微生物研究方法
前言：想要寫(xiě)出一篇令人眼前一亮的文章嗎？我們特意為您整理了5篇微生物研究方法范文，相信會(huì)為您的寫(xiě)作帶來(lái)幫助，發(fā)現(xiàn)更多的寫(xiě)作思路和靈感。
微生物研究方法范文第1篇
[關(guān)鍵詞] 水產(chǎn)品；微生物；檢測(cè)技術(shù)
[中圖分類(lèi)號(hào)] R254.7 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B [文章編號(hào)] 1673-9701（2013）07-0116-02
Research progress of microbial test method of aquatic product of microorganisms in food
WANG Guoqin
Pingdingshan Center for Disease Control and Prevention in Henan Province， Pingdingshan 467000， China
[Abstract] This article in DNA and immunology as the foundation， from immune magnetic bead separation， using gene chip method， the traditional PCR technology and quantitative PCR technology aspects of microorganisms in aquatic products detecting way briefly elaborated.
[Key words] Aquatic products； Microbial； Detection technology
在水產(chǎn)品當(dāng)中存在著大量的微生物，對(duì)人類(lèi)的身體健康帶來(lái)了很大的威脅，會(huì)引起腹瀉、嘔吐、敗血癥等一系列病癥。微生物對(duì)水產(chǎn)品的影響是造成食品安全隱患的首要因素?，F(xiàn)在對(duì)水產(chǎn)品微生物檢測(cè)方向主要是對(duì)大腸桿菌、菌落總數(shù)和致病菌等研究[1]。傳統(tǒng)的微生物檢測(cè)方式以分離培養(yǎng)、血清試驗(yàn)和生化技術(shù)等為主，但是，面臨的主要問(wèn)題是資金使用大、人工勞動(dòng)多、效率有待提高、特異性較弱等問(wèn)題，沒(méi)能從根本上解決水產(chǎn)品的質(zhì)量安全，檢測(cè)力度沒(méi)有達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)要求[2]。隨著我國(guó)分子生物學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，整體的檢測(cè)效率有了質(zhì)的飛躍，主要有檢測(cè)效率高、針對(duì)性強(qiáng)、準(zhǔn)確性有保證等特點(diǎn)，在對(duì)水產(chǎn)品微生物檢測(cè)方面有著很大的使用前景，并且具有很大的挖掘空間。本文對(duì)水產(chǎn)品中微生物的檢測(cè)方法做一探討。
1 水產(chǎn)品中微生物的檢驗(yàn)方法
1.1 采用免疫磁珠的分離方式
之所以使用免疫磁珠的分離方式，是因?yàn)榭梢詫⑻禺愋缘目贵w與磁性顆粒的表面進(jìn)行關(guān)聯(lián)，可以讓樣品中的微生物進(jìn)行特異性的結(jié)合，通過(guò)外部磁場(chǎng)的影響，裝有病毒的微生物磁性球會(huì)在其作用之下向兩端靠攏，這樣就可以使微生物從樣品當(dāng)中脫離出來(lái)[3]。
這種方法較普通檢測(cè)方式而言，有著很明顯的優(yōu)勢(shì)，可在含有大量細(xì)菌的溶液當(dāng)中具有選擇性的將微生物分離出來(lái)，并且具有較高的效率。與使用鏡檢技術(shù)和PCR等快速檢測(cè)方式相互取長(zhǎng)補(bǔ)短，免疫磁性分離技術(shù)可以將水產(chǎn)品微生物檢測(cè)效率大大提高。例如：在創(chuàng)建免疫捕獲-RT-PCR技術(shù)的過(guò)程中，即首先使用IgG抗體將甲型肝炎病毒吸收到標(biāo)本之上，之后把該病毒的RNA通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄形成cDNA[4]。使用PCR技術(shù)進(jìn)行增長(zhǎng)擴(kuò)充，將傳統(tǒng)核酸提取方式的步驟進(jìn)行精簡(jiǎn)。這種方法體現(xiàn)出的優(yōu)勢(shì)在于更加靈敏，可以達(dá)到逆轉(zhuǎn)錄-PCR技術(shù)與打點(diǎn)雜交相結(jié)合的效果。