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化學(xué)發(fā)光法的基本原理范文第1篇

關(guān)鍵詞：石油產(chǎn)品 硫含量 分析方法 比較

在石油化工生產(chǎn)過程中硫的存在可造成設(shè)備的腐蝕、催化劑中毒；是導(dǎo)致油品在貯存過程中生成膠質(zhì)并產(chǎn)生沉淀的主要因素之一，從而影響產(chǎn)品的質(zhì)量和貯存安定性；另外，油品中的硫在燃燒過程中會生成硫氧化物，造成環(huán)境污染，危及人類健康。硫含量的測定方法很多，應(yīng)用較早的有燃燈法、氧彈法、管式爐燃燒法等，由于此類方法靈敏度低，操作繁瑣，耗時太長，已逐漸被微庫侖法、X射線熒光光譜法、紫外熒光法替代；對于痕量硫的測定采用微庫侖法。

一、各種總硫分析方法的原理

（一）微庫侖法

微庫侖法的基本原理是油品中各種形態(tài)的含硫化合物，在高溫含氧氣流中轉(zhuǎn)變成二氧化硫，并隨氣流進入滴定池中。滴定池內(nèi)裝有含KI的電解液，并可通過電解產(chǎn)生三碘離子與進入滴定池的二氧化硫反應(yīng)，生成三氧化硫和I-，通過計算產(chǎn)生三碘離子所消耗的電量，便可計算樣品中的硫含量。

（二）X射線熒光光譜法（XRF）

X射線熒光法又分能量色散X射線熒光光譜法（EDXRF）和波長色散X射線熒光法（WDXRF）。

能量色散X射線熒光法（EDXRF）原理是將樣品置于從X射線源發(fā)射出來的射線束中，測量激發(fā)出來能量為2.3keV的硫Kα特征X射線強度，并將累積計數(shù)與預(yù)先制定的校準曲線進行比較，從而獲得樣品的硫含量。[1]

波長色散X射線熒光光譜法（WDXRF）將樣品置于X射線光束中，測定0.5373nm的波長下硫Kα譜線強度。將最高強度減去0.5190nm的推薦波長下測得的背景強度，作為凈計數(shù)率與預(yù)先制定的校準曲線進行比較，從而獲得樣品的硫含量。[2]

在波長色散X射線熒光光譜法的基礎(chǔ)上又發(fā)展出單波長色散X射線熒光光譜法（MWDXRF）被廣泛使用。其原理是具有合適波長可以激發(fā)硫K層電子的單色X射線照射在裝入樣品盒的被測樣品上，由硫元素發(fā)出的波長為0.5373nm的KαX射線熒光被一個固定單色器收集，收集的硫元素的X射線熒光強度被檢測器測量，并用校準方程將其轉(zhuǎn)換成被測樣品中硫的含量（mg/Kg）。與傳統(tǒng)的波長色散X射線熒光分析技術(shù)中所用的多色激發(fā)相比，單色X射線激發(fā)減少了背景，簡化了基體校正，提高了信噪比。該方法可以快速、準確地測定汽油和柴油中的總硫含量。[3]

（三）色譜法

用接有FID檢測器的氣相色譜儀及硫化學(xué)發(fā)光檢測器（SCD），測定油品中的痕量總硫，氣相色譜儀作為樣品的進入設(shè)備，色譜柱分別與進樣器及檢測器相連，采用空的毛細管色譜柱是因為只測定樣品中的總硫，不需要考慮含硫化合物的類型，待分析含硫化合物從色譜柱餾出后，進入燃燒室，含硫化合物發(fā)生下列反應(yīng)：R-S-----〉SO +H2O+其它碎片。SCD 燃燒器安裝在色譜儀的檢測器位置上，該燃燒器為雙等離子體，用以增強SO 中間體的產(chǎn)生。

燃燒器控制器控制燃燒室溫度和流量。真空泵將燃燒產(chǎn)物抽吸到一個低壓反應(yīng)池，同時臭氧發(fā)生器通過對Air高壓電暈產(chǎn)生的臭氧（只有在反應(yīng)池壓力小于100 torr（SCD）的情況下，高壓才會供應(yīng)給臭氧發(fā)生器）也被吸到在低壓反應(yīng)池，一氧化硫（SO）與臭氧發(fā)生反應(yīng)產(chǎn)生的化學(xué)發(fā)光（發(fā)光反應(yīng)） ：SO + O3 -----> SO2 + O2 + hν （

