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本文作者：焦巖1常影1王振宇2作者單位：1.齊齊哈爾大學(xué)食品與生物工程學(xué)院2.哈爾濱工業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院

沙棘又名醋柳、酸刺子，為胡頹子科沙棘屬多年生落葉灌木或小喬木[1]。據(jù)報(bào)道，沙棘中含有維生素類、糖類、氨基酸類、不飽和脂肪酸、多酚類、黃酮類、SOD、5-羥色胺以及各種微量元素等，具有抗氧化、抗衰老、提高免疫等多種作用[2-4]。藍(lán)莓、藍(lán)靛果、山葡萄中都含有大量的花色苷類物質(zhì)，抗氧化、降血脂、抗衰老等多項(xiàng)生理功能[5-7]。本研究利用大果沙棘乙醇提取物分別和藍(lán)莓、藍(lán)靛果以及山葡萄的乙醇提取物進(jìn)行復(fù)配，比較復(fù)配后各組間的抗衰老效果及各有效成分間的協(xié)同抗衰老作用，為營(yíng)養(yǎng)保健食品開(kāi)發(fā)和抗衰老藥物的篩選提供了參考。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1主要原料與試劑

大果沙棘鮮果、藍(lán)莓果：黑龍江省孫吳縣林業(yè)局；藍(lán)靛果、山葡萄：吉林長(zhǎng)白山地區(qū)。4種漿果分別經(jīng)低溫烘干后，粉碎至40目，70%乙醇超聲波浸提30min，提取3次后，過(guò)濾、濃縮成一定體積的提取物水溶液，放入4℃冰箱備用。SOD、GSH-PX和MDA試劑盒：南京建成生物工程研究所；其他試劑：市售AR級(jí)。

1.1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

昆明種小鼠，雌雄各半，體重(22±3)g，共112只，黑龍江省獸醫(yī)研究所提供。1.1.3主要儀器與設(shè)備離心機(jī)，水浴鍋，游泳箱，電子天平，756PC紫外/可見(jiàn)分光光度計(jì)，超聲波提取器等。1.2方法

1.2.1動(dòng)物分組與衰老動(dòng)物模型制備

動(dòng)物分組：將喂養(yǎng)1個(gè)月小鼠隨機(jī)分為7組，生理鹽水(CTL)組、D-半乳糖衰老模型(Ⅰ)組、大果沙棘(Ⅱ)組、大果沙棘+藍(lán)莓(Ⅲ)組、大果沙棘+藍(lán)靛果(Ⅳ)組、大果沙棘+山葡萄(Ⅴ)組、大果沙棘+藍(lán)莓+藍(lán)靛果+山葡萄(Ⅵ)組。動(dòng)物模型的建立：將小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1個(gè)月后，衰老模型組和各復(fù)合制劑組皮下注射25%的D-半乳糖溶液125mg/kg•d，連續(xù)28d；空白組每日皮下注射等劑量0.9%生理鹽水1次，連續(xù)28d。給藥方法：大果沙棘、藍(lán)莓、藍(lán)靛果、山葡萄提取液每天分別按3.0g/kgbw等體積灌胃，衰老模型組和對(duì)照組灌胃等體積的生理鹽水。實(shí)驗(yàn)組灌胃不同劑量的受試物水溶液。動(dòng)物自由攝食和飲水，每鼠日灌胃量0.15mL/10gbw，連續(xù)灌喂28d。

1.2.2指標(biāo)測(cè)定

末次給藥2h后眼眶采血于試管中，低溫冷藏備用。取血后處死動(dòng)物，取腦和肝臟制成勻漿，4000r/min離心15min，取上清液用Bradford法測(cè)蛋白質(zhì)含量[8]。血清和組織中的SOD、GSH-PX的活性及MDA的含量測(cè)定均按試劑盒方法進(jìn)行。

1.2.3數(shù)據(jù)分析

采用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行方差分析和t檢驗(yàn)。

2實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1大果沙棘復(fù)合制劑對(duì)小鼠體重的影響

