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刺猬的擁抱范文第1篇

【關(guān)鍵詞】礦用；隔爆型真空可逆電磁啟動器；保養(yǎng)；維修

【分類號】：TM615

一、礦用隔爆型真空可逆電磁啟動器的維修原理

1、根據(jù)電路及工作原理查找故障范圍

弄清楚被檢修電路、設(shè)備的結(jié)構(gòu)和工作原理，是循序漸進(jìn)、避免盲目檢修的前提。查找故障時，先從主電路入手，看換向器合、分是否正常，然后檢查主電路的觸頭系統(tǒng)、熱元件、熔斷器及線路本身是否有故障，接著根據(jù)主電路與控制電路的控制關(guān)系，檢查控制回路的線路接頭、自鎖或連鎖觸點、電磁線圈是否正常，PLC的輸入、輸出電壓是否正常，從而找出故障部位。如能通過直觀檢查發(fā)現(xiàn)故障點，如 PLC 的指示、線圈脫落、觸頭（點）、線圈燒毀等，則檢修速度更快。

2、從控制電路動作程序檢查故障范圍

通過直觀觀察無法找到故障點，斷電檢查仍未找到故障時，可對電氣設(shè)備進(jìn)行通電檢查。通電檢查前要先切斷主電路，將控制器和轉(zhuǎn)換開關(guān)置于零位，然后用萬用表檢查電源電壓是否正常，有沒有缺相或嚴(yán)重不平衡。進(jìn)行通電檢查的順序為先檢查主電路，后查控制電路；先檢查交流系統(tǒng)、后檢查直流系統(tǒng)；通電檢查控制電路的動作順序，觀察各元件的動作情況，或斷開隔離開關(guān)，取下所有熔斷器，然后按順序逐一插入要檢查部位的熔斷器，合上開關(guān)，觀察各電氣元件是否按要求動作。

3、利用儀表檢查

在煤礦電氣修理中，對于隔離開關(guān)的分合是否到位，觸頭（點）的接觸電阻等是否正常，對于工作電壓、控制回路部分電壓等可用萬用表檢查；對線路、主回路的元件的有關(guān)絕緣電阻，可用兆歐表檢查。利用儀表檢查電路或電器的故障具有速度快、判斷準(zhǔn)確、故障參數(shù)可量化等優(yōu)點，因此，在電氣設(shè)備維修中應(yīng)充分發(fā)揮儀表檢查故障的作用。正確的使用電工儀表是準(zhǔn)確確定故障點的一種行之有效的檢查方法。常用的測試工具和儀表有校驗燈、測電筆、萬用表、鉗形電流表、兆歐表等，主要通過對電路進(jìn)行帶電或斷電時的有關(guān)參數(shù)如電壓、電阻、電流等的測量，來判斷電器元件的好壞、設(shè)備的絕緣情況以及線路的通斷情況。在用測量法檢查故障點時，一定要保證各種測量工具和儀表完好，使用方法正確，還要注意防止感應(yīng)電、回路電及其他并聯(lián)支路的影響，以免產(chǎn)生誤判斷。常用的測量方法有：

（1）電壓分階段測量法。設(shè)備回路（包括控制回路）在通電的情況下，用萬用表電壓檔（注意交直流選擇）以測量電壓的方式，根據(jù)電壓數(shù)值來分析判斷電路的故障情況?？梢允菑膬啥藴y量（端電壓），也可以是回路當(dāng)中的某個點對地電壓測量，具體要根據(jù)原理圖分析判斷。

（2）電阻分階段測量法。

（3）短接法。

4、機(jī)械故障的檢查

在礦用隔爆電磁啟動器控制線路中，有些動作是由電信號發(fā)出指令，由機(jī)械機(jī)構(gòu)執(zhí)行驅(qū)動的。如 KBZ-630/500、400 低壓饋電開關(guān)。如果機(jī)械部分的連鎖機(jī)構(gòu)、傳動裝置及其他動作部分發(fā)生故障，即使電路完全正常，設(shè)備也不能正常運行。在檢修中，應(yīng)注意機(jī)構(gòu)故障的特征和表現(xiàn)，探索故障發(fā)生的規(guī)律，找出故障點，并排除故障。在煤礦井下生產(chǎn)過程中由于環(huán)境因素，開關(guān)控制線路中，可能發(fā)生故障的線路和電器較多。有的明顯，有的隱蔽；有的簡單，易于排除；有的復(fù)雜，難于檢查。在檢修故障時，應(yīng)靈活使用上述修理方法，及時排除故障，確保生產(chǎn)的正常進(jìn)行。檢修中注意書面記錄，積累有關(guān)資料，不斷總結(jié)經(jīng)驗，提高修理能力。

