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【摘要】目的對黃褐毛忍冬進行鑒別、浸出物、含量測定特征研究，提高黃褐毛忍冬質(zhì)量控制標準。方法采用薄層色譜法對黃褐毛忍冬中的綠原酸、咖啡酸進行鑒別；采用50%乙醇作溶劑，熱浸法測定黃褐毛忍冬浸出物含量；以50%甲醇作溶劑，超聲處理30min制備樣品溶液，采用高效液相色譜（HPLC）法，選用Luna〔5μm,C18(2),250mm×4.6mm〕色譜柱，體積流量1.0ml/min，柱溫30℃，檢測波長327nm，流動相為乙腈-0.4%磷酸（13：87）測定黃褐毛忍冬中綠原酸含量。結(jié)果采用薄層色譜法有效鑒別黃褐毛忍冬中的綠原酸、咖啡酸；采用50%乙醇熱浸能控制黃褐毛忍冬浸出物含量；HPLC法測定黃褐毛忍冬中綠原酸含量，綠原酸在10.49～125.9μg/ml范圍內(nèi)呈良好線性，R2=0.9999，通過方法學考察，精密度、穩(wěn)定性、重復性、回收率實驗、耐用性實驗RSD值均小于2.0%。結(jié)論建立了黃褐毛忍冬鑒別、浸出物、含量測定方法，能有效用于黃褐毛忍冬質(zhì)量控制，為黃褐毛忍冬質(zhì)量標準提高提供實驗依據(jù)。

【關(guān)鍵詞】黃褐毛忍冬；綠原酸；鑒別；浸出物；高效液相色

黃褐毛忍冬為忍冬科植物黃褐毛忍冬LonicerafulvotomentosaHsuetS.C.Cheng.的干燥花蕾或帶初開的花［1，2］，是20世紀70年代末發(fā)現(xiàn)的新種，首載于《植物分類學報》1979年17卷。在貴州省作為金銀花使用，稱“金銀花”“毛金銀花”“毛花”，地方習慣用于流行性感冒、咳嗽、肺炎等病［3］?！顿F州省中藥質(zhì)量標準》1988年版、《貴州省中藥材、民族藥材質(zhì)量標準》2003年版也將黃褐毛忍冬作為“金銀花”“銀花”收載［4，5］。但是對黃褐毛忍冬的特征性研究較少，質(zhì)量標準亦較低，本課題結(jié)合我省資源情況對黃褐毛忍冬鑒別、浸出物、含量測定等方面進行質(zhì)量標準的研究，進一步提高、完善黃褐毛忍冬質(zhì)量標準，有效控制藥品質(zhì)量。

1儀器與試藥

電熱恒溫鼓風干燥箱（GZX-9246MBE），電熱恒溫水浴鍋（HH.SY11-Ni），高效液相色譜儀（Waters1525型及2487紫外檢測儀），Luna〔5μm,C18(2),250mm×4.6mm〕色譜柱，電光分析天平（TG328A），電子天平（JP-160）電熱恒溫鼓風干燥箱（GZX-9246MBE），電熱恒溫水浴鍋（HH.SY11-Ni），綠原酸對照品（中國藥品生物制品檢定所110753-200413）、咖啡酸對照品、甲醇（色譜純），乙腈（色譜純），磷酸(分析純)，娃哈哈純凈水。其余試劑為分析純。黃褐毛忍冬樣品由貴州飛龍雨公司提供。

2方法與結(jié)果

2.1黃褐毛忍冬綠原酸、咖啡酸成分［6］

鑒別研究取黃褐毛忍冬粉末0.2g，加甲醇5ml放置12h，濾過，濾液作為供試品溶液。另取綠原酸、咖啡酸對照品分別加甲醇制成每毫升含1mg的溶液作為對照品溶液，照薄層色譜法試驗［3］，吸取兩種溶液各10μl，分別點于同一聚酰胺薄膜薄層板上，以乙酸丁酯-甲酸-水（7：2.5：2.5）的上層溶液為展開劑，展開，取出晾干，置紫外燈（365nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點（圖1）。

2.2黃褐毛忍冬浸出物含量

研究考慮黃褐毛忍冬的藥用方法和制劑提取的常規(guī)方法，參考《中國藥典》2005版Ⅰ部附錄ⅩA浸出物的測定方法，考察了水、50%乙醇、75%乙醇、95%乙醇4種溶劑的冷浸、熱浸兩種方法。測定10批樣品，測定結(jié)果受兩組變量A(浸出方法)、B（浸出溶劑）的影響，將浸出物含量、浸出方法、浸出溶劑應用SPSS統(tǒng)計軟件進行方差分析。結(jié)果顯示，應用水、50%乙醇、75%乙醇熱浸，P=0.264＞0.05，結(jié)果無顯著性差異，考慮各種因素，采用50%乙醇作溶劑，熱浸法測定黃褐毛忍冬浸出物含量。

