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【摘要】目的觀察丹參酮ⅡA對小鼠腦缺血、腦缺血再灌注損傷的保護作用。方法采用小鼠斷頭模型、小鼠腦卒中模型、小鼠腦缺血再灌注模型，觀察丹參酮ⅡA注射乳劑對小鼠斷頭后存活時間、喘氣次數(shù)，小鼠腦卒中后的神經(jīng)行為，小鼠腦缺血再灌注后腦內(nèi)SOD活性、MDA含量的影響。結(jié)果丹參酮ⅡA能延長小鼠斷頭后的存活時間、增加斷頭后的喘氣次數(shù)，改善腦卒中小鼠的神經(jīng)行為，提高腦缺血再灌注損傷后小鼠腦組織中SOD酶活性,降低MDA含量。結(jié)論丹參酮ⅡA注射乳劑對小鼠腦缺血及腦缺血再灌注損傷具有保護作用。

【關(guān)鍵詞】丹參酮ⅡA注射乳劑；腦缺血；腦缺血再灌注；自由基

Abstract：ObjectiveToinvestigatetheprotectiveeffectofTanshinoneⅡAagainstbraininjuryinmiceinducedbycerebralischemiaorcerebralischemia-reperfusion.MethodsMicewerepretreatedwithTanshinoneⅡAatthedoseof7.8,3.9,1.9mg/kgi.v.respectively.Themodelsofmicecerebralischemiaandcerebralischemia-reperfusionweremade.Thesurvivaltime,gaspingtimebydecapitationandbehaviorwereevaluated.TheSODactivityandMDAcontentweremeasured.ResultsTanshinoneⅡAcouldsignificantlyincreasethesurvivaltimeandgaspingtime,improvethebehaviorofmice.TanshinoneⅡAcouldalsoenhancethesuperoxidedismutase(SOD)activityandreducethemalonyldialdehyde(MDA)contentinmicebraintissueatthesametime.ConclusionTanshinoneⅡAhasprotectiveeffectagainstbraindamageinducedbycerebralischemiaandcerebralischemia-reperfusioninmice.

Keywords:TanshinoneⅡAemulsion;cerebralischemia;cerebralischemia-reperfusion;freeradical

丹參酮（tanshinone）是丹參的有效活性成分，包括丹參酮Ⅰ、丹參酮ⅡA、丹參酮ⅡB等脂溶性成分和丹酚酸甲、丹酚酸乙、丹參素等水溶性成分，其中丹參酮ⅡA為丹參酮中含量最高的活性成分［1］。為了解決丹參酮ⅡA不溶于水，成鹽后注射給藥不易透過血腦屏障，將丹參酮ⅡA做成微乳制劑，在不改變其理化性質(zhì)的基礎(chǔ)上，保持其原有的脂溶性和穿過脂雙層生物膜、透過血腦屏障的能力。本文利用小鼠腦缺血及腦缺血再灌注模型，觀察丹參酮ⅡA對腦缺血的保護作用，探討其作用機制。

1材料

1.1藥品與試劑

受試品：丹參酮ⅡA注射乳劑（0.3mg·mL-1，批號200606，北京中?？悼萍奸_發(fā)公司提供，臨用前用5％葡萄糖注射液稀釋至所需濃度），MDA、SOD試劑盒（南京建成生物工程研究所）。

1.2儀器

CL770全自動生化分析儀，日本島津公司生產(chǎn)。

1.3動物

昆明種小鼠，雌雄各半，體質(zhì)量18～24g，中國醫(yī)科大學第二臨床學院醫(yī)學試驗動物中心提供，實驗動物生產(chǎn)許可證號SCXK［遼］2003-0013號。

1.4統(tǒng)計方法

所有實驗數(shù)據(jù)均以±s表示，采用SPSS11.0統(tǒng)計軟件進行方差分析（onewayANOVA），組間比較采用LSD檢驗,以P<0.05為差異有顯著性。