三、礦用隔爆型真空可逆電磁啟動器的維修方法

1、經(jīng)驗法

（1）彈壓活動部件法：主要用于活動部件，如接觸器的銜鐵、繼電器、按鈕等。通過反復(fù)彈壓活動部件，使活動部件靈活，同時也使一些接觸不良的觸頭產(chǎn)生摩擦，達(dá)到接觸導(dǎo)通的目的。

（2）元件替換法：對于值得懷疑的元件，可采用替換的方法進(jìn)行驗證。如果故障依舊，說明故障點懷疑不準(zhǔn)，可能該元件沒有問題。但如果故障排除，則與該元件相關(guān)的電路部分存在故障，應(yīng)加以確認(rèn)。在實際維修中，根據(jù)具體情況，選擇合適的方法。

2、檢測法

檢測法是指采用儀器儀表作為輔助工具對煤礦電氣線路故障進(jìn)行判斷的檢修方法。由于儀器儀表種類很多，且有日新月異之勢，故檢測法發(fā)展很快，準(zhǔn)確率大大提高，手段也日益增多。例如我們使用的 ds-11 的多功能測試儀，可以由儀器對接觸器的三相同步、線路板、綜合保護(hù)器等進(jìn)行檢測，據(jù)有關(guān)部門提供的數(shù)據(jù)，故障查找率在 90%以上。但比較常用、比較實用的方法仍為利用萬用表、兆歐表和電流表對電路進(jìn)行測試。電路在通電測試時，根據(jù)變壓器的輸出不同，各點之間的電壓也不同。由此測出不同元件的工作情況，找出故障點。

三、礦用隔爆型真空可逆電磁啟動器的修復(fù)與保養(yǎng)

當(dāng)找出真空電磁啟動器設(shè)備的故障點后，就要著手進(jìn)行修復(fù)、試運轉(zhuǎn)、記錄等，然后交付使用，但必須注意以下事項：

1、在找出故障點和修復(fù)故障時，應(yīng)注意不能把找出的故障點作為尋找故障的終點，還必須進(jìn)一步分析查明產(chǎn)生故障的根本原因。

2、找出故障點后，一定要針對不同故障情況和部位采取正確的修復(fù)方法。

3、在故障點的修理工作中，一般情況下應(yīng)盡量做到復(fù)原。

4、電氣故障修復(fù)完畢，需要通電試運行時，應(yīng)和操作者配合，避免出現(xiàn)新的故障。

5、每次排除故障后，應(yīng)及時總結(jié)經(jīng)驗，并做好維修記錄。記錄的內(nèi)容包括：工業(yè)機(jī)械的型號、名稱、編號、故障發(fā)生的日期、故障現(xiàn)象、部位、損壞的電器、故障原因、修復(fù)措施及修復(fù)后的運行情況等。記錄的目的：作為檔案以備日后維修時參考。并通過對歷次故障的分析，采取相應(yīng)的有效措施，防止類似事故的再次發(fā)生或?qū)﹄姎庠O(shè)備本身的設(shè)計提出改進(jìn)意見等。

四、結(jié)束語

總而言之，要想做好礦用隔爆型真空可逆電磁啟動器的修復(fù)與保養(yǎng)工作，就應(yīng)該熟悉了解啟動器本身的結(jié)構(gòu)原理，當(dāng)出現(xiàn)故障時，通過望、問、摸、聞、聽、切來了解故障前后的操作情況和故障發(fā)生后出現(xiàn)的異常現(xiàn)象，根據(jù)故障現(xiàn)象判斷出故障發(fā)生的部位，借助檢測儀表，不斷積累經(jīng)驗，我們即可準(zhǔn)確地判斷井下防爆開關(guān)的故障，并給予快速排除故障，確保生產(chǎn)活動的正常進(jìn)行。

參考文獻(xiàn)：

[1]常衛(wèi)星. 可逆真空磁力啟動器故障原因及檢修的探討[J]. 河北煤炭，2012，02：39-40+44.

刺猬的擁抱范文第2篇

樹突狀細(xì)胞（dendritic cell，DC）是已知功能最強的抗原呈遞細(xì)胞，是機(jī)體T淋巴細(xì)胞特異免疫應(yīng)答的直接啟動和調(diào)控者，在機(jī)體的抗腫瘤免疫應(yīng)答中發(fā)揮著重要作用。在體外培養(yǎng)DC并用腫瘤抗原致敏后，攜帶腫瘤抗原信息的DC，在體內(nèi)外激活針對該腫瘤細(xì)胞的特異性殺傷細(xì)胞。本試驗在體外用人胃癌細(xì)胞SGC提取腫瘤抗原致敏DC后誘導(dǎo)CIK，通過其對SGC的殺傷作用的研究為DC治療胃癌的研究提供理論及試驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 主要試劑