把水產(chǎn)品當(dāng)中的李斯特菌通過(guò)免疫磁性分離進(jìn)行作用，以PCR技術(shù)為基礎(chǔ)，可以產(chǎn)生具有獨(dú)特效果的李斯特菌IMS-PCR技術(shù)，對(duì)水產(chǎn)品進(jìn)行檢測(cè)。通過(guò)使用該種技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)，我們可以得到如下結(jié)論：該方法可以保證食品基質(zhì)、雜菌和培養(yǎng)及成分不再對(duì)PCR檢測(cè)帶來(lái)嚴(yán)重性干擾，并且具有高敏感度、高效率和高準(zhǔn)確性的特點(diǎn)。
1.2 采用基因芯片檢測(cè)方式
所謂的基因芯片技術(shù)就是把每個(gè)基因寡核苷酸放在芯片的表面上，取得微生物樣本的DNA，經(jīng)過(guò)PCR擴(kuò)增之后可以使用熒光標(biāo)記探針，與芯片表面的寡核苷酸進(jìn)行點(diǎn)雜交，最后使用精確的掃描儀進(jìn)行定量并對(duì)熒光分布進(jìn)行分析，最終確定被檢測(cè)樣品當(dāng)中是否存在某種微生物[5]?；蛐酒瑱z測(cè)方式可以對(duì)微生物進(jìn)行全面、高效和并行的檢測(cè)。從數(shù)據(jù)角度分析，它可以對(duì)隱藏的病原體進(jìn)行檢測(cè)，使用一張芯片對(duì)某一種病原菌的各項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)，因此具有很好的效果。例如：經(jīng)過(guò)混合之后的基因組可以準(zhǔn)確地分辨出各種李斯特菌相關(guān)聯(lián)的分離物，美國(guó)科學(xué)家經(jīng)過(guò)分析，將單管復(fù)合體擴(kuò)增與基因芯片技術(shù)對(duì)李斯特菌進(jìn)行檢測(cè)和分辨。使用固定、高效的措施對(duì)水產(chǎn)品中各種微生物進(jìn)行獲取、處理和分析是我們所期望的。現(xiàn)在，我國(guó)雖然在對(duì)樣品的處理和相關(guān)基因芯片技術(shù)有了很大程度的提高，但是，使用基因芯片方式還需要對(duì)水產(chǎn)品中的微生物進(jìn)行深入研究，而且要對(duì)外部標(biāo)準(zhǔn)化程序、資金、設(shè)備和條件等環(huán)境進(jìn)行細(xì)致化建設(shè)，亟需對(duì)這一系列問(wèn)題給予解決。總而言之，基因芯片技術(shù)還有著很大的發(fā)展空間。
1.3 采用傳統(tǒng)的PCR技術(shù)
所謂的PCR技術(shù)，就是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，它是在上個(gè)世紀(jì)八十年代首先由美國(guó)科學(xué)家提出的，是一種可以在體外快速增長(zhǎng)的特定基因，所以，又稱之為基因體外擴(kuò)增技術(shù)。該技術(shù)可以在試管中進(jìn)行，經(jīng)過(guò)數(shù)小時(shí)的培養(yǎng)，可以使很少的目標(biāo)基因增長(zhǎng)數(shù)十萬(wàn)倍，即把不易檢測(cè)的皮克單位擴(kuò)增到易于檢測(cè)的微克單位，省去了克隆流程，縮減了大量的費(fèi)時(shí)程序?，F(xiàn)在，PCR技術(shù)已經(jīng)具有對(duì)微生物病原的檢測(cè)、分析、克隆、分離以及序列分析等功能，而且在水產(chǎn)品微生物檢測(cè)當(dāng)中也予以高度的重視。
例如：在遼寧近海地區(qū)，大量的海水樣品以及貝類(lèi)中具有甲型肝炎病毒，經(jīng)過(guò)分析研究，使用石英粉濾柱法將水樣品進(jìn)行濃縮，同時(shí)使用PCR技術(shù)在附近海水中檢測(cè)出RNA，最終結(jié)果表明，該部分海水中存在HAV污染，在此之后，使用抗原捕捉聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)對(duì)遼寧周邊沿海城市的水產(chǎn)品進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果為RNA陽(yáng)性[6]。麻痹性貝毒是由甲藻類(lèi)浮游生物分泌出的，對(duì)人體神經(jīng)具有一定的麻痹作用，也是水產(chǎn)品中毒的主要元兇之一?？梢酝ㄟ^(guò)建立PCR快速檢測(cè)Alexandrium屬和 A.minutum污染貽貝中的相關(guān)毒素類(lèi)型方式，結(jié)果得出，PCR是一種對(duì)目標(biāo)浮游生物進(jìn)行有效深入的檢測(cè)措施。
