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【摘要】建立復(fù)方夏枯草膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法用薄層色譜法鑒定黃芩、鉤藤等；用HPLC法對(duì)夏枯草中熊果酸進(jìn)行含量測定。結(jié)果薄層圖譜斑點(diǎn)清晰，陰性對(duì)照無干擾。夏枯草中熊果酸在0.473～3.5μg（r=0.9992）范圍內(nèi)，對(duì)照品濃度與峰面積呈良好的線性關(guān)系，平均回收率為98.79％，RSD1.27％。結(jié)論該質(zhì)量控制方法簡便可行，精密度高，重現(xiàn)性好，可用于復(fù)方夏枯草膠囊質(zhì)量控制。

【關(guān)鍵詞】復(fù)方夏枯草膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)TLCHPLC

【Abstract】ObjectiveToestablishthequalitystandardforFufangXiakucaoCapsule.MethodsQualitativeanalysisofBaicalin,UncariarhynchophyllaJackswereidentifiedbyTLCandthecontentsofUrsolicacidinPrunellavulgarisL.wasdeterminedbyHPLC．ResultsThespotsintheTLCwereclearandidentifiedwithouttheinterferenceofnegativecontrol.ThelinearrangeofUrsolicacidwas0.473～3.5μg（r=0.9992）．Theaveragerecoveryratewas98.79％wihRSD1.27％．ConclusionThemethodsaresimple，feasible，accurate,withgoodreproducibilityandcanbeusedforthequalitycontrolofFufangXiakucaoCapsule．

【Keywords】FufangXiakucaoCapsule;qualitystandard;TLC;HPLC

復(fù)方夏枯草膠囊是在臨床驗(yàn)方基礎(chǔ)上研制的治療高血壓病的中藥復(fù)方制劑，由夏枯草、黃芩、鉤藤等藥味配伍而成，組方中夏枯草、黃芩均為重要組成，夏枯草中含有熊果酸成分，具有鎮(zhèn)靜、抗菌、抗炎等作用；黃芩主要功用為抗炎、降壓、鎮(zhèn)靜，主要有效成分以黃酮類化合物黃芩苷為主。因此，制訂復(fù)方夏枯草膠囊中黃芩等的定性標(biāo)準(zhǔn)及熊果酸的定量標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)確保該產(chǎn)品的臨床療效有重要的意義。為有效控制本品質(zhì)量，采用TLC鑒別黃芩、鉤藤；用HPLC法測定熊果酸的含量，保證測定的專屬性和結(jié)果的準(zhǔn)確性。

1儀器與試藥

采用Waters高效液相色譜系統(tǒng)；CAMAG（瑞典）薄層色譜掃描儀；Waters2487雙波長紫外檢測器。

復(fù)方夏枯草膠囊為青島國風(fēng)藥業(yè)股份有限公司提供，陰性對(duì)照樣品為自制。熊果酸標(biāo)準(zhǔn)品（批號(hào)：0742-9706）；黃芩苷標(biāo)準(zhǔn)品（批號(hào)120955-200406）；鉤藤對(duì)照藥材（121190-200402），均由中國藥品生物制品檢定所提供。硅膠G（青島海洋化工廠）；甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純；水為重蒸餾水。

2方法與結(jié)果

2.1鉤藤的鑒別［3］取本品內(nèi)容物2g，加入濃氨試液10ml使溶解，用三氯甲烷60ml加熱回流1h，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)?%鹽酸溶液20ml使溶解，用濃氨試液調(diào)pH至堿性，再用乙醚提取3次，每次20ml，合并乙醚液，揮干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液。同法制除鉤藤外的陰性對(duì)照液。另取鉤藤對(duì)照藥材2g，同法制成對(duì)照藥材溶液。吸取上述三種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-乙酸丁酯-氨水（18：3：0.2）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365nm）下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對(duì)照無干擾。見圖1。

圖1鉤藤色譜圖

注：1,3.樣品2.鉤藤對(duì)照藥材4.陰性對(duì)照

2.2黃芩的鑒別取本品內(nèi)容物2g，加無水乙醇回流提取1h，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)?%硫酸溶液10ml使溶解，用乙酸乙酯提取3次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，水浴蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液。同法制備除黃芩外的陰性對(duì)照液。再取黃芩苷對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。吸取上述三種溶液各3μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-正丁醇-甲酸-水（15：3：1：2）為展開劑展開，取出，晾干，置紫外光燈（365nm）下檢視，再噴以2%三氯化鐵乙醇溶液顯色，日光下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對(duì)照液無相同斑點(diǎn)。見圖2。

圖2黃芩苷色譜圖

注：1，3.樣品液2.黃芩苷對(duì)照品4.陰性液

2.3熊果酸含量測定［2］

2.3.1色譜條件色譜柱：chromasilC18（規(guī)格4．6mm×200mm,5μm）；流動(dòng)相：甲醇-水（85：15），檢測波長210nm，進(jìn)樣量20μl。理論塔板數(shù)按熊果酸峰計(jì)算應(yīng)不低于4000。樣品測定色譜圖見圖3。