SGC由福建省腫瘤醫(yī)院分子生物學(xué)研究室提供；rhIL?鄄2、rhIL?鄄4、CD3 mAb購自Peprotech公司；rhGM?鄄CSF、Ficoll淋巴細(xì)胞分離液購自軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院；胎牛血清(超級)購自杭州四季青生物制品公司；人AB血清由福建省血液中心提供；1640培養(yǎng)基購自Gibco公司；FITC標(biāo)記的小鼠抗人CD83、HLA?鄄DR、CD14、CD86及同亞型對照抗體購于晶美生物工程有限公司。

1.2 方 法

1.2.1 SGC的培養(yǎng)

SGC在5％CO2、37℃條件下，用含有10％胎牛血清RPMI1640培養(yǎng)液常規(guī)培養(yǎng)。

1.2.2 腫瘤細(xì)胞總蛋白的獲取

將培養(yǎng)貼壁腫瘤細(xì)胞用胰酶消化懸浮，離心棄上清，用無血清RPMI1640培養(yǎng)液重懸，超聲破膜，30 000r/min超速離心90min，取上清。濃縮透析，調(diào)整蛋白濃度為25mg/ml，經(jīng)0.22μm濾膜濾過除菌，－80℃保存。

1.2.3 DC的培養(yǎng)[1]

無菌條件下采集的正常人抗凝外周全血，經(jīng)淋巴細(xì)胞分離液梯度離心，獲取單個核細(xì)胞，用含10%AB血清的RPMI1640懸浮細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞濃度至5×107/ml，加1ml至6孔板內(nèi)培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2h，吸掉上清，用培養(yǎng)液洗去非黏附細(xì)胞，獲得貼壁細(xì)胞，每孔再加入3ml 含有rhIL?鄄4 （500U/ml）及rhGM?鄄CSF（500μg/ml）的10%AB血清的RPMI1640培養(yǎng)液，2~3d半量換液1次。

1.2.4 抗原負(fù)載DC及表型鑒定

將上述培養(yǎng)5d的DC 用含有rhIL?鄄4 （500U/ml）及rhGM?鄄CSF（500μg/ml）的10%AB血清的RPMI1640培養(yǎng)液調(diào)整細(xì)胞濃度為1×106/ml，向6孔板內(nèi)加入2ml的細(xì)胞，每孔加入腫瘤細(xì)胞總蛋白1ml（25mg），于第8d收集懸浮細(xì)胞為抗原致敏的DC。對照組加入無血清RPMI1640培養(yǎng)液1ml，于第8d收集懸浮細(xì)胞為空白的DC。分別收集第1d、第5d及第8d抗原致敏的DC，用流式細(xì)胞儀檢測DC表面分子HLA?鄄DR、CD83、CD86、CD14表達(dá)。

1.2.5 CIK的培養(yǎng)[2]

同前法從外周血中獲取單個核細(xì)胞，用含10%AB血清的RPMI1640懸浮細(xì)胞，37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2h，取懸浮細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞數(shù)為1×106/ml，用含有IL?鄄2(250U/ml)、CD3 mAb (50μg/L)的10%AB血清的RPMI1640培養(yǎng)液培養(yǎng)，2~3d半量換液1次至第8d。試驗組用將其分別與空白的DC及抗原致敏的DC 按10：1比例相混，用含有IL?鄄2(250U/ml)、CD3 mAb( 50μg/L)的10%AB血清的RPMI1640培養(yǎng)液在6孔板內(nèi)培養(yǎng)。對照組僅用含有IL?鄄2(250U/ml)、CD3 mAb (50μg/L)的10%AB血清的RPMI1640培養(yǎng)液在6孔板內(nèi)培養(yǎng)。5d后分別獲取抗原致敏DC誘導(dǎo)CIK，空白的DC誘導(dǎo)CIK及CIK為效應(yīng)細(xì)胞。

1.2.6 混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)（MLR）

試驗組收集成熟經(jīng)抗原致敏及空白的DC，用含有IL?鄄2(250U/ml)、CD3 mAb (50μg/L)10%AB血清的RPMI1640調(diào)整細(xì)胞數(shù)為1×106/ml。收集同時期培養(yǎng)的CTK用同樣的培養(yǎng)液調(diào)整細(xì)胞數(shù)為1×107/ml。將100μlCIK分別與100μl經(jīng)抗原致敏及空白的DC在96孔培養(yǎng)板中混合培養(yǎng)。對照組100μlCIK加入100μl含有IL?鄄2(250U/ml)、CD3 mAb 50μg/L10%AB血清的RPMI1640繼續(xù)培養(yǎng)。72h后加入四甲基偶氮唑藍(lán)（MTT）10μg，繼續(xù)培養(yǎng)4h，離心棄去孔內(nèi)上清，每孔加入150μl二甲基亞砜（DMSO）震蕩10min，待結(jié)晶物充分溶解，用酶標(biāo)儀在570nm處測OD值（A），每組設(shè)3個復(fù)孔，取均值按下式計算：

