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【摘要】目的建立和胃止痛片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法采用高效液相色譜法測(cè)定方中黃連藥材中鹽酸小檗堿（C20H17NO4·HCl）的含量。并同時(shí)對(duì)黃連、延胡索、木香進(jìn)行薄層鑒別。結(jié)果鹽酸小檗堿含量測(cè)定進(jìn)樣量在0.085～0.850μg有良好的線性，r=0.9999，平均回收率96.7%，RSD為1.53%。TLC定性鑒別陰性無(wú)干擾，對(duì)照品與供試品溶液斑點(diǎn)對(duì)應(yīng)整齊、清晰。結(jié)論該檢測(cè)方法方便，準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，可用于該制劑的質(zhì)量控制。

【關(guān)鍵詞】和胃止痛片；薄層鑒別；高效液相色譜法；鹽酸小檗堿

前言

和胃止痛片收載于《國(guó)家中成藥標(biāo)準(zhǔn)匯編·中成藥地方標(biāo)準(zhǔn)上升國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)部分》，由大紅袍、雞矢藤、管仲、金蕎麥、黃連、砂仁、延胡索、木香8味藥材組成。功能主治彝醫(yī)：猜尼圍快，圍斯希；中醫(yī)：行氣活血，和胃止痛。用于肝胃氣滯，濕熱淤阻所致的急慢性胃腸炎、胃及十二指腸潰瘍、慢性結(jié)腸炎。和胃止痛片是中成藥中治療這類疾病的良藥，市場(chǎng)需求量大。為了控制質(zhì)量筆者對(duì)方中的黃連、延胡索、木香進(jìn)行薄層鑒別，用高效液相色譜法對(duì)黃連中的鹽酸小檗堿的含量測(cè)定進(jìn)行了研究。

1儀器與試藥

1.1儀器

AgilentG1311AQuatPump，G1314AVWD，G1379ADEGASSER，AT-330柱溫箱，XtemaRp18（150mm×3.9mm，5μm）色譜柱，塞多利斯全自動(dòng)電子天平(德國(guó)塞多利斯)。

1.2試藥硅膠G（青島海洋化工廠）;色譜純乙腈;其它試劑均為分析純；鹽酸小檗堿對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，編號(hào)為110713-200208，為供含量測(cè)定用）;延胡索乙素對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢驗(yàn)所提供，延胡索乙素對(duì)照品批號(hào)：110726-200208,供定性測(cè)定用）;和胃止痛片樣品（自制）。

2方法與結(jié)果

2.1定性鑒別

2.1.1黃連的薄層鑒別［1］

取本品25片，研細(xì)，加氨試液1.5ml使?jié)櫇?，加三氯甲?0ml，超聲處理15min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液。另取黃連對(duì)照藥材0.5g和處方中不含黃連藥材按制備方法制成陰性樣品，同法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法實(shí)驗(yàn)，吸取上述3種溶液各2μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以正丁醇-冰醋酸-水（7∶1∶2）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈（365nm）下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。陰性對(duì)照無(wú)干擾。見(jiàn)圖1。

2.1.2延胡索的薄層鑒別［2］

取本品50片，研細(xì)，加甲醇50ml，超聲處理15min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0ml使溶解，用濃氨試液調(diào)節(jié)pH值至8～10，用乙醚振搖提取3次，15ml/次，合并乙醚液，蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液。取延胡索乙素對(duì)照品，加甲醇制成每毫升含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。另取處方中不含延胡索藥材按制備方法制成陰性樣品，再按供試品溶液制備方法制成陰性樣品溶液。照薄層色譜法實(shí)驗(yàn)，吸取上述3種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以甲苯-丙酮（9∶2）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置碘蒸氣中熏至斑點(diǎn)顯色清晰。日光下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；在空氣中揮盡板上吸附的碘后，置紫外光燈（365nm）下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。陰性對(duì)照無(wú)干擾。見(jiàn)圖2。

2.1.3木香的薄層鑒別

取本品10片，研細(xì)，加三氯甲烷10ml，超聲處理30min，濾過(guò)，濾液濃縮至1ml，作為供試品溶液。取去氫木香內(nèi)酯和木香烴內(nèi)酯對(duì)照品適量，加甲醇制成每毫升各含0.5mg的混合溶液，作為對(duì)照品溶液。另取處方中不含木香藥材按制備方法制成的陰性樣品再按供試品溶液制備方法制成陰性樣品溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述3種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-環(huán)己烷（5∶1）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以茴香醛試液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。陰性對(duì)照無(wú)干擾。見(jiàn)圖3。

2.2含量測(cè)定

2.2.1對(duì)照品溶液的制備精密稱取在100℃干燥5h的鹽酸小檗堿對(duì)照品適量，加甲醇制成每毫升中含鹽酸小檗堿60μg的溶液，過(guò)濾即得。