圖3熊果酸含量測定的HPLC圖譜

注：A：樣品B：對(duì)照品C：陰性對(duì)照溶液

2.3.2對(duì)照品溶液的制備精密稱取熊果酸對(duì)照品，用甲醇將其定容至刻度，搖勻，制成濃度為20μg／ml對(duì)照品溶液。

2.3.3供試品溶液制備取膠囊內(nèi)容物粉末約0.5g，精密稱定，置索氏提取器中，加乙醚適量，加熱回流4h，放冷，溶劑揮干，殘?jiān)檬兔眩?0～90℃）浸泡2次，每次15ml，每次2min，傾出石油醚液，殘?jiān)鼡]干殘留溶劑，用甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至50ml量瓶中，搖勻，濾過，即得。

2.3.4測定方法分別精密吸取對(duì)照品，供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀，測定，即得。含熊果酸不得少于0.42％。本品每粒含夏枯草以熊果酸（C30H48O3）計(jì)，不得少于1.89mg。

2.3.5線性關(guān)系考察精密稱取熊果酸對(duì)照品適量，加甲醇稀釋成200μg／ml,精密吸取此對(duì)照品溶液1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、4.0ml置10ml容量瓶中，用甲醇稀釋到刻度，搖勻，分別取20μl進(jìn)樣測定，按上述色譜條件測定峰面積，回歸方程為：Y=235711X＋4863，r=0．9992，結(jié)果表明熊果酸在0．473～3.5μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.3.6精密度試驗(yàn)將對(duì)照品儲(chǔ)備液稀釋10倍后精密吸取20μl，連續(xù)進(jìn)樣5次，測定峰面積，其RSD為1.23％。結(jié)果表明該色譜條件精密度良好。

2.3.7重復(fù)性試驗(yàn)取同一批號(hào)樣品5份，按上述條件測定，結(jié)果樣品中熊果酸平均含量為0.754％，RSD值為1.75％。

2.3.8穩(wěn)定性試驗(yàn)將對(duì)照品儲(chǔ)備液稀釋10倍后精密吸取對(duì)照品溶液20μl，室溫下放置，每隔一定時(shí)間進(jìn)樣一次，測定24h內(nèi)峰面值，熊果酸含量的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.42％。結(jié)果表明室溫下供試品溶液較穩(wěn)定。

2.3.9加樣回收率測定取已知熊果酸含量（0.754％）的供試品溶液6份，分別精密加入一定量的熊果酸對(duì)照品，按上述含量測定項(xiàng)下的方法測定，結(jié)果見表1。平均回收率為98.79％，RSD值為1.27％。表1加樣回收率試驗(yàn)測定結(jié)果

2.3.10樣品測定分別取本品內(nèi)容物粉末，精密稱定，然后按上述方法制備供試品溶液，分別精密吸取20μl，按上述色譜條件測定，計(jì)算熊果酸的含量。結(jié)果熊果酸平均含量為0.739％。見表2。表2含量測定結(jié)果

3討論

本品系多味中藥組成的復(fù)方制劑，其中夏枯草為方中君藥。為準(zhǔn)確測定熊果酸的含量，參考藥典及相關(guān)文獻(xiàn)資料，曾進(jìn)行了薄層掃描法與高效液相法比較，最終確定HPLC法的色譜條件及測定方法，并進(jìn)行了方法學(xué)考察，結(jié)果表明熊果酸吸收峰靈敏度較高，分離較為理想，陰性對(duì)照液測定顯示在熊果酸出峰位置處無其他干擾，保證了檢測的準(zhǔn)確性。文中鉤藤的薄層鑒別，經(jīng)多次實(shí)驗(yàn)此方法提取效果好，展開系統(tǒng)也曾嘗試用乙酸乙酯-丁酮-氨水等，但不能得到很好的分離，后經(jīng)優(yōu)化采用氯仿-乙酸丁酯-氨水，取得較滿意的層析效果。黃芩苷的薄層鑒別經(jīng)實(shí)驗(yàn)比較，以硅膠G板代替藥典的聚酰胺薄膜法，采用文中所述展開系統(tǒng)，結(jié)果斑點(diǎn)清晰，可以有效分離，且陰性無干擾。

【參考文獻(xiàn)】

1國家藥典委員會(huì)．中國藥典，一部．北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005，198．

2閆雪生，劉青松.高效液相色譜法測定中藥中熊果酸的含量.臨床與試驗(yàn)研究，2005，3（5）：4-6.

3鄭琴，潘革.正天丸中鉤藤的薄層色譜鑒別方法改進(jìn).中國藥師，2003，6（4）：248-249.