二、試驗部分

（一）儀器

（三）實驗步驟

1.色譜法和微庫侖法測定重整原料痕量硫

煉油裝置重整工藝中，長期存在過量的硫會造成催化劑永久性中毒，重整原料硫含量控制在0.5mg/Kg以下，分析重整原料痕量硫適用的方法有紫外熒光法、色譜法和微庫侖法，但由于國產(chǎn)的紫外熒光定硫儀檢測限達不到要求，因此在這里就不做比較了。

打開色譜儀，調(diào)節(jié)合適的儀器測量參數(shù)，待儀器穩(wěn)定后取濃度為0.2mg/L、0.5mg/L、1.0mg/L的硫標準樣品測定生成硫標準曲線。

打開RPA-100型微庫侖滴定儀，調(diào)節(jié)合適的儀器測量參數(shù)，待儀器穩(wěn)定后取濃度為0.5mg/L的硫標準樣品對儀器進行校正，使儀器的轉(zhuǎn)化率在90%～110%之間。采用色譜法法和微庫侖法測定相同的樣品，測試結(jié)果見表1。

四、結(jié)果與討論

微庫侖法的操作較麻煩，準備工作主要是回收率的測定，因為油品中各種形態(tài)的含硫化合物，在高溫含氧氣流中不是100%轉(zhuǎn)變成二氧化硫，總有一部分轉(zhuǎn)化為三氧化硫，所以通過測二氧化硫的轉(zhuǎn)化率來了解分析的準確率，所以每次分析前都需用標樣調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)化率在90%～110%之間。用色譜法分析總硫操作簡單，分析速度快，進樣重復(fù)性好，線性范圍寬，可排好序列，自動進樣，大大降低了分析人員的勞動強度，提高了分析的準確度，X射線熒光法直接測量試樣，測量過程中不需要與氧反應(yīng)、燃燒、試樣傳送或稀釋等步驟，無需樣品轉(zhuǎn)化，儀器外形小巧，操作簡單可靠。X射線熒光法從樣品準備到檢測可在3～5min內(nèi)完成，分析時間短，工作效率高。

參考文獻

[1]GB/T 17040-2008 《石油和石油產(chǎn)品硫含量的測定 能量色散X射線熒光光譜法》[S]

[2]GB/T 11140-2008 《石油產(chǎn)品硫含量的測定 波長色散X射線熒光光譜法》[S]

化學(xué)發(fā)光法的基本原理范文第2篇

關(guān)鍵詞：免疫PCR 基本原理 靈敏度 PCR種類

中圖分類號：R446.6 文獻標識碼：B 文章編號：1004-7484（2011）18-0071-02

1992年Sano等人將免疫測定技術(shù)與聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)技術(shù)結(jié)合，創(chuàng)建了一種全新的極其敏感的抗原分子檢測技術(shù)，即免疫―PCR。該技術(shù)正是運用PCR的高度敏感性來放大抗原抗體反應(yīng)的特異性，這種靈敏程度使免疫檢測技術(shù)達到了一個新的高度。現(xiàn)在將免疫―PCR技術(shù)研究進展綜述如下：

1 免疫―PCR的基本原理

免疫―PCR主要由兩部分組成。第一部分是類似于普通酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)的抗原抗體反應(yīng)，第二部分是常規(guī)的PCR擴增和電泳檢測。免疫―PCR與ELISA的區(qū)別就在于ELlSA是以堿性磷酸酶或辣根過氧化物酶來標記抗體，用顏色反應(yīng)來表明陽性或陰性結(jié)果，而免疫―PCR則是以一段特定的雙鏈或單鏈DNA來標記抗體，用PCR擴增抗體所連接DNA，并進行電泳檢測，因此可由PCR產(chǎn)物的量來反映抗原分子的量。免疫―PCR的關(guān)鍵之處就在于用一個連接分子將一段特定的DNA連接到抗體上，在抗原和DNA之間建立相對應(yīng)關(guān)系，從而將對蛋白質(zhì)的檢測轉(zhuǎn)變?yōu)閷怂岬臋z測。