2.3黃褐毛忍冬中綠原酸含量測定［7］研究

2.3.1色譜條件

色譜系統(tǒng)由Wters1525型高效液相色譜儀及2487紫外檢測儀；色譜條件：色譜柱為Luna〔5μm,C18(2),250mm×4.6mm〕，流動相為乙腈-0.4%磷酸（13∶87），檢測波長327nm，柱溫30℃，流速1ml/min。測定方法：分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各5～10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。

2.3.2對照品溶液的制備

取綠原酸對照品適量，置棕色量瓶中，加50%甲醇制成每毫升含40μg的溶液，即得(10℃以下保存)。

2.3.3供試品溶液的制備

取樣品粉末（過四號篩）約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇50ml，稱定重量，超聲處理30min，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補足減失重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5ml，置25ml棕色瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻，即得。

2.3.4線性關(guān)系的考察

取綠原酸標準品10.49mg，加50%甲醇50制成0.2098mg/ml的母液，分別吸取

母液配制成不同濃度的溶液，進樣10μl，按上述色譜條件測定，以對照品溶液含量（μg/ml）為橫坐標，峰面積為縱坐標計算綠原酸的回歸方程A=47003C-38602，R2=0.9999，線性范圍為10.49～125.9μg/ml。

2.3.5穩(wěn)定性實驗

精密吸取同一樣品試液（樣品編號No.9），分別于室溫下0，1，3，6，12h后進樣，進樣量10μl，分別記錄綠原酸的峰面積，RSD值為0.80%，結(jié)果表明樣品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.3.6重復性實驗

取同一批樣品（樣品編號No.9）按試液制備項下制備，平行制備樣品試液6份，按樣品測定項下方法測定峰面積，計算含量，RSD值為0.98%，結(jié)果表明本法重復性良好。

2.3.7精密度實驗

取綠原酸標準品（含量測定用）適量，制成40.25μg/ml的溶液，連續(xù)進樣5次，進樣量10μl，記錄峰面積積分，RSD值為0.30%，結(jié)果表明綠原酸的進樣精密度良好。

2.3.8回收率實驗

取已知含量的樣品（樣品編號No.9）精密稱定（約0.25g）6份，分別加入一定量的綠原酸標準品（供含量測定用）按供試品溶液制備方法制備，按樣品測定法測定綠原酸含量，計算回收率，結(jié)果平均回收率98.3%，RSD值為1.16%，表明綠原酸回收率較好。結(jié)果見表1。表1黃褐毛忍冬回收率實驗結(jié)果（略）

2.3.9耐用性實驗

取樣品（樣品編號No.2），按樣品含量測定方法測定綠原酸峰面積，具體色譜條件：流動相乙腈-0.4%磷酸溶液（13：87），測定波長327nm，流速1.0ml/min，柱溫30℃，色譜柱島津Shim-pack150l×4.6vp-ODS,進樣量10μl，測定綠原酸峰面積積分。同時按上述制備、測定方法考察柱溫變化、流動相比例變化、不同品牌色譜柱和流動相流速變化對綠原酸峰面積積分的影響。超級秘書網(wǎng)

從考察以上四個方面的因素來看，除流速外，其余條件的改變RSD值均小于2.0%，符合HPLC條件的要求。而流速的改變，對照品的峰面積也成同樣變化。因此可以判斷：本方法測定黃褐毛忍冬中綠原酸含量的耐用性較好。

2.3.10樣品含量測定

按上述制備、測定方法測定10批20份樣品。結(jié)果見表2。表210批黃褐毛忍冬綠原酸含量測定結(jié)果（略）

3討論

在黃褐毛忍冬的貴州省質(zhì)量標準中無化學成分鑒別，本方法用于化學成分鑒別簡便快速。

浸出物含量的測定是中藥材內(nèi)在質(zhì)量控制的一個粗放的控制指標，本方法結(jié)合黃褐毛忍冬在實際使用和制劑生產(chǎn)中的特性，能簡便易行的控制其內(nèi)在質(zhì)量。

本方法通過測定黃褐毛忍冬中綠原酸的含量能有效地控制黃褐毛的質(zhì)量，為提高黃褐毛忍冬的質(zhì)量標準提供實驗依據(jù)。

【參考文獻】

［1］中國植物志編委會.中國植物志，72卷［M］.北京：科學技術(shù)出版社，1988:231.

［2］貴州植物志編委會.貴州植物志，第2卷［M］.貴陽人民出版社，1985:229.

［3］國家藥典委員會.中國藥典，Ⅰ部［S］.北京：化學工業(yè)出版社，2005:21，152，附錄ⅥB.

［4］貴州省藥品監(jiān)督管理局.貴州省中藥材、民族藥材質(zhì)量標準［S］.貴州科技出版社，2003:340.

［5］貴州省衛(wèi)生廳.貴州省中藥材質(zhì)量標準，1988版［S］.貴陽：貴州人民出版社，1990:85.

［6］茅青，賈憲生.黃褐毛忍冬化學成分的研究［J］.藥學學報，1989，24（4）：269.

［7］張艷焱，張?zhí)靷?，梁光義，等.黃褐毛忍冬不同炮制品中綠原酸的HPLC法含量測定［J］.中草藥，2003，31（8）：696.