2.2.2供試品溶液的制備［3］取本品10片，除去包衣，研細(xì)，取約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入80%甲醇25ml，密塞，稱定重量，超聲處理（功率90W，頻率59kHz）40min，取出，放冷再稱定重量，用80%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3色譜條件與實(shí)驗(yàn)結(jié)果色譜柱：XtemaRp18（150mm×3.9mm，5μm）；柱溫：30℃；流動(dòng)相：乙腈-0.1%磷酸溶液（40∶60）（每100ml加十二烷基磺酸鈉0.1g）；檢測(cè)波長(zhǎng)265nm；流速1ml/min，照此條件分析，制劑中的鹽酸小檗堿的主峰和其它組分均能達(dá)到基線分離。對(duì)照品溶液、供試品溶液及缺黃連的陰性對(duì)照品溶液的色譜圖。見(jiàn)圖4～6。

2.2.4線性范圍的考察精密稱取鹽酸小檗堿對(duì)照品17.0mg，置25ml量瓶中，加80%甲醇溶液使溶解，并稀釋至刻度，搖勻（濃度為680μg/ml），再分別精密吸取對(duì)照品母液適量，用80%甲醇溶液稀釋成不同濃度的對(duì)照品溶液：17.0，34.0，68.0，85.0，170.0μg/ml。分別精密吸取上述不同濃度的對(duì)照品溶液各5μl，按正文中色譜條件分析進(jìn)樣，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，鹽酸小檗堿的量為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（圖7）,計(jì)算得鹽酸小檗堿回歸方程：Y=3685.12628X+15.65202017，r=0.99993。表明鹽酸小檗堿進(jìn)樣量在0.085～0.850μg范圍內(nèi)具有良好線性關(guān)系。

2.2.5精密度實(shí)驗(yàn)精密吸取鹽酸小檗堿對(duì)照品溶液(68.0μg/ml)5μl，重復(fù)進(jìn)樣5次，按上述色譜條件測(cè)定峰面積。求相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差以鹽酸小檗堿峰面積積分值計(jì)RSD為0.54%。表明儀器精密性良好。

2.2.6重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)分別取同一批（20051001）和胃止痛片樣品5份，按正文中含量測(cè)定項(xiàng)下方法實(shí)驗(yàn)，測(cè)定鹽酸小檗堿的含量。樣品中鹽酸小檗堿含量的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.57%，表明此法重現(xiàn)性良好。

2.2.7穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)取上述標(biāo)準(zhǔn)曲線項(xiàng)下的鹽酸小檗堿對(duì)照品溶液(68.0μg/ml)及和胃止痛片供試品溶液各5μl，分別在0，2，4，6，8，12進(jìn)樣，按正文中含量測(cè)定項(xiàng)下條件測(cè)定對(duì)照品、供試品在0～12h內(nèi)峰面積的RSD分別為0.76%，0.81%，表明對(duì)照品、供試品放置12h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.2.8加樣回收率實(shí)驗(yàn)精密稱取鹽酸小檗堿對(duì)照品（100℃干燥5h）15.4mg，置10ml量瓶中，加80%甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成（1.54mg/ml）對(duì)照品溶液。取同一批（20051001）已知含量的和胃止痛片（5.79mg/g）精密稱取樣品各5份，每份約0.25g，分別精密加入上述鹽酸小檗堿對(duì)照品溶液各1ml，按正文中含量測(cè)定項(xiàng)下方法測(cè)定供試品溶液并測(cè)定其鹽酸小檗堿的含量。平均回收率為96.7%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.53%，表明此法回收率良好。結(jié)果見(jiàn)表1。表1加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果（略）超級(jí)秘書(shū)網(wǎng)

2.2.9樣品含量測(cè)定取本品10批，按正文中含量測(cè)定項(xiàng)下方法測(cè)定。結(jié)果見(jiàn)表2。表210批和胃止痛片樣品含量測(cè)定結(jié)果（略）

3討論

實(shí)驗(yàn)過(guò)程中對(duì)鹽酸小檗堿對(duì)照品的80%甲醇溶液進(jìn)行停泵掃描，波長(zhǎng)范圍為190nm至400nm。結(jié)果鹽酸小檗堿的紫外特征吸收最大265nm，由于在265nm處檢測(cè)系統(tǒng)易穩(wěn)定，峰形好、響應(yīng)大，確定265nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。

由于不同產(chǎn)地及采收時(shí)間等原因?qū)е曼S連藥材中的鹽酸小檗堿的含量有高有低，結(jié)合以上10批樣品中鹽酸小檗堿的含量測(cè)定結(jié)果，將本品中鹽酸小檗堿的含量定為每片含黃連以鹽酸小檗堿計(jì)，應(yīng)不得少于0.70mg。

【參考文獻(xiàn)】

［1］余小婷，幸而，黃紅雯.和胃止痛膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究［J］.中南藥學(xué)，2004，2（5）：291.

［2］樸惠善，沈光海，鄭云花，等.紫外分光光度法測(cè)定關(guān)蒼術(shù)復(fù)方制劑中延胡索乙素含量［J］.延邊醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，1996，19(1)：11.

［3］國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典，Ⅰ部［S］.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：213，附錄VIB.