2 免疫-PCR的靈敏度

Sano T等應(yīng)用免疫―PCR檢測包被在ELISA板上的牛血清白蛋白，比應(yīng)用堿性磷酸酶染色的ELISA法，在檢測靈敏度上大約增加×105，由于PCR的巨大擴增能力和特異性，使得免疫―PCR技術(shù)靈敏度高于目前存在的任何抗原檢測系統(tǒng)，理論上可檢測單分子抗原。人甲狀腺刺激素(TSH)是評價甲狀腺功能的指標，血標本中正常濃度較低(5×10-12mmol/L，25×10-16mmol/L)，臨床一般用放射免疫測定超過了ELISA的檢測范圍。Hendrickson等用三明治夾心法免疫―PCR檢測TSH水平1fg(10-12mmol)。而用夾心法ELISA檢測水平[pg(10-16mol)前者靈敏度比后者高3個數(shù)量級。

3 免疫―PCR的改進

雖然Sano PP等人構(gòu)建的免疫―PCR具有極高的靈敏度，但Sano所用的連接分子鏈親和素―蛋白A嵌合體還沒有商品化，因此限制了他在實際應(yīng)用中的廣泛普及。Ruzicka等人以生物素化的抗體取代Sano免疫―PCR系統(tǒng)中的抗體，用商品化的親和素代替鏈親和素―蛋白A嵌合體作為連接分了構(gòu)建了一個新的免疫―PCR系統(tǒng)。Ruzicka用此免疫―PCR系統(tǒng)檢測小鼠抗載脂蛋白E抗體，可以檢測出包被濃度為10fg/ml的E抗體。此外，Sano的免疫―PCR實驗流程需要眾多的洗滌步驟，使實驗過程相當繁瑣，并需要大量的操作時間。Zhou等人對此作了改進，他們用生物素化的二抗和游離鏈親和素作為連接分子進行免疫-PCR實驗，把每個步驟的洗滌次數(shù)從原先的7～15次減至3～5次，從而減少了操作時間，但不影響實驗結(jié)果的準確性。另外，用修飾過的抗原稀釋緩沖液代替Sano免疫―PCR中的TBS作為抗原稀釋液，它主要把TBS中胍的濃度調(diào)到2mmol/L，由此解決了抗原的溶解問題。Zhou檢測了人原癌基因ETS，檢測濃度可達9.6×1015mmol/L，是常規(guī)ELISA的10倍，與Sano的免疫―PCR系統(tǒng)相比，Ruzicka和Zhou所用的方法不需要特殊的試劑，生物素和親和素(鏈親和素)都已商品化，因此在實際操作中得到廣泛應(yīng)用。

4 免疫―PCR的種類

多抗原分析物免疫―PCR，就是同時檢測多種抗原。放射性同位素、熒光索、酶和化學(xué)發(fā)光法標記的抗體，已被開發(fā)用于多分析物的檢測，但來自不同標記的重疊信號和掃描不同信號密度上的困難，使上述方法尚未試用，相對而言，DNA為多分析物區(qū)分提供了理想的分子標記。大小不同的DNA分子可以通過電泳準確、定量地區(qū)分。Hendrickson等用99個堿基的寡核甘酸標記的HCG抗體、85個堿基寡核苷酸標記的TsII抗體和55個堿基募核苷酸標記，β―Cal抗體同時檢測HCC、TSH 、β―Cal3個分析物，而PCR擴增時，3個寡核苷酸應(yīng)用一對引物，但產(chǎn)物分子質(zhì)量各為99bp、85bp、55bp，因而各個抗原得以鑒定，Zhou和Hendrickson分別談到單引物免疫―PCR，所謂單引物免疫―PCR，就是標記抗體的DNA指示分子的兩側(cè)翼含相同的引物序列，可用單引物PCR擴增。該法可提高PCR擴增效率，且適于多抗原免疫-PCR。雙相免疫―PCR，就是同時檢測病原體抗原又檢測病體基因的免疫―PCR，其原理就是一對用于擴增某病原體基因的引物，被人工加在標記抗體的DNA marker的兩端，使二者共用一對引物，但產(chǎn)物分子量大小不同，達到免疫―PCR在檢測抗原的同時，又檢測了目的基因。總之，目前而言，免疫―PCR可分為單分析物免疫―PCR、多分析物免疫-PCR、單引物免疫-PCR以及雙和免疫-PCR。

