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關(guān)鍵詞：

急性白血病是我國常見的造血系統(tǒng)惡性疾病。其病因及發(fā)病機(jī)理還不完全清楚，病毒、遺傳因素及染色體異常與它的發(fā)生都有關(guān)系。現(xiàn)已證實(shí)，MTS1/P16基因在人類多種惡性腫瘤中存在著不同形式的改變［1,2］，但有關(guān)MTS1/P16基因在急性白血病中的國內(nèi)報(bào)道少［3］。我們采用差別PCR技術(shù)對MTS1/P16基因在急性白血病中純合缺失進(jìn)行檢測，以了解MTS1/P16基因缺失與急性白血病的關(guān)系。

1材料與

1.1標(biāo)本來源30例急性淋巴細(xì)胞白血病(ALL)，男19例，女11例，年齡2～70歲，中位年齡19歲。43例急性非淋巴細(xì)胞性白血病(ANLL)，男24例，女19例，年齡2.5～73歲，中位年齡34歲。對照組15例，為非惡性血液病病人(缺鐵性貧血7例，血小板減少性紫癜8例)，均為我院住院病人，診斷標(biāo)準(zhǔn)均符合FAB法，前抽骨髓1～2ml，以用于DNA提取。

1.2DNA提取參照《分子克隆實(shí)驗(yàn)指南》［4］提取高分子量DNA，用TE(pH8.0)溶解，紫外分光光度測其OD值，調(diào)整濃度至50ng/ml，以備PCR擴(kuò)增。

1.3引物設(shè)計(jì)根據(jù)已知MTS1/P16基因序列，在第2外顯子的兩側(cè)設(shè)計(jì)1對擴(kuò)增引物，PCR擴(kuò)增物為480bp，引物序列如下：PS1:5′-GGAAATTGGAAACTGGAAGC-3′;PS2:5′-TCTGACCTTTGGAAGCTCT-3′。選用DMDExon51引物做內(nèi)對照，其PCR擴(kuò)增產(chǎn)物為388bp，引物序列如下：PS1:5′-GAAATTGGCTCTTTAGCTTGTGTTTC-3′；PS2:5′-GGAGAGTAAAGTGATTGGTGGAAAATC-3′。上述引物均由院上海生化所合成。

1.4PCR擴(kuò)增PCR反應(yīng)混合液含10×PCRBuffer,200μmol/LdNTP，1μmol/Lprimer,200ng模板DNA，TaqDNA2.5U加H2O至終體積50μl，在DNA擴(kuò)增儀上進(jìn)行如下循環(huán)：95℃預(yù)變性5.0min，95℃，1.0min；58℃，1.0min；72℃，1.5min；30個(gè)循環(huán)。取5μlPCR產(chǎn)物在2%瓊脂糖凝膠(加EB0.5μg/ml)上電泳(TaqDNA聚合酶為美國LifeTechnologies產(chǎn)品)。

2結(jié)果

30例ALL有10例MTS1/P16Exon2純合缺失，頻率為33.3%(10/30)；43例ANLL中有6例MTS1/P16Exon2純合缺失，頻率為14.0%(6/43)，15例對照無MTS1/P16Exon2純合缺失。

3討論

MTS1/P16是定位于人類染色體9P21的多腫瘤抑制基因［2,3］，編碼一分子量為16kD的核磷酸蛋白，P16蛋白可直接作用于細(xì)胞周期蛋白依賴激酶(CDK)4/6，周期素(cyclin)D和RB基因編碼蛋白PRb的反饋通路，通過調(diào)節(jié)PRb活性，抑制細(xì)胞從G1→S期轉(zhuǎn)變，防止細(xì)胞增殖［5,6］。MTS1/P16基因在人類多種原發(fā)性腫瘤和細(xì)胞系中主要表現(xiàn)為純合缺失或突變失活。等位基因純合缺失在白血病細(xì)胞系中達(dá)25%～65%［1,7］。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，30例ALLMTS1/P16純合缺失率為33.3%(10/30)，43例ANLLMTS1/P16純合缺失率為14.0%(6/43)。報(bào)道造血系統(tǒng)惡性腫瘤中MTS1/P16基因缺失和突變的檢出率為5.56%～43.60%，平均13.81%，其中以急性淋巴細(xì)胞白血病(ALL)檢出率最高，平均為29.80%，而在急性非淋巴細(xì)胞白血病(ANLL)，慢性粒細(xì)胞白血病(CML)和淋巴瘤患者檢出率極低［8］。Hebert報(bào)道55例ALL中22例有MTS1/P16基因缺失，占44%［9］。Ogawa報(bào)道1組134例AML，僅有2例有MTS1/P16基因缺失［10］。

MTS1/P16基因在不同組織的腫瘤標(biāo)本或來源于不同地區(qū)同一種組織的腫瘤標(biāo)本中，其缺失和突變頻率也不同［11］，這一現(xiàn)象提示MTS1/P16基因改變在不同組織的癌變過程中的作用有所不同。造成這種差異的原因尚不清楚，但可能與各臟器組織接受致癌物的種類，劑量以及對致癌物的代謝能力有關(guān)。本文結(jié)果，MTS1/P16基因在ALL中的高頻率缺失及在ANLL中的改變，提示MTS1/P16基因缺失與急性白血病的發(fā)生可能有關(guān)。

文獻(xiàn)：

［1］NoboriT,MiuraK,WuDJetal.Deletionsofthecyclindependentkinase-4inhibitorgeneinmultiplehumancancers.Nature,1994；368:753

［2］ArapW,NishikamaK,FurnariFBetal.ReplacementoftheP16/CDKN2genesuppresshumangliomcellgrowth.CancerRes,1995；55:1351

［3］劉明利，樓方定，郭山春etal.淋巴細(xì)胞惡性腫瘤P16基因純合缺失和突變的研究.實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志，1998;6(1):49

［4］J.薩姆布魯克,E.F弗里奇,T.曼尼阿蒂斯著.金冬雁譯.分子克隆實(shí)驗(yàn)指南.第2版.北京：出版社,1996：465-467

［5］SerranoM,HannonGJ,BeachD.Anewregulatorymotifincell-cyclecontrolcausingspecificinhibitionofcyclinD/CDK4.Nature，1993；366:704

［6］LiY,NicholMA,ShagJWetal.Transcriptionalrepressionofthed-typecyclin-dependentkinaseinhibitorP16bytheretinoblastomasusceptibilitygeneproductPRb.CancerRes,1994；54:6078

［7］KambA,GruisNA,FeldhausJWetal.Acellcycleregulatorpotentiallyinvolvedingenesisofmanytumortypes.Science，1994；264:436

［8］StranksG,HeightSE,MitchellPetal.DeletionsandrearrangementofCDNKN2inlymphoidmalignancy.Blood，1995；85:893

［9］HebertJ,CayueleJM,BerkeleyJetal.CandidatetumorsuppressorgenesMTS1(P16INK4A),andMTS2(P15INK4B)displayfrequenthomozygousdeletionsinprimarycellfromTbutnotfromB-celllineageacutelymphoblasticleukemias.Blood,1994；84:4038

［10］OgawaS,HangaishiA,MiyawakiSetal.Lossofthecyclindependentkinase4-inhibitor(P16:MTS1)geneisfrequentinandhighlyspecifictolymphoidtumousinprimaryhumanhematopoieticmalignancies.Blood,1995；86:1548

［11］傅松濱.多重腫瘤抑制基因MTS1/P16CDK4I基因與細(xì)胞周期調(diào)節(jié).國外醫(yī)學(xué).遺傳學(xué)分冊,1996；19(1)：6