1.4 經(jīng)過(guò)改進(jìn)的PCR技術(shù)
新型的PCR技術(shù)與傳統(tǒng)PCR技術(shù)具有相同的原理，但是在定量技術(shù)等方面原理有所不同。經(jīng)過(guò)改進(jìn)的PCR技術(shù)是使用熒光染料和探針來(lái)確保增長(zhǎng)的特異性，而且熒光信號(hào)的強(qiáng)與弱直接影響增長(zhǎng)產(chǎn)物的多少，以此來(lái)確保準(zhǔn)確性[7]。采取實(shí)時(shí)熒光逆轉(zhuǎn)錄-PCR方法是在常規(guī)逆轉(zhuǎn)錄-PCR檢測(cè)的基礎(chǔ)之上使用熒光探針，摒棄了電泳的使用，而且不再使用具有致癌作用的溴化乙錠，這樣保證了工作人員、研究人員以及環(huán)境的安全性。而且可以進(jìn)行實(shí)時(shí)性檢測(cè)，與其他方法（普通逆轉(zhuǎn)錄-PCR、電鏡法）相比，更加敏感、特異，并且具有可觀的速度。例如：根據(jù)副溶血性弧菌的基因?yàn)樾蛄性O(shè)計(jì)并合成具有一定特異性的引物和熒光標(biāo)記探針時(shí)，使用定量-PCR技術(shù)對(duì)蝦、魚(yú)片等水產(chǎn)品進(jìn)行檢測(cè)，方法是在其中放入副溶血性弧菌，采用直接定量的方式檢測(cè)出的低限是102 cfu/g。通過(guò)24 h的菌類(lèi)擴(kuò)增培養(yǎng)，低限可以達(dá)到2 cfu/g[8]。
在研究的初期，使用的擴(kuò)增方式是多重嵌套，在軟體動(dòng)物當(dāng)中取得DNA部分片段，以PCR增長(zhǎng)之后的片段和DNA序列為基礎(chǔ)，分析人類(lèi)糞便中的隱賈第蟲(chóng)和孢子蟲(chóng)的檢測(cè)結(jié)果，在貽貝的DNA中引入兩者的基因片段，以此來(lái)完成對(duì)目標(biāo)檢測(cè)基因的建立，之后使用ABC-PCR檢測(cè)方式，最終表明，這種方法對(duì)貝類(lèi)中隱胞子蟲(chóng)和賈第蟲(chóng)具有很明顯的檢測(cè)效果。
2 結(jié)語(yǔ)
綜上所述，對(duì)水產(chǎn)品中微生物進(jìn)行安全性檢測(cè)是極為重要的研究課題，并且更加趨近于實(shí)時(shí)、準(zhǔn)確。通過(guò)微生物自身的遺傳因子和免疫系統(tǒng)的特點(diǎn)來(lái)判斷微生物數(shù)量的PCR技術(shù)、免疫技術(shù)和基因技術(shù)等都有著使用范圍較廣的價(jià)值，實(shí)時(shí)處理可以更加準(zhǔn)確地進(jìn)行預(yù)防和預(yù)報(bào)。PCR技術(shù)極大地提高了檢測(cè)效果和靈敏度，但在實(shí)際操作當(dāng)中還是會(huì)出現(xiàn)較多的假陽(yáng)性現(xiàn)象。此外，在外部環(huán)境發(fā)生極大變化的時(shí)候，會(huì)產(chǎn)生相應(yīng)的連鎖反應(yīng)，是靈敏度等優(yōu)勢(shì)下降的原因。而基因芯片技術(shù)彌補(bǔ)了相關(guān)不足，但是整體費(fèi)用較高，所以，多種方式合理搭配，相信會(huì)找到行之有效的檢測(cè)途徑。
[參考文獻(xiàn)]
[1] 黃玉柳，陳靜，黎小正. 水產(chǎn)品微生物實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制探討[J]. 微生物學(xué)雜志，2010，30（5）：108-110.
[2] 董成娟. 微生物學(xué)檢驗(yàn)的影響因素與質(zhì)量控制[J]. 中國(guó)保健營(yíng)養(yǎng)：臨床醫(yī)學(xué)學(xué)刊，2010，19（4）：203-204.
[3] 李鳳霞，吳燕燕，李來(lái)好. 病原微生物對(duì)水產(chǎn)品的污染及其檢測(cè)控制方法[C]. 中國(guó)水產(chǎn)學(xué)會(huì)學(xué)術(shù)年會(huì)論文摘要集，2008，（3）：167-173.
[4] 賈愛(ài)榮，孟秀梅，夏雪奎，等. 出口水產(chǎn)品中微生物污染調(diào)查分析及限量討論[J]. 農(nóng)產(chǎn)品加工·學(xué)刊，2012，（1）：24-29.
[5] 劉立志，吳錦如，游鵬. 婁底市水產(chǎn)品微生物污染的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)與分析[J]. 實(shí)用預(yù)防醫(yī)學(xué)，2009，16（6）：1830-1831.