2方法

2.1小鼠斷頭喘氣模型［2］取體質(zhì)量18～22g的昆明種小鼠50只，隨機分為5組，每組10只，雌雄各半。實驗組分別尾靜脈丹參酮ⅡA注射乳劑7.8、3.9、1.9mg/kg；陽性對照組尾靜脈注射丹參酮ⅡA磺酸鈉注射液5.2mg/kg；空白對照組尾靜脈注射等容量的5％葡萄糖注射液20mL/kg。給藥10min后，迅速從小鼠雙耳后頸部斷頭，觀察小鼠斷頭喘氣的時間及喘氣次數(shù)，實驗結(jié)果進行LSD檢驗。

2.2小鼠腦卒中模型［3］

取體質(zhì)量22～24g的雄性昆明種小鼠50只，分組、給藥同實驗“2.1”。給藥后10min小鼠用乙醚淺麻醉，分離兩側(cè)頸總動脈及迷走神經(jīng)，左側(cè)頸總動脈連同迷走神經(jīng)下置一根直徑為0.2mm的細鋼絲，結(jié)扎后將鋼絲抽出，右側(cè)頸總動脈及迷走神經(jīng)完全結(jié)扎。術(shù)后按下述指標觀察缺血1.5h內(nèi)卒中指數(shù)，每0.5小時記錄1次，并計算3次分數(shù)總和。評分標準：

（1）毛蓬亂豎起，動作緩慢或活動減少，觸耳反應(yīng)加強，眼瞼下垂，腦卒中指數(shù)各1分，總計4分；

（2）頭翹起，眼球固定，后肢向外向后伸展，轉(zhuǎn)圈，抽搐或痙攣，腦卒中指數(shù)各3分，總計15分；

（3）昏迷，腦卒中指數(shù)為6分。

2.3小鼠腦缺血再灌注模型［4］

取體質(zhì)量22～24g的雄性昆明種小鼠60只，隨機分6組，每組10只，實驗組與陽性對照組分組與給藥劑量同實驗“2.1”，假模型組及模型組尾靜脈注射等容量的5％葡萄糖注射液20mL/kg。給藥后10min，各組小鼠用乙醚麻醉，分離兩側(cè)頸總動脈并結(jié)扎，導致腦缺血，結(jié)扎20min后松開，恢復(fù)頸總動脈血流，造成缺血再灌，小鼠手術(shù)后縫合并繼續(xù)飼養(yǎng)。連續(xù)給藥3d，每天1次。假模型組只分離雙側(cè)頸總動脈而不結(jié)扎。末次給藥后30min將各組小鼠處死，取腦，試劑盒測定MDA的含量及SOD酶活性。

3結(jié)果

3.1丹參酮ⅡA注射乳劑對小鼠斷頭喘氣時間及次數(shù)的影響

丹參酮ⅡA注射乳劑7.8、3.9mg/kg可以顯著延長小鼠斷頭后的存活時間，增加喘氣次數(shù)，與空白對照組比較差異顯著（P<0.05,P<0.01）,見表1。

3.2丹參酮ⅡA注射乳劑對缺血小鼠腦卒中指數(shù)的影響

由表2可見，小鼠腦卒中后腦卒中指數(shù)明顯增加；丹參酮ⅡA預(yù)防給藥后，小鼠腦卒中指數(shù)明顯降低，丹參酮各劑量組腦卒中指數(shù)與模型組比較差異均有顯著性（P<0.05,P<0.01）。

表1丹參酮ⅡA注射乳劑對小鼠斷頭喘氣時間及次數(shù)的影響（略）

Tab.1TheeffectofTanshinoneⅡAemulsiononsurvivaltimeandgaspingtimebydecapitationinmice

與5%葡萄糖組比較：*P<0.05;**P<0.01

表2丹參酮ⅡA注射乳劑對腦缺血小鼠腦卒中指數(shù)的影響（略）

Tab.2TheeffectofTanshinoneⅡAemulsiononstrokeindexinmicesubjectedtocerebralischemia