5 展望

免疫―PCR作為一種抗原檢測系統(tǒng)，同時具有抗原抗體反應(yīng)的特異性和PCR的高靈敏度，適合于各種微量抗原的檢測，并可以直接檢測細胞上抗原。預(yù)先將抗體和標記DNA偶聯(lián)，簡化了實驗操作，并可同時檢測多種抗原。而標記物和引物被設(shè)計為帶有親和配體，則可用常規(guī)ETISA法檢測，隨著免疫―PCR技術(shù)的進一步發(fā)展完善，免疫―PCR的功能將得到更充分的發(fā)展，新的標記物和引物設(shè)計將擴展可檢測分析的范圍，簡化實驗的復(fù)雜性具有側(cè)鏈DNA標記物的偶聯(lián)物能夠承擔(dān)的標記物的檢測，產(chǎn)生更準確的結(jié)果，相信不久就會有商品化的免疫―PCR試劑盒問世。

參考文獻

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化學(xué)發(fā)光法的基本原理范文第3篇

【關(guān)鍵詞】 梅毒； 慢性傳染??； 蒼白密螺旋體； 血清學(xué)

Research Progress on Gene Recombinant Antigen of Treponema Pallidum （TP） and Its Serology Diagnosis/MO Xian-wen.//Medical Innovation of China，2014，11（28）：141-144

【Abstract】 Syphilis， a chtonic infectious disease， with complicated clinical manifestaion， long course and huge perniciousness， and complete treponema pallidum （TP） is unable to culture in clinical for a long time， which leads hinders in the antigen study based on TP. In latest years， with the constant and deeper study on the TP genes， it reached a big process that the study on related antigens of TP genes. The diagnosis of sphilis is based on serology currently， so it would be helpful for the treatment of syphilis that mastering related serology diagnosis. This paper is a summary about the research progress on gene recombinant antigen of TP and its serology diagnosis.

【Key words】 Syphilis； Chronic infectious disease； Treponema pallidum； Serology

First-author’s address： Guidong People’s Hospital of Guangxi Zhuang Autonomous Region， Wuzhou 543001， China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2014.28.048

導(dǎo)致人體感染梅毒的致病菌為蒼白螺旋體的亞種-密螺旋體（TP），感染人體的主要致病菌株為Nichols株。梅毒螺旋體的細胞質(zhì)被3層細胞質(zhì)外膜包裹著，而暴露于外膜的跨膜蛋白數(shù)量較少，但跨膜蛋白在臨床中對于梅毒的診斷確診有著極大的實際價值[1]。在實際的臨床操作中，很難對梅毒螺旋體進行體外培養(yǎng)，確診梅毒的方式由培養(yǎng)梅毒螺旋體替代為利用梅毒螺旋體的重組抗原進行對應(yīng)的檢測。

1 梅毒螺旋體基因重組抗原的研究進展

1.1 Tpr基因家族 Tpr基因家族涵蓋了12個蛋白，這12個蛋白按照同源性氨基酸的分類應(yīng)該屬于3個不同的亞型，其中Ⅰ亞型為Tpr C、D、F、I，Ⅱ亞型為Tpr E、G、J，Ⅲ亞型為A、B、H、L、K[2]。在這3個亞型中，在梅毒感染兔的模型中，誘導(dǎo)T細胞以及強烈的抗體反應(yīng)的為Tpr K，這一實驗結(jié)果提示著使用Tpr免疫能夠有效地減弱梅毒患者損傷后病情的進一步發(fā)展。在分子結(jié)構(gòu)學(xué)上，對于Tpr家族的Ⅰ亞型而言，其中它們的C端和N端高度相似于F端和N端，特別是在Tpr的C、D兩個亞型之間，它們C端結(jié)構(gòu)的相似度高達94%[3]。在對Tpr家族的抗原氨基末端的重組性實驗中發(fā)現(xiàn)，這些抗原對于感染梅毒患者的損傷的進展有著一定程度的減弱作用，這些重組抗原很可能起著關(guān)鍵作用的階段為梅毒患者的不完全免疫階段。