刺激指數(shù)SI=A實驗孔/A對照孔×100％

1.2.7 細(xì)胞殺傷試驗

用MTT比色法測定抗原致敏DC誘導(dǎo)CIK，空白的DC誘導(dǎo)CIK及CIK對SGC細(xì)胞的殺傷活性，效靶比為5：1、10：1、20：1。調(diào)整細(xì)胞至所需濃度，各取100μl的效靶細(xì)胞懸液加入96孔板中，于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h后，加入四甲基偶氮唑藍(lán)（MTT）10μg，繼續(xù)培養(yǎng)4h，離心棄上清，每孔加入150μl二甲基亞砜（DMSO）震蕩10min，待結(jié)晶物充分溶解，用酶標(biāo)儀在570nm處測OD值， 同時設(shè)空白對照、靶細(xì)胞對照、效應(yīng)細(xì)胞對照。每孔設(shè)3個復(fù)孔，取其均值按下式計算：

CIK細(xì)胞毒性（％）＝[1－（A效+靶－A效）/A靶]×100%

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS10.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行析因分析及t檢驗。

2 結(jié) 果

2.1 DC形態(tài)學(xué)的觀察

從外周血獲得單個核細(xì)胞，培養(yǎng)2h，獲得貼壁細(xì)胞，多為體積小、圓形的單個核細(xì)胞。5d時可見細(xì)胞伸展體積變大，形狀不規(guī)則，部分細(xì)胞懸浮。經(jīng)抗原致敏后第8d時可見大部分細(xì)胞懸浮，變大并伸出偽足，細(xì)胞內(nèi)可見大量的顆粒，倒置相差顯微鏡下可見毛刺狀突起，為典型DC形態(tài)。

2.2 抗原負(fù)載前后DC表型的變化

用流式細(xì)胞儀檢測DC表面分子HLA?鄄DR的表達(dá)第1d為5.01％、第5d為28.21％、第8d為62.01％。CD83分別為1.03％、4.50％、15.57％。CD86分別為4.47％、25.75％、41.03％。CD14分別為13.02％、3.26％、0.55％。

2.3 混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)

顯微鏡下觀察，兩種細(xì)胞共培養(yǎng)過程中，可見DC細(xì)胞逐漸減少，72h后視野中已不存在DC。兩試驗組及對照組CIK細(xì)胞數(shù)均較72h前明顯增多?；旌霞?xì)胞培養(yǎng)亦顯示：抗原致敏的DC與空白的DC都具有很強的刺激CIK細(xì)胞增殖的能力，分別是細(xì)胞因子刺激能力的3.12倍和3.09倍，但兩者之間差異無顯著性意義（P>0.05）。

2.4 細(xì)胞殺傷試驗

用MTT比色法測定抗原致敏DC誘導(dǎo)CIK（抗原?鄄DC?鄄CIK），空白的DC誘導(dǎo)CIK（空白?鄄DC?鄄CIK）及CIK對SGC細(xì)胞的殺傷活性（表1）。

析因分析結(jié)果顯示：①不同因素誘導(dǎo)CIK對胃癌細(xì)胞SGC殺傷作用不同，抗原致敏DC誘導(dǎo)CIK對該腫瘤細(xì)胞殺傷作用最強（P＜0.01），提示抗原致敏DC誘導(dǎo)CIK對該腫瘤細(xì)胞有特異性的殺傷作用。②不同效靶比之間殺傷作用不同（P＜0.01），結(jié)果比較顯示效靶比越高，殺傷作用越強。③CIK與效靶比之間有交互作用，其中抗原致敏DC誘導(dǎo)CIK在效靶比為20：1時殺傷作用較其余各組強。但空白的DC誘導(dǎo)CIK與CIK 兩組之間分析結(jié)果顯示兩組殺傷作用差異有無顯著性意義（P>0.05），提示空白的DC誘導(dǎo)CIK對SGC無特異性殺傷作用。結(jié)合混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)結(jié)果提示，抗原致敏DC誘導(dǎo)CIK可通過激活對該腫瘤有特異性殺傷作用的淋巴細(xì)胞及促進(jìn)淋巴細(xì)胞增殖兩方面可顯著性提高CIK對腫瘤的細(xì)胞殺傷作用。