小鼠連續(xù)灌胃28d以后，與生理鹽水(CTL)組相比，D-半乳糖衰老模型(Ⅰ)組小鼠的體重增加緩慢。大果沙棘各復(fù)合制劑組實(shí)驗(yàn)組和生理鹽水(CTL)組相比體重增加也比較緩慢，但增加量要高于D-半乳糖衰老模型組，結(jié)果見(jiàn)表1。說(shuō)明大果沙棘復(fù)合制劑可抑制D-半乳糖衰老模型小鼠體重的增加，具有一定的減肥功能。

2.2大果沙棘復(fù)合制劑對(duì)小鼠血清和組織勻漿SOD活性的影響

與生理鹽水(CTL)組相比，D-半乳糖衰老模型(Ⅰ)組小鼠血清和肝、腦器官組織中的SOD活性顯著低于生理鹽水(CTL)組(P<0.01)；和衰老模型(Ⅰ)組相比，灌服大果沙棘各復(fù)合制劑組(Ⅱ-Ⅵ)小鼠的血清、肝臟和腦組織中SOD活性的明顯增強(qiáng)(P<0.05)；且復(fù)合制劑各組小鼠體內(nèi)SOD活性和沙棘(Ⅱ)組相比均有所升高，Ⅵ組SOD活性最高且差異顯著(P<0.05)，結(jié)果見(jiàn)表2。說(shuō)明大果沙棘和與之復(fù)配的各復(fù)合制劑可提高半乳糖衰老小鼠血清、肝臟和腦中SOD活性，并抑制模型小鼠體內(nèi)SOD活性的下降，且各復(fù)合制劑具有協(xié)同增效的作用，Ⅵ組作用最強(qiáng)。

2.3大果沙棘復(fù)合制劑對(duì)小鼠血清和組織勻漿GSH-Px活性的影響

與生理鹽水(CTL)組相比，D-半乳糖衰老模型(Ⅰ)組小鼠血清和肝、腦器官組織中的GSH-Px活性顯著低于生理鹽水(CTL)組(P<0.01)；與衰老模型組相比，各復(fù)合制劑組小鼠血液、肝臟和腦中的GSH-Px活性均有顯著升高(P<0.05)，Ⅵ組小鼠的GSH-Px活性升高極其顯著(P<0.01)；各復(fù)合制劑組和沙棘(Ⅱ)組相比，小鼠血液、肝臟和腦中的GSH-Px活性都較高，Ⅵ組差異顯著(P<0.05)，結(jié)果見(jiàn)表3。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，大果沙棘和與之復(fù)配的各復(fù)合制劑可提高半乳糖衰老小鼠血清、肝臟和腦中GSH-Px活性，沙棘與其他制劑配伍后能協(xié)同抑制模型小鼠體內(nèi)GSH-Px活性降低的作用，Ⅵ組協(xié)同效果最好。

2.4大果沙棘復(fù)合制劑對(duì)小鼠血清和組織勻漿MDA含量的影響

與生理鹽水(CTL)組相比，D-半乳糖衰老模型組小鼠(Ⅰ)血清、肝臟和腦中MDA含量顯著升高(P<0.01)，而灌而灌服大果沙棘各復(fù)合制劑組(Ⅱ-Ⅵ)的小鼠血清、肝臟和腦中MDA含量均明顯低于半乳糖衰老模型(Ⅰ)組(P<0.05)，且各復(fù)合制劑組MDA含量均和沙棘(Ⅱ)組相比均有所降低，Ⅵ組降低差異顯著(P<0.05)，結(jié)果見(jiàn)表4。說(shuō)明大果沙棘和與之復(fù)配的各復(fù)合制劑均有降低半乳糖衰老小鼠血清、肝臟和腦組織中MDA含量作用，Ⅵ組復(fù)合制劑產(chǎn)生的協(xié)同效果最佳。