1.2 TpN15、TpN47、TpN17、TmpA 1989年有學(xué)者利用兔子的抗體血清成功的篩查出了Tp基因組中的6個重組克隆，且利用Western法以及電泳法成功的篩選出了TpN15、TmpA、TpN17等3個蛋白[4]。在1996年，相應(yīng)的學(xué)者在通過對梅毒螺旋體的結(jié)構(gòu)的進一步研究中發(fā)現(xiàn)，他們利用PCR法對梅毒螺旋體內(nèi)的基因進行了擴增，并將擴增后的基因插入大腸桿菌內(nèi)進行了表達，結(jié)果獲得了TpN47、TpN35、TpN44.5、TpN29-35、TpN39等抗原，接下來的ELISA法實驗中發(fā)現(xiàn)上述抗原中引起抗體滴度最高的為TpN47、TpN17、TpN44.5[5]。在后續(xù)的相關(guān)實驗中，學(xué)者重組并成功表達了TpN47的載體pGEX-2T，并成功證實了其具有免疫原性，同時有學(xué)者的相關(guān)實驗還成功的證實了TpN47是一種能夠與青霉素進行結(jié)合的蛋白，并且發(fā)現(xiàn)TpN47與青霉素結(jié)合的位點有3個，同時還證實TpN47本身是一種具有鋅依賴性的羧肽。有學(xué)者通過重疊多肽的方法成功的找出了位于TpN47上的抗原表位[6]。

1.3 TROMP TROMP對于梅毒具有免疫原性，而在TROMPs的表面可能存在著免疫宿主的介導(dǎo)區(qū)和致病力決定區(qū)，在TROMP的表面上存在著17-kDa、28-kDa、31-kDa、45-kDa、65-kDa。其中存在于TP內(nèi)膜原生質(zhì)體復(fù)合物中的主要為17-kDa和45-kDa，而存在于外膜的主要為28-kDa、31-KDa以及65-kDa[7]。在天然重組蛋白質(zhì)中，28-kDa、31-kDa、65-kDa就天然的具有抗原性質(zhì)，28-kDa主要在外膜中進行表達，并且與跨膜蛋白存在著高度相似的序列，65-kDa其整體數(shù)量雖然較少，但是仍然被認定為具有抗原免疫性，而31-kDa被證明具有能夠形成微管的能力，從而被間接的證實為跨膜蛋白。目前國外的相應(yīng)研究已經(jīng)明確，TP分子本身的免疫反應(yīng)能夠產(chǎn)生高滴度的TP抗體，在上述反應(yīng)過程中，TROMPs能夠誘導(dǎo)產(chǎn)生對應(yīng)的抗體。在相關(guān)的實驗中發(fā)現(xiàn)，只有自然的TP感染才能夠產(chǎn)生真正的血清吞噬作用，而使用滅活的Tp重組抗原并不能夠產(chǎn)生真正意義上的血清吞噬作用[8]。在對TROMP1的各項重組實驗中可以發(fā)現(xiàn)，在電子顯微鏡下可以明顯發(fā)現(xiàn)在Tp感染的血清中，TROMP1的表達主要是在重組菌的表面表達，相應(yīng)的實驗還證實對于rTROMP1而言，其定位于E.coil的外膜，并且同時兼有表面抗原性以及微孔體系。

1.4 Tp0155、Tp0751、Tp0483、Tp0453、Tp92 在1998年的實驗中，有學(xué)者發(fā)現(xiàn)對于Tp92而言，其極有可能是Tp的抗原之一，并通過PET-3a T7載體重組表達了Tp92，通過對表達后的Tp92進行相應(yīng)的檢測發(fā)現(xiàn)，Tp92確實具有抗原免疫性[9]。Tp0155、Tp0751、Tp0483、Tp0453都是通過PCR擴增法進行了去除N端信號肽的全長表達，且表達后的這6個蛋白均進行了臨床血清學(xué)的檢測，最后的實驗結(jié)果顯示，對于Tp0155、Tp0751、Tp0483而言，實驗的靈敏度為28%～42%之間，而對于Tp0453而言，其中檢測的靈敏度和特異度均為100%，Tp92的特異度為97%、靈敏度為98%。其中學(xué)者描述了Tp0453的除去兩段端肽的結(jié)構(gòu)，但近些年來的實驗研究則顯示，Tp0453的結(jié)構(gòu)目前與所有已知的外膜蛋白都不相同，Tp0453缺少一種β桶結(jié)構(gòu)，正是因為缺少這種結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致Tp0453無法橫跨外膜，從而避免暴露于Tp的菌體外膜表面[10]。正是因為Tp0453的這種結(jié)構(gòu)特殊性，有學(xué)者認為對于Tp0453極有可能代表一大類的新的細菌外膜蛋白。國內(nèi)有學(xué)者新組了Tp0453并對其進行了臨床評價，最后的實驗結(jié)果顯示，Tp0453應(yīng)該可以被用于ELISA反應(yīng)[11]。