3 討 論

DC在體外的致敏與其在體內(nèi)發(fā)育過程相似，經(jīng)歷未成熟與成熟兩個階段。未成熟DC來源于外周血或骨髓中的單個核細(xì)胞，經(jīng)IL?鄄4及GM?鄄CSF誘導(dǎo)形成[3]。本研究亦用此方法獲得DC。體外誘導(dǎo)DC成熟有抗原負(fù)載、細(xì)胞因子和佐劑刺激等方法。本研究從人胃癌細(xì)胞系SGC經(jīng)超聲破膜獲取含有多種腫瘤抗原的腫瘤總蛋白，用其致敏DC，顯微鏡下可觀察到致敏的DC細(xì)胞呈典型成熟DC的形態(tài)。用流式細(xì)胞儀檢測DC表面分子結(jié)果顯示 ，采用SGC抗原負(fù)載的DC，代表DC成熟的表面分子HLA?鄄DR、CD83、CD86升高，代表單個核細(xì)胞表面分子CD14下降，說明經(jīng)SGC腫瘤細(xì)胞抗原負(fù)載可誘導(dǎo)DC成熟。

腫瘤細(xì)胞總蛋白中包含有豐富的膜抗原、MHCⅠ類和Ⅱ類抗原表位、多種熱休克蛋白分子等成分，經(jīng)過DC的攝取、加工和呈遞后，可激發(fā)針對多種腫瘤抗原簇的克隆[4]；可誘導(dǎo)針對該抗原的特異性細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞，發(fā)揮有效的抗腫瘤免疫效應(yīng)[5]。CIK細(xì)胞除了具有NK細(xì)胞非MHC限制的殺瘤作用，還具有T細(xì)胞的抗瘤作用。因此用抗原致敏的DC誘導(dǎo)CIK細(xì)胞，與未經(jīng)抗原致敏的DC誘導(dǎo)CIK細(xì)胞及CIK細(xì)胞相比，對相同抗原靶細(xì)胞具有更強的殺傷作用。本研究中MTT試驗的結(jié)果證實經(jīng)抗原致敏的DC誘導(dǎo)CIK細(xì)胞的殺瘤作用較未經(jīng)抗原致敏的DC誘導(dǎo)CIK細(xì)胞及CIK細(xì)胞殺瘤作用強。虞積仁等[6]也證實，抗原致敏的DC誘導(dǎo)CIK細(xì)胞僅對帶有相同抗原的靶細(xì)胞有特異性殺傷。而空白DC誘導(dǎo)CIK細(xì)胞與細(xì)胞因子誘導(dǎo)CIK缺乏特異性，兩者之間殺傷試驗無明顯差異。張宏文等[7]研究亦發(fā)現(xiàn)同樣結(jié)果。

混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)結(jié)果顯示DC與CIK混合培養(yǎng)72h后，視野中DC細(xì)胞消失與成熟DC在完成抗原呈遞后凋亡有關(guān)[8]?？瞻椎腄C與抗原致敏的DC，兩者均能明顯促進(jìn)CIK增殖，但兩者之間差異無顯著性意義，張嵩等[9]亦有類似的報道。說明成熟DC促進(jìn)CIK增殖與有無抗原負(fù)載無關(guān)，可能與成熟DC高表達(dá)各種黏附分子與CIK表面的受體結(jié)合促進(jìn)CIK細(xì)胞的增殖有關(guān)。

本研究通過對人腫瘤細(xì)胞系SGC提取腫瘤抗原致敏DC誘導(dǎo)CIK殺傷功能的試驗研究，證實抗原致敏DC誘導(dǎo)CIK可通過誘導(dǎo)特異性CIK細(xì)胞及促進(jìn)CIK細(xì)胞增殖兩方面顯著提高CIK細(xì)胞的殺瘤效應(yīng)，為進(jìn)一步的臨床試驗研究提供試驗依據(jù)。

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刺猬的擁抱范文第3篇

【摘要】 目的 探討姜黃素對細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞(CIK 細(xì)胞)殺傷胃癌細(xì)胞株SGC-7901作用的影響及其機(jī)制。方法 10名健康者外周血單個核細(xì)胞(PBMC)在體外經(jīng)多種細(xì)胞因子誘導(dǎo)為CIK細(xì)胞;收集培養(yǎng)第5天的CIK細(xì)胞，給予不同濃度的姜黃素誘導(dǎo)， 37℃、5%CO2條件下繼續(xù)培養(yǎng)72 h，LDH法檢測CIK細(xì)胞對SGC-7901細(xì)胞的殺傷活性;FACS法檢測CIK細(xì)胞表型CD3+CD8+、CD3+CD56+含量及穿孔素、顆粒酶B水平。結(jié)果 ①姜黃素誘導(dǎo)后，CIK細(xì)胞殺傷胃癌SGC-7901的活性明顯提高，在10 μmol/L時殺傷活性顯著高于對照組(P

