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超臨界二氧化碳萃取法和膜分離法使用設(shè)備昂貴、成本高，不適合規(guī)模化生產(chǎn)；無機(jī)鹽復(fù)合沉淀法收率低，且產(chǎn)品有重金屬殘留；溶劑萃取法和電解質(zhì)水溶液法成本低、產(chǎn)量大，易于實(shí)現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)。因此本工作欲將溶劑萃取法和電解質(zhì)水化法結(jié)合起來，即先用飽和食鹽水對皂腳進(jìn)行破乳，再用乙醚提取磷脂，經(jīng)驗(yàn)證本方法所得粗磷脂純度和收率較高，切實(shí)可行。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)材料、試劑與儀器

1.1.1材料與試劑棉油皂腳：石河子康隆油脂工貿(mào)有限公司，鉬藍(lán)比色法測定磷脂含量為21.05%；丙酮、乙醚、氯化鈉、氫氧化鉀、95%乙醇、鉬酸鈉、硫酸聯(lián)胺、氧化鋅、磷酸二氫鉀：分析純。

1.1.2主要儀器及設(shè)備UV-2401PC紫外-可見分光光度計(jì)：日本島津公司；真空冷凍干燥器：英國Edwards公司；BP211D十萬分之一電子分析天平：德國Staotious公司；N-1001V旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀：德國EYELA公司；Anke-40B低速大容量離心機(jī)：上海安亭科學(xué)儀器廠；SX-2.5-10型馬弗爐：湖北英山電爐廠。

1.2磷脂含量測定方法的建立皂腳和粗磷脂中磷脂含量測定方法的建立參照(GB/T5537—2008)鉬藍(lán)比色法進(jìn)行。

1.3棉油皂腳中磷脂提取方法的優(yōu)選

1.3.1乙醇-乙醚法取100g棉油皂腳，加適量95%乙醇，攪拌均勻，室溫放置24h，加入適量乙醚，調(diào)節(jié)乙醇與乙醚的比例為3:1，再放置24h，過濾，濾渣再以適量乙醇和乙醚(體積比為3:1)的混和溶液浸漬24h，過濾并合并2次所得的濾液，旋蒸濃縮至小容量，濃縮物用體積比為1.5倍的乙醚溶解，加入4倍量的丙酮沉淀，抽濾，用丙酮洗滌3次，冷凍干燥，得粗磷脂。

1.3.2飽和食鹽水-乙醚法取100g棉油皂腳，加入適量飽和食鹽水，攪拌均勻，再加適量乙醚，攪拌均勻，室溫提取2h，以4000r/min離心15min，收集上層乙醚液，濃縮回收乙醚，濃縮物用體積比為1.5倍的乙醚溶解，再加體積比為4倍的丙酮沉淀，抽濾，用丙酮洗滌沉淀3次，冷凍干燥，得粗磷脂。1.3.3乙醚直接提取法除不加飽和食鹽水外，其余與1.3.2完全一致。

1.4正交試驗(yàn)在單因素研究的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步采用正交試驗(yàn)考察皂腳與乙醚質(zhì)量體積比(A)、皂腳與飽和食鹽水質(zhì)量體積比(B)、丙酮與濃縮物體積比(C)3個(gè)因素對磷脂提取效果的影響，以磷脂提取率為指標(biāo)，采用L9(34)正交表安排試驗(yàn)。

2結(jié)果與討論

2.1磷脂含量測定方法的建立以吸光度y為縱坐標(biāo)，含磷量x為橫坐標(biāo)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線為y=5.8218x+0.0132，在0.02~0.14mg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，R為0.9998，平均加樣回收率為100.26%，RSD小于2%。

2.2棉油皂腳中磷脂提取方法的優(yōu)選飽和食鹽水-乙醚法之所以優(yōu)于其他2種方法，是因?yàn)轱柡褪雏}水的加入破壞了皂腳的乳化狀態(tài)。皂腳是由中性油、磷脂、皂基、水等組成的混合物，磷脂又是良好的表面活性劑，具有較強(qiáng)的乳化能力，使皂腳處于乳化狀態(tài)，飽和食鹽水的加入，破壞了這種乳化狀態(tài)，使磷脂和其他成分分離開來，故提取率較高。

2.3飽和食鹽水-乙醚法單因素試驗(yàn)

2.3.1飽和食鹽水加入量對磷脂提取效果的影響取5份皂腳，每份30g，分別按皂腳與飽和食鹽水質(zhì)量體積比為30:0、30:3、30:6、30:9、30:12加入飽和食鹽水，皂腳與乙醚質(zhì)量體積比為1:2，室溫提取2h，乙醚與濃縮物體積比為3:2，丙酮與濃縮物體積比為4:1。飽和食鹽水對磷脂收率影響很大，飽和食鹽水加入過少時(shí)，破乳不完全，過多時(shí)，在皂腳內(nèi)部又會形成局部的W/O或O/W乳化現(xiàn)象，使得在離心時(shí)磷脂和中性油難以分離。當(dāng)皂腳與飽和食鹽水質(zhì)量體積比為30:3時(shí)，其破乳效果最好，收率最高，為68.92%。因此，皂腳與飽和食鹽水加入體積的最佳比例為30:3。