1.5 Tp4D以及TpN37 在1986年的國外學(xué)者的相應(yīng)實驗中就已經(jīng)證實，對于Tp4D而言，其確實具有抗原免疫性，同時相應(yīng)的ELISA法也證實，4D的ELISA能夠檢測到的抗4D特異性抗體為25 ng，且在檢測的靈敏度上可以與免疫熒光法相媲美，但是Tp4D的一個重大缺陷就是存在著與地方性梅毒菌種的一個交叉反應(yīng)[12]。同樣在1986年，國外學(xué)者使用5.6 kb的TpDNA的重組基因的質(zhì)粒做出內(nèi)切酶圖譜后，再成功地轉(zhuǎn)入大腸桿菌內(nèi)進行了表達。利用免疫雜交點的方法對TpN37進行檢測時發(fā)現(xiàn)，對于梅毒二期的血清檢測有效，如果改變檢測的方法，利用放免和酶免的方法進行相應(yīng)的檢驗，TpN37與所有血清中的抗體都能夠發(fā)生反應(yīng)，但唯一的不足是對于陰性對照則沒有反應(yīng)表現(xiàn)出。在兔梅毒模型中，利用兔子血清制作的特異性兔單克隆抗體能夠有效地被TpN37抗原，并且TpN37抗原不會與其他的非致病性的螺旋體發(fā)生反應(yīng)，上述實驗結(jié)果提示對于TpN37而言，其能夠有效的作為血清診斷梅毒的有效抗原[13]。

2 梅毒螺旋體基因重組抗原血清學(xué)診斷的研究進展

有相應(yīng)的臨床大樣本量的實驗研究證實，Tp凝血實驗的最終結(jié)果與利用Tp基因重組抗原的臨床快速檢測在檢測的靈敏度上無顯著統(tǒng)計學(xué)差異。但Tp單一基因重組抗原對于合并了HIV感染，或者是已經(jīng)接受了一段時間的抗梅毒治療的患者，或者是處于潛伏期的梅毒患者而言，其檢測的靈敏度會大大下降，而如果使用多基因重組的Tp重組基因抗原，則其檢測的整體靈敏度將會大大提高，出現(xiàn)的假陰性的比例會大大減小[14]。

2.1 免疫層析實驗的研究進展 利用Tp基因重組的抗原包被膜條測試區(qū)時，當抗原中的IgG/IgM與膜條測試區(qū)域中的標記的抗人IgG/IgM結(jié)合后，結(jié)合后的復(fù)合物最終層析到膜條測試區(qū)與特異抗原結(jié)合后所呈現(xiàn)出來的顯色標記就為陽性反應(yīng)標記[15]。在TPHA的評價標準下，有學(xué)者將4種不同國家生產(chǎn)的免疫層析試劑盒用來進行評價，結(jié)果這4個國家的免疫層析試劑盒的最終檢測結(jié)果顯示，不論是在全血還是在血清檢測的敏感性上，都取得了良好的結(jié)果，上述的實驗結(jié)果讓人相信在不遠的將來，免疫層析實驗將有可能取代傳統(tǒng)的篩查實驗。