【關(guān)鍵詞】 姜黃素;CIK細(xì)胞;SGC7901胃癌細(xì)胞;殺傷活性;穿孔素;顆粒酶B

Abstract： Objective To investigate the effect and the underlying mechanism of the curcumin-induced cytotoxicity of CIK cells to gastric cancer cell line SGC-7901 in vitro. Methods The peripheral blood mononuclear cells (PBMC) from 10 healthy volunteers were induced in vitro with different cytokines and transferred into CIK cells .On the fifth day， the CIK cells were collected and were induced with the addition of curcumin at different concentrations， followed by 72 hours of culture under the condition of 37℃ and 5% CO2. The antitumor cytotoxicity of CIK cells to cell line SGC-7901 was determined by LDH assay. The content of phenotypes CD3+CD8+ and CD3+CD56+ of CIK cells， the levels of perforin and granzyme B were analyzed by a fluorescence activated cell sorter (FACS). Results ①The anti-tumor cytotoxicity of CIK cells exposed to curcumin on SGC-7901 was markedly elevated and the cytotoxicity reached 62.32%±1.28% at a concentration of 10 μmol/L curcumin， with significant differences in contrast with the control group (37.45%±1.12%， P

Key words： curcumin; CIK cells; gastric cancer cell line SGC-7901; perforin; granzyme B

細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷(cytokine induced killer， CIK)細(xì)胞是將人外周血單個核細(xì)胞在體外經(jīng)多種細(xì)胞因子共同誘導(dǎo)培養(yǎng)而獲得的一群異質(zhì)性細(xì)胞，與其他過繼性免疫細(xì)胞相比，由于其具有增殖能力強、殺瘤活性高、殺瘤譜廣、副作用小、對正常骨髓造血影響輕微等優(yōu)點[1-2]而被廣泛應(yīng)用于腫瘤的過繼性細(xì)胞免疫治療[3]。姜黃素(curcumin) 是一種從中藥姜黃根莖中提取出來的天然化合物，有研究表明，高濃度的姜黃素對樹突狀細(xì)胞(dendritic cell， DC)、γδ T有抑制作用[4-5]，但有關(guān)姜黃素在CIK細(xì)胞作用中的影響鮮見報道，為此，我們試用不同濃度的姜黃素在體外誘導(dǎo)人CIK細(xì)胞，觀察姜黃素對CIK細(xì)胞殺傷活性及其穿孔素、顆粒酶B的影響，以探討姜黃素對CIK細(xì)胞殺傷胃癌細(xì)胞株SGC-7901作用的影響及其機(jī)制。

1 材料和方法

1.1 材料 姜黃素(購自Sigma公司);人胃腺癌細(xì)胞株SGC-7901(購自上海細(xì)胞生物研究所);胰蛋白酶、RPMI 1640(購自Gibco公司);人AB血清(購自徐州市血站);胎牛血清和淋巴細(xì)胞分離液(購自中國科學(xué)院血液病研究所);IL-2(購自廈門特寶生物公司);FITC標(biāo)記的鼠抗人CD56(購自BD公司);PE標(biāo)記的 Perforin(穿孔素)、Gran B(顆粒酶 B)和PE標(biāo)記的鼠抗人CD3、APC標(biāo)記的鼠抗人CD8(均購自杭州聯(lián)科生物);乳酸脫氫酶試劑盒(購自日本世諾臨床診斷制品株式會社);FACS Caliber流式細(xì)胞儀(購自BD公司)，流式細(xì)胞儀分析軟件為CellQuest，每個標(biāo)本分析細(xì)胞數(shù)≥1×104/L。

1.2 方法

1.2.1 姜黃素誘導(dǎo)CIK細(xì)胞 抽取10名健康者外周血各10 ml，淋巴細(xì)胞分離液分離，收集單個核細(xì)胞，無菌生理鹽水洗滌3次，將細(xì)胞按4×106/L懸浮于RPMI-1640培養(yǎng)基中，加入經(jīng)抗CD3單抗包被的6孔細(xì)胞培養(yǎng)板，每孔6 ml，加入終含量為5×104U/ L rhIL-2和1×106/L rhIFN-γ，置37℃、5% CO2條件下培養(yǎng)，每2天半量換培養(yǎng)基1次，并調(diào)整細(xì)胞密度至4×106/L ，5天后收集CIK細(xì)胞并配成4×106/L的細(xì)胞懸液，分別加入不同濃度的姜黃素〔0(對照組)、 1.25、2.5、5、10、20 〕μmol/L，同時設(shè)無水乙醇組(無水乙醇含量為0.1%)。每組設(shè)5個復(fù)管，置37℃、5% CO2條件下繼續(xù)培養(yǎng)72 h收集細(xì)胞用于實驗。

1.2.2 姜黃素誘導(dǎo)的CIK細(xì)胞對SGC-7901殺傷活性的檢測 按本室建立的方法[6]進(jìn)行。將SGC-7901細(xì)胞株用RPMI-1640培養(yǎng)基培養(yǎng)至對數(shù)增殖期;收集細(xì)胞用Hank′s液洗2次，配成4×105/L;效應(yīng)細(xì)胞(CIK)配成4×106/L，將效靶細(xì)胞數(shù)按10∶1比例混合，以1 500 r/min離心5 min，置37℃、5% CO2孵箱中孵育6 h后，輕輕混勻，再以1 500 r/min離心10 min。收集上清液，用全自動生化分析儀LD-P法測定LDH的活性(U/L)。