2.3.2乙醚加入量(用于溶解皂腳)對磷脂提取效果的影響取5份皂腳，每份30g，皂腳與飽和食鹽水質(zhì)量體積比30:3，分別按皂腳與乙醚質(zhì)量體積比為1:1、1:2、1:3、1:4、1:5加入乙醚，室溫提取2h，乙醚與濃縮物體積比為3:2，丙酮與濃縮物體積比為4:1。磷脂提取率在皂腳與乙醚質(zhì)量體積比為1:2之前增加較快，之后增加緩慢，在1:4時(shí)提取率達(dá)到最高，且1:2與1:3和1:4時(shí)相比，其提取率相當(dāng)。所以，從節(jié)約成本的角度分析，選擇皂腳與乙醚質(zhì)量體積比為1:2時(shí)較為經(jīng)濟(jì)。

2.3.3提取時(shí)間對磷脂提取效果的影響取5份皂腳，每份30g，皂腳與飽和食鹽水質(zhì)量體積比30:3，皂腳與乙醚質(zhì)量體積比為1:2，提取時(shí)間分別為1、3、5、7、9h，室溫提取，乙醚與濃縮物體積比為3:2，丙酮與濃縮物體積比為4:1。提取時(shí)間對磷脂提取率影響不大，當(dāng)提取時(shí)間為3h時(shí)，提取率最高，達(dá)73.83%，延長提取時(shí)間，提取率又逐漸降低。其原因可能是磷脂發(fā)生了部分氧化，導(dǎo)致提取率降低。故取最佳提取時(shí)間為3h。

2.3.4丙酮加入量對磷脂提取效果的影響取5份皂腳，每份30g，皂腳與飽和食鹽水質(zhì)量體積比30:3，皂腳與乙醚質(zhì)量體積比為1:2，室溫提取3h，乙醚與濃縮物體積比為3:2，按丙酮與濃縮物體積比為3:1、4:1、5:1、6:1、7:1加入丙酮。丙酮量加入較少時(shí)，磷脂沉淀不完全，當(dāng)丙酮與濃縮物體積比5:1時(shí)，磷脂沉淀較為完全，繼續(xù)加入丙酮，提取率反而下降，其原因可能是沉淀下來得磷脂又發(fā)生了部分溶解，說明雖然磷脂不溶于丙酮，但過量的丙酮還是會使磷脂發(fā)生少量的溶解。因此，丙酮與濃縮物最佳體積比為5:1。

2.3.5乙醚加入量(用于溶解濃縮物)對磷脂提取效果的影響取5份皂腳，各30g，皂腳與飽和食鹽水質(zhì)量體積比30:3，皂腳與乙醚質(zhì)量體積比為1:2，室溫提取3h，按乙醚與濃縮物體積比為1:1、3:2、2:1、2.5:1、3:1加入乙醚，丙酮與濃縮物體積比為5:1。當(dāng)丙酮加入量一定時(shí)，乙醚加入量越多，溶解的雜質(zhì)和磷脂越多，所以其提取率降低，磷脂純度反而逐漸升高。綜合磷脂純度和提取率兩指標(biāo)，乙醚與濃縮物最佳體積比為3:2。

2.4正交試驗(yàn)按照L9(34)正交表進(jìn)行試驗(yàn)，測定并計(jì)算磷脂提取率，結(jié)果用極差法及方差分析法進(jìn)行分析，結(jié)果見表3及表4。從表3極差分析可知，各個(gè)因素對磷脂提取率的影響順序?yàn)锽>C>A，即飽和食鹽水加入量>丙酮加入量>乙醚加入量。由直觀分析可知最佳提取工藝為A3B2C3，即皂腳與乙醚質(zhì)量體積比為1:3、皂腳與飽和食鹽水質(zhì)量體積比為30:3、丙酮與濃縮物體積比為5:1，和單因素考察結(jié)果相符。從方差分析表可以看出，飽和食鹽水加入量及丙酮加入量對磷脂提取效果影響顯著，乙醚加入量與皂腳的體積質(zhì)量比對磷脂提取效果具有一定影響，但影響較弱，沒有顯著性。綜合單因素考察及直觀分析，得出自棉油皂腳中磷脂提取的最佳工藝參數(shù)為：皂腳與飽和食鹽水質(zhì)量體積比為30:3，皂腳與乙醚質(zhì)量體積比為1:3，室溫提取3h，乙醚與濃縮物體積比為3:2，丙酮與濃縮物體積比為5:1。

2.5驗(yàn)證試驗(yàn)采用以上確定的最佳條件進(jìn)行3次驗(yàn)證試驗(yàn)，結(jié)果見表5。磷脂平均提取率為78.52%，RSD值小于2%。

3結(jié)論

通過對3種磷脂提取方法的比較，得出飽和食鹽水-乙醚法是提取棉油腳磷脂的最優(yōu)方法，其粗磷脂的純度為41.35%，提取率為67.65%。通過對飽和食鹽水-乙醚法進(jìn)行單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)，得出自棉油皂腳中提取磷脂的最佳工藝條件：皂腳與飽和食鹽水質(zhì)量體積比為30:3，皂腳與乙醚質(zhì)量體積比為1:3，室溫提取3h，乙醚與濃縮物體積比為3:2，丙酮與濃縮物體積比為5:1。本工藝成本低廉，工藝簡單，操作方便，使皂腳能進(jìn)一步得到開發(fā)利用。

作者：趙紅濤，唐輝，應(yīng)雪劉艷芳，賈蔓箐單位：石河子大學(xué)藥學(xué)院，新疆特種植物藥資源教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室