2.2 Tp-ELISA的研究進展 在目前的Tp-ELISA研究中，聚苯乙烯反應(yīng)板微孔在被Tp重組基因抗原包被，且抗人IgG/IgM在被酶標記的情況下，可以有效的對Tp的IgG/IgM進行檢測。在雙抗原夾心的ELISA法中，酶和反應(yīng)板均對Tp重組的酶抗原進行了標記。在利用Tp的3種組合表達蛋白，TpN15、TpN17、TpN47的ELISA檢測實驗與性病研究實驗、熒光密螺旋體抗體吸收試驗以及TPHA實驗的檢測靈敏度、特異度相比，利用Tp的3種組合表達蛋白，TpN15、TpN17、TpN47的ELISA檢測實驗的對處于不同分期的梅毒患者的檢測的靈敏度、特異度均要顯著高于其他3種方法。而國外學(xué)者在利用重組的TpN17-15-ELSIA法與WB、以及THBA法相比，在對正常人和含有疾病的2950份血清的檢測中，TpN17-15-ELSIA法與WB法均未出現(xiàn)交叉反應(yīng)，而THBA法則出現(xiàn)了交叉反應(yīng)[16]。而在對Tp多基因嵌合重組抗原與Tp單基因重組抗原的平行檢測中發(fā)現(xiàn)，Tp多基因嵌合重組抗原檢測的靈敏性要顯著高于Tp單基因重組抗原，在對雙抗原夾心ELISA法與間接ELISA法的比較中，雙抗原夾心ELISA法的檢測準確性要顯著優(yōu)于間接ELISA法。而目前在投入商業(yè)化使用的Tp重組基因的ELSIA法檢測試劑盒中，其檢測的靈敏度和特異度均為100%。

2.3 快速乳膠凝集試驗 在實驗的原理上，快速乳膠凝集試驗的基本原理與Tp的顆粒凝集試驗相似。在臨床實驗中，有學(xué)者利用TpN15、TpN17、TpN47作做為抗原，利用快速乳膠凝集試驗法快速檢測了1518份隨機得來的血清樣本，將檢測的實驗結(jié)果同VDRL法的特異度進行檢測，并同時期檢測99分梅毒血清樣本，最后的實驗結(jié)果顯示，快速乳膠凝集試驗與VDRL法檢測的特異度并無顯著的統(tǒng)計學(xué)差異[17]。上述的實驗結(jié)果提示，在梅毒的篩查中可以考慮使用快速乳膠凝集試驗。

2.4 CLIA法 CLIA法的中文名稱為化學(xué)發(fā)光免疫分析，其基本原理為將固相抗原設(shè)定為Tp基因重組抗原，利用HRP對第二抗原進行標記，同時使用含魯米諾或者是其對應(yīng)的增強劑作為示蹤劑，通過最后測量其發(fā)光數(shù)值的方法來進行檢測。我國學(xué)者通過使用TpN15、TpN17、TpN47作為對應(yīng)的酶標抗原和固相抗原，成功的建立了基于Tp為雙抗原夾心的CLIA法，通過與TRUST、TPPA、TPHA、Tp-ELISA法平行的檢測Tp抗體檢測分別呈陽性和陰性的血清，結(jié)果最后的實驗結(jié)果顯示這4種方法的陽性檢測率和陰性檢測率均無顯著的統(tǒng)計學(xué)差異[18]。

2.5 WB法 將Tp的重組基因抗原通過SDS-PAGE通過電印轉(zhuǎn)印到PVDF膜上，再與待檢測的血清進行檢測后通過酶標記抗人的IgG/IgM。其實驗的基本原理為，如果待檢測的血清中存在TpN15、TpN17、TpN42、 TpN47、TpN37等抗體，則加酶的底物可以出現(xiàn)反應(yīng)，并且能夠顯色。有國外學(xué)者將rpN47、rTpNl7、rTpNl5、rTpN42、rTpN37這5種多肽進行重組建立recWB法，并與MHA-Tp以及wclWB對比進行梅毒血清的檢測，相應(yīng)的實驗結(jié)果顯示，在各項綜合指標的評價中，recWB法要顯著優(yōu)于wclWB法[19]。

目前部分Tp重組基因的抗原已經(jīng)應(yīng)用于臨床梅毒的檢測中，其中涉及的Tp基因重組的抗原主要為TpN15、TpN17、TpN47，在初期使用的Tp基因重組抗原多為單一基因的抗原，現(xiàn)在則多為多基因嵌合的抗原，雖然對于各期梅毒的檢查靈敏度和特異度得到了極大的提高，但是仍然存在著較大的不足，且在實際中對于何種Tp抗原的檢測結(jié)果更為準確，仍然存在著較大的爭議[20]。目前隨著免疫學(xué)技術(shù)的不斷進步與發(fā)展，已經(jīng)逐步能夠解決難以從Tp中純化的微量蛋白數(shù)量問題，并已經(jīng)能夠?qū)ζ渚唧w的作用機制展開相應(yīng)的研究。這也意味著，Tp基因重組抗原應(yīng)用于梅毒的檢測中的前景更為廣闊。

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