CIK細(xì)胞的殺傷活性(%)=(測定管LDH的U-自然釋放管LDH的U)/(最大釋放管LDH的U-自然釋放管LDH的U)×100%

1.2.3 姜黃素對CIK細(xì)胞表型的影響 收集經(jīng)姜黃素誘導(dǎo)72 h后的CIK細(xì)胞， PBS液洗滌2次，調(diào)整細(xì)胞濃度為4×106/L，加入離心管，每管100 μl，分別加入熒光標(biāo)記的單克隆抗體CD3、CD8、CD56，每一抗體每孔5 μl， 各組均設(shè)5個復(fù)孔對照，4℃暗處孵育標(biāo)記20 min，PBS液洗滌，然后用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞表型。

1.2.4 姜黃素對CIK細(xì)胞穿孔素和顆粒酶B水平的影響 收集經(jīng)姜黃素誘導(dǎo)72 h后的CIK細(xì)胞，用PBS液洗滌2次，調(diào)整細(xì)胞濃度為4×106/L，加入離心管(100 μl/管)，分別加入熒光標(biāo)記的穿孔素和顆粒酶B，每管加抗體5 μl，各組均設(shè)5個復(fù)孔對照。4℃暗處孵育20 min，PBS液洗滌，流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞表型。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 用SPSS 13.0 統(tǒng)計軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，采用One-Way ANOVA進(jìn)行比較，P

2 結(jié) 果

2.1 姜黃素誘導(dǎo)的CIK細(xì)胞對SGC-7901殺傷活性的變化 濃度為2.5～10 μmol/L姜黃素誘導(dǎo)的CIK細(xì)胞對SGC-7901細(xì)胞殺傷活性明顯高于對照組(P

圖1 姜黃素誘導(dǎo)的CIK細(xì)胞對胃癌SGC-7901的殺傷活性

與對照組比較：*P

2.3 姜黃素對CIK細(xì)胞穿孔素和顆粒酶B水平的影響 1.25～10 μmol/L姜黃素誘導(dǎo)的CIK細(xì)胞穿孔素和顆粒酶B水平均較對照組高，濃度在10 μmol/L時穿孔素和顆粒酶B水平顯著高于對照組，兩者比較有統(tǒng)計學(xué)意義(P

3 討 論

現(xiàn)有研究證明，姜黃素具有抗炎、抗氧化、清除自由基及抗癌等藥理作用[7-8]。Cipriani等[4]研究表明30 μmol/L以上濃度的姜黃素明顯抑制異戊烯焦磷酸鹽誘導(dǎo)的γδ T細(xì)胞的趨化因子釋放、擴(kuò)增和依賴其活性的細(xì)胞聚集，此過程和姜黃素抑制NF-κB和AP-1活性有關(guān);并且高濃度的姜黃素能夠呈時間和劑量依賴性地抑制γδT細(xì)胞殺傷活性，此過程通過細(xì)胞死亡途徑，導(dǎo)致核凋亡和大規(guī)模DNA斷裂。亦有Shirley等[5]研究表明濃度為20 μmol/L及30 μmol/L的姜黃素抑制樹突狀細(xì)胞對免疫刺激物的反應(yīng)，通過阻止成熟標(biāo)志物、細(xì)胞因子和趨化因子表達(dá)而促進(jìn)未成熟CD4+T細(xì)胞增殖，以及阻止樹突狀細(xì)胞遷移和內(nèi)吞功能。本實驗研究發(fā)現(xiàn)濃度為20 μmol/L姜黃素作用于CIK細(xì)胞時其殺傷胃腺癌SGC-7901細(xì)胞活性明顯減低，與上述結(jié)果一致。