與模型組比較：*P<0.05;**P<0.01

3.3丹參酮ⅡA注射乳劑對腦缺血再灌注損傷小鼠腦內(nèi)SOD活性及MDA含量的影響

由表3可見，小鼠在腦缺血再灌注后，腦組織SOD活性明顯下降，MDA含量顯著升高，模型組與假手術(shù)組比較差異顯著（P<0.01）。與模型組比較，丹參酮ⅡA注射乳劑7.8、3.9mg/kg的腦組織SOD活性顯著上升（P<0.05,P<0.01），MDA含量極顯著下降（P<0.01）。提示丹參酮ⅡA注射乳劑能使腦缺血再灌注小鼠的腦組織過氧化程度受到明顯抑制，提高機體清除自由基的能力。

表3丹參酮ⅡA注射乳劑對缺血再灌注小鼠腦SOD和MDA的影響（略）

Tab.3TheeffectofTanshinoneⅡAemulsiononMDAcontentandSODactivityinmicesubjectedtocerebralischemia/reperfusion

與模型組比較：*P<0.05;**P<0.01

4討論

當腦缺血發(fā)生時，腦微血管系統(tǒng)中存在的谷胱甘肽-谷胱甘肽還原酶自由基清除系統(tǒng)的含量下降［5］，再灌注時則導致微血管周圍有大量自由基產(chǎn)生。氧自由基則會損傷血腦屏障，促進腦水腫的形成、血管內(nèi)皮黏附分子的表達以及白細胞和血小板與內(nèi)皮的黏附，加重再灌注后腦微循環(huán)障礙［6］，因此自由基損傷也是防治腦缺血再灌注損傷的機理之一。MDA是自由基與生物膜不飽和脂肪酸發(fā)生脂質(zhì)過氧化的產(chǎn)物，它的含量反映氧自由基的水平及脂質(zhì)過氧化的程度。此外，MDA可與核酸及蛋白質(zhì)發(fā)生交聯(lián)，使之受損。因此，MDA不僅是細胞損傷的代謝產(chǎn)物，而且也是導致細胞損傷的機制之一。SOD是一種金屬酶，此酶可以催化超氧自由基發(fā)生岐化反應(yīng)，能夠清除氧自由基，保護生物膜免受自由基的攻擊損害。

本次試驗采用小鼠斷頭、小鼠腦卒中及小鼠腦缺血再灌注模型，研究丹參酮ⅡA注射乳劑對腦缺血及腦缺血再灌注損傷的保護作用。試驗結(jié)果表明，丹參酮ⅡA注射乳劑可以升高腦組織內(nèi)SOD酶的活力，降低MDA含量，延長小鼠斷頭后的存活時間、增加喘氣次數(shù)，改善腦卒中小鼠的神經(jīng)行為。由此可見，丹參酮ⅡA注射乳劑對腦缺血及腦缺血再灌注損傷具有明顯的保護作用，該作用的產(chǎn)生可能與其抑制脂質(zhì)過氧化反應(yīng)有關(guān)。

【參考文獻】

［1］華守明，管耘園，金恒，等.復(fù)方丹參對血漿內(nèi)皮素和一氧化氮濃度的影響［J］.中國臨床藥理學與治療學，2000，5：363-364.

［2］張忠華，朱萱萱，陳德芝，等.腦血通顆粒對腦缺血的試驗研究［J］.時珍國醫(yī)國藥，2003，14（12）：12-13.

［3］馮亦璞.小鼠腦缺血后的能量代謝改變和藥物的作用［J］.藥學學報，1989，24（2）：89.

［4］王軍，張薇，王玉升，等.生姜水提物對腦缺血再灌注損傷的保護作用［J］.中醫(yī)藥臨床雜志，2007，19（1）：23-24.

［5］李冬亮，王小引，韓華，等.孕酮對缺氧缺血新生大鼠腦組織SOD和GSHPx活性的影響［J］.中國藥理學通報，2007，23（2）：276-277.

［6］宋寧寧，魏欣冰，劉睿，等.丹皮酚對原代培養(yǎng)的大鼠皮質(zhì)和海馬神經(jīng)元缺糖缺氧再灌注損傷的保護作用［J］.中國藥學雜志，2007，42（5）：353-357.