3討論

衰老(Aging)是多因素協(xié)同引起的生命漸趨弱化的過(guò)程，可引起生理功能相應(yīng)減弱、適應(yīng)能力和抵抗力下降等綜合表現(xiàn)。關(guān)于衰老的機(jī)制解釋很多，其中起主導(dǎo)地位的自由基學(xué)說(shuō)認(rèn)為：體內(nèi)許多物質(zhì)代謝中產(chǎn)生過(guò)氧化的自由基，使機(jī)體內(nèi)的自由基處于不平衡狀態(tài)，過(guò)量的自由基就會(huì)引起機(jī)體損傷，會(huì)引起不飽和脂肪酸氧化成超氧化物，形成脂褐素，氧自由基過(guò)多會(huì)破壞細(xì)胞膜及其他重要成分，使蛋白質(zhì)和酶變性，當(dāng)自由基引起的損傷積累戰(zhàn)勝了機(jī)體的修復(fù)能力，導(dǎo)致細(xì)胞分化狀態(tài)的改變、甚至喪失，從而導(dǎo)致和加速衰老[9-12]。SOD是體內(nèi)清除自由基的重要抗氧化酶，可以保護(hù)細(xì)胞免受損傷，隨著年齡的增長(zhǎng)，體內(nèi)SOD活性逐漸降低，故SOD活力的高低與衰老密切相關(guān)。GSH-Px是動(dòng)物體內(nèi)一種具有抗氧化作用的酶，保護(hù)細(xì)胞膜不受脂類代謝副產(chǎn)物、氧化自由基的破壞。MDA是機(jī)體脂質(zhì)過(guò)氧化作用產(chǎn)生的脂質(zhì)過(guò)氧化物，它可能引起細(xì)胞代謝及功能障礙甚至死亡，其含量與細(xì)胞損傷的程度呈正相關(guān)，可間接反映出機(jī)體受自由基攻擊的嚴(yán)重程度[13]。國(guó)內(nèi)外已經(jīng)有大量的研究證明了沙棘、藍(lán)靛果、藍(lán)莓、山葡萄在清除自由基、抗氧化、延緩衰老等方面的顯著作用，但都是對(duì)單一成分功能的報(bào)道。根據(jù)傳統(tǒng)理論：配伍用藥優(yōu)于單味藥，多靶點(diǎn)優(yōu)于單靶點(diǎn)。而無(wú)論是單味中藥或復(fù)方，它們的物質(zhì)基礎(chǔ)是生物活性物質(zhì)群，這些活性物質(zhì)群按一定要求配伍組合，作用于多個(gè)靶點(diǎn)，經(jīng)多途徑的整合而發(fā)揮作用，才能呈現(xiàn)多效性[14-15]。本研究通過(guò)實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明，大果沙棘及其復(fù)合制劑能顯著提高D-半乳糖衰老模型小鼠的血液、肝臟和腦中的SOD和GSH-Px活性，降低衰老模型小鼠體內(nèi)血液、肝臟和腦中過(guò)氧化脂質(zhì)產(chǎn)物MDA的含量(P<0.05)，進(jìn)而說(shuō)明大果沙棘及其復(fù)合制劑具有較好的清除氧自由基，防止脂質(zhì)過(guò)氧化作用而產(chǎn)生的脂質(zhì)過(guò)氧化物，對(duì)細(xì)胞代謝及功能具有保護(hù)作用，抗衰老作用明顯。對(duì)各復(fù)合制劑抗衰老效果進(jìn)行綜合比較，各組大小依次為Ⅵ>Ⅳ>Ⅲ>Ⅴ>Ⅱ。其中，大果沙棘+藍(lán)莓+藍(lán)靛果+山葡萄(Ⅵ)組和沙棘組相比抗衰老效果極其顯著(P<0.01)，究其原因，可能是由于復(fù)合制劑中的各組分作用靶點(diǎn)和強(qiáng)度不同，幾種作用靶點(diǎn)不同的功能制劑組合后能以協(xié)同、整合方式對(duì)抗衰老的多個(gè)作用靶點(diǎn)發(fā)揮增強(qiáng)作用，所以產(chǎn)生更好的抗衰老效果。但其作用機(jī)理還不明確，還應(yīng)從細(xì)胞及分子水平進(jìn)一步研究。