CIK細(xì)胞是一類非主要組織相容性復(fù)合物(major histocompatibility complex，MHC)和非T細(xì)胞受體限制性的免疫活性細(xì)胞[9] ，表型以CD3+CD8+和CD3+CD56+為主。Mehta等[10]研究認(rèn)為， CIK細(xì)胞通過釋放穿孔素和顆粒酶而裂解靶細(xì)胞，提示細(xì)胞裂解為殺傷靶細(xì)胞的主要機(jī)制。穿孔素是存在于細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞、自然殺傷(natural killer，NK)細(xì)胞和γδ T細(xì)胞胞質(zhì)中的細(xì)胞毒顆粒，當(dāng)這些細(xì)胞與靶細(xì)胞接觸后可釋放穿孔素，在靶細(xì)胞膜上形成多聚穿孔素管狀通道，導(dǎo)致靶細(xì)胞溶解破壞。顆粒酶B是殺傷性T淋巴細(xì)胞和NK細(xì)胞顆粒(granule)中最重要的絲氨酸蛋白酶，通過Caspases依賴途徑、直接入核途徑及不依賴Caspases的胞質(zhì)途徑殺傷靶細(xì)胞。本實驗研究顯示，濃度2.5～10 μmol/L的姜黃素作用于CIK細(xì)胞后，其殺傷活性的增高與其表達(dá)的穿孔素和顆粒酶B水平呈正相關(guān)，且與CIK細(xì)胞的CD3+CD56+表型表達(dá)升高一致，考慮CIK細(xì)胞殺傷活性增強可能與CIK細(xì)胞群中的CD3+CD56+表達(dá)增高及其釋放穿孔素和顆粒酶B水平升高有關(guān)。然而，姜黃素誘導(dǎo)后的CIK細(xì)胞CD3+CD8+表型下降機(jī)制尚不明確，有待進(jìn)一步研究。

本實驗研究表明，濃度為1.25 μmol/L的姜黃素對CIK細(xì)胞的殺傷活性影響不明顯，濃度為2.5～10 μmol/L的姜黃素作用于CIK細(xì)胞后，其殺傷活性隨姜黃素濃度的增加逐漸增強，但當(dāng)藥物濃度過高(達(dá)20 μmol/L)時反而會抑制CIK細(xì)胞的殺瘤作用。這與Sharma等[11]報道的低濃度姜黃素能增強單核巨噬細(xì)胞吞噬功能，高濃度則抑制其吞噬功能的結(jié)果類似。因此，姜黃素對CIK細(xì)胞作用的影響存在最適濃度現(xiàn)象，這一點在設(shè)計實驗和臨床應(yīng)用時要加以注意。

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刺猬的擁抱范文第4篇

（一）刺猬

叔本華說，人都是刺猬，即使在冰冷的冬天，也不能相互擁抱。因為

靠得近了，它們身上的刺會傷害到彼此；靠得遠(yuǎn)了，卻又抵抗不住那凜冽的刺骨的寒風(fēng)。于是它們不停地靠近、傷害、離開，又因為冷而寂寞靠近，就這樣春夏秋冬周而復(fù)始。你知道的，我從來都不曾相信叔本華，從來都不相信的。他是個徹徹底底的悲觀主義者，所以他一直都沒有找到可以擁抱可以傷害的人，孤獨到老。我想告訴你，即使寒風(fēng)再凜冽兩只

(

受難的

)

刺猬依然可以躲在單薄的

（

的

）

小樹葉下面

(

簡單的

)

依戀，

(

以最純樸的感情

)

用幸福取暖。也許一年后春暖花開的時候，經(jīng)歷了一冬，冰雪消融，

它們

也磨合得差不多了。

一年后的絢麗純美的時光，他們用字字句句在指間刻下幸福的痕跡，并且，

刺猬的擁抱范文第5篇

一條魚靜靜地游過來，游到了刺猬的心中，揉碎了水草里的夢。

“為什么你總是那么憂郁呢？”魚默默地問刺猬。

“我憂郁嗎？”刺猬輕輕地笑了。

魚溫柔地注視著刺猬，默默地?fù)崦题膽n傷，輕輕地說：“讓我來溫暖你的心?！?/p>

上帝啊，魚和刺猬相愛了！

上帝說，你見過魚和刺猬的愛情嗎？

刺猬說：“我要把身上的刺一根根拔掉，我不想在我們擁抱的時候刺痛你。”

魚說：“不要啊，我怎么忍心看你那一滴滴流淌下來的鮮血？那血是從我心上淌出來的?！?/p>

刺猬說：“因為我愛你！愛是不需要理由的。”

魚說：“可是，你拔掉了刺就不是你了。我只想要給你以快樂……”

刺猬說：“我寧愿為你一點點撕碎自己……”

刺猬在一點點拔自己身上的刺，每拔一下都是一陣揪心的疼，每一次都疼在魚的心上。魚渴望和刺猬做一次深情的相擁，它一次次地騰越而起，每一次的縱身是為了每一次的夢想，每一次的夢想是每一次跌碎的痛苦。

魚對上帝說：“如何能讓我有一雙腳，我要走到愛人的身旁？”

上帝說：“孩子，請原諒我的無能為力，因為你本來就是沒有腳的。”

魚說：“難道我的愛錯了？”

上帝說：“愛永遠(yuǎn)沒有錯?！?/p>

魚說：“要如何做才能給我的愛人以幸福？”

上帝說：“請轉(zhuǎn)身！”

魚毅然游走了，在遼闊的水域下，魚閃閃的鱗片漸漸消失在刺猬的眼睛里。

刺猬說：“上帝啊，魚有眼淚嗎？”

上帝說：“魚的眼淚流在水里。”