蛋白，其水平顯著高于其他BCL2家族成員，在57%的原發(fā)宮頸癌和75%的復(fù)發(fā)宮頸癌中表達(dá)陽(yáng)性。

Kawano和Nakashima等[1112]的研究發(fā)現(xiàn)，IL6可作為凋亡誘導(dǎo)物或抑制劑，具體作用依賴于細(xì)胞類型。例如在臨床多發(fā)性骨髓瘤組織和細(xì)胞系中都發(fā)現(xiàn)IL6能夠誘導(dǎo)抗凋亡基因BCLxL和MCL1上調(diào)；在非吸煙女性的肺癌組織中發(fā)現(xiàn)IL6和MCL1呈現(xiàn)共表達(dá)，且它們的表達(dá)與是否存在HPV 16/18感染密切相關(guān)。Wei等[2]在6個(gè)宮頸癌組織中和5個(gè)獨(dú)立的宮頸癌細(xì)胞系中分析IL6與BCL2家族蛋白水平，結(jié)果顯示，無(wú)論是在臨床的腫瘤標(biāo)本中還是在體外細(xì)胞系中都觀察到IL6和MCL1呈現(xiàn)高度的協(xié)同表達(dá)，但在正常宮頸組織中卻并非如此。

本研究應(yīng)用免疫組化法檢測(cè)宮頸鱗癌組織中IL6與MCL1蛋白的表達(dá)，并與CIN及正常宮頸組織進(jìn)行對(duì)照研究，發(fā)現(xiàn)3組中均有IL6與MCL1蛋白的表達(dá)。宮頸癌和CIN中IL6與MCL1蛋白的表達(dá)明顯高于正常宮頸，且MCL1蛋白在宮頸癌中的表達(dá)高于CIN。這與Tartour、Crawford等[910]的研究結(jié)果相一致。提示IL6與MCL1蛋白的異常表達(dá)與CIN的進(jìn)展及早期浸潤(rùn)癌的形成有關(guān)，為IL6促進(jìn)宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展提供了證據(jù)。MCL1蛋白在由正常組織向?qū)m頸癌過(guò)渡中所表現(xiàn)出的顯著遞增表達(dá)，也進(jìn)一步提示了其抗凋亡及促生長(zhǎng)的作用。研究還發(fā)現(xiàn)，IL6蛋白在宮頸癌血管周圍呈集中分布，這可能是因?yàn)槟[瘤的低氧環(huán)境誘發(fā)IL6在血管內(nèi)皮細(xì)胞的表達(dá)并促進(jìn)腫瘤血管的生成，這與Wei等[1，1314]的研究相符。在IL6、MCL1蛋白表達(dá)與宮頸癌臨床病理特征關(guān)系的研究中顯示：IL6在低分化鱗癌中的表達(dá)明顯高于高分化鱗癌，檢測(cè)這一指標(biāo)可能對(duì)預(yù)測(cè)轉(zhuǎn)移潛能及評(píng)估預(yù)后具有一定的意義。

聯(lián)合分析IL6與MCL1的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)在宮頸癌、CIN及正常宮頸組織中，隨著癌細(xì)胞、基底層細(xì)胞及上皮細(xì)胞中IL6水平的增高，MCL1水平逐漸增高，呈顯著正相關(guān)，提示宮頸癌及CIN組織中IL6的過(guò)表達(dá)使凋亡受到抑制。用RTPCR法檢測(cè)MCL1mRNA后發(fā)現(xiàn)，隨著MCL1蛋白水平的增高，MCL1mRNA水平也逐漸增高，呈顯著正相關(guān)，提示MCL1基因可能從mRNA水平就已經(jīng)受到了IL6的調(diào)控。隨著IL6的增加，細(xì)胞抗凋亡能力增強(qiáng)，抵抗免疫細(xì)胞攻擊的能力增強(qiáng)，從而使腫瘤發(fā)生前的細(xì)胞或腫瘤細(xì)胞能夠繼續(xù)生長(zhǎng)。因此，IL6介導(dǎo)的MCL1依賴的抗凋亡效應(yīng)可能是人類宮頸致癌作用的一個(gè)重要機(jī)制。Wei等[2]的研究表明，在宮頸癌C33A細(xì)胞系中，IL6介導(dǎo)的MCL1上調(diào)所依賴的途徑是PI3K/Akt，這與人類肝癌和前列腺癌中IL6介導(dǎo)的MCL1上調(diào)所依賴的途徑是一致的。這一途徑能夠影響多重細(xì)胞的進(jìn)程，包括增加細(xì)胞增殖、抑制凋亡，并且最終利于腫瘤發(fā)生。

綜合研究結(jié)果可以得出：IL6在宮頸癌發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中不僅可以促增殖和血管生成，還能調(diào)節(jié)細(xì)胞的凋亡。這一發(fā)現(xiàn)有助于對(duì)早期癌前病變的篩查，并為宮頸癌的治療提供了新的思路。

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