[6] 胡鯤，李怡，朱澤聞，等. 微生物顯色法快速檢測(cè)水產(chǎn)品中恩諾沙星殘留[J]. 上海海洋大學(xué)學(xué)報(bào)，2009，（4）：472-478.
[7] 張振霖. 快速檢測(cè)水產(chǎn)品中大腸桿菌的新技術(shù)研究進(jìn)展[J]. 中國(guó)水產(chǎn)，2008，（7）：78-79.
微生物研究方法范文第2篇
[關(guān)鍵詞] 微生物限度；方法驗(yàn)證；回收率； 醫(yī)院制劑；軟膏
[中圖分類(lèi)號(hào)] R927 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B [文章編號(hào)] 2095-0616（2014）12-105-03
氯達(dá)軟膏、利唑軟膏、硫磺軟膏作為梅縣慢性病防治院常用的醫(yī)生處方藥，在臨床被廣泛應(yīng)用，原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)無(wú)微生物限度檢查方法學(xué)驗(yàn)證，為控制產(chǎn)品質(zhì)量，確保安全用藥，本文按照《中國(guó)藥典》2010年版二部規(guī)定[1]進(jìn)行微生物方法學(xué)驗(yàn)證。根據(jù)制劑抑菌活性的強(qiáng)弱和對(duì)不同菌種抑菌程度的大小選擇適當(dāng)?shù)臋z查方法，加入5種驗(yàn)證試驗(yàn)菌株：枯草芽孢桿菌、大腸埃希菌、金黃色葡萄球、白色念珠菌、黑曲霉菌于氯達(dá)軟膏、利唑軟膏和硫磺軟膏中，對(duì)各試驗(yàn)菌的回收率進(jìn)行驗(yàn)證，建立氯達(dá)軟膏、利唑軟膏和硫磺軟膏細(xì)菌、霉菌及酵母菌檢出方法；控制菌以加入2種驗(yàn)證試驗(yàn)菌株：金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌進(jìn)行檢出實(shí)驗(yàn)，建立氯達(dá)軟膏、利唑軟膏和硫磺軟膏控制菌檢查方法。
1 試藥與儀器
1.1 試驗(yàn)樣品
氯達(dá)軟膏（批號(hào)分別為130629，130712，130718；利唑軟膏（批號(hào)分別為13720，130625，130723），硫磺軟膏（批號(hào)分別為130610，130615，130623）均由梅縣慢性病防治院提供。
1.2 驗(yàn)證用儀器
電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱、BSC-1300ⅡA2生物安全柜、DNP-9052BS-Ⅲ型電熱恒溫培養(yǎng)箱、HCB602H電子分析天平（0.01g）、ZW-808A微型智能集菌儀、一次性無(wú)菌過(guò)濾器、ZW-808D智能勻漿儀、臥式滅菌器、HH.Bll.500-電熱恒溫培養(yǎng)箱、SPX-150型生化培養(yǎng)箱等
1.3 試驗(yàn)菌株
枯草芽孢桿菌[CMCC（B）63501-2a1]、金黃色葡萄球菌[CMCC（B）26003-5a]、大腸埃希菌[CMCC（B）44102-3a]、白色念珠菌[CMCC（F）98001-3a]、銅綠假單胞菌[CMCC（B）10104-2a]黑曲霉[CMCC（F）98003-1a]均由中國(guó)食品藥品檢定研究院提供，以上菌株傳代次數(shù)均不超過(guò)5代。
1.4 驗(yàn)證用培養(yǎng)基及稀釋劑
pH=7.0的氯化鈉一蛋白胨緩沖液（批號(hào)：1112292）、營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基（批號(hào)：3101032）、營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（批號(hào)：201112262）、改良馬丁培養(yǎng)基（批號(hào)：3101466）、改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基（批號(hào)：3101223）、玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基（批號(hào)：201112231）、膽鹽乳糖培養(yǎng)基（批號(hào)：3101078）、甘露醇氯化鈉瓊脂培養(yǎng)基（批號(hào)：120315），溴化十六烷基三甲銨瓊脂培養(yǎng)基（批號(hào)：110223）均由北京三藥科技開(kāi)發(fā)公司或廣東環(huán)凱微生物有限公司出品。其他試劑均為分析純或化學(xué)純。
2 方法與結(jié)果
2.1 菌液制備[1-12]
接種枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌、大腸埃希氏菌新鮮培養(yǎng)物至營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，培養(yǎng)溫度（34±1）℃，培養(yǎng)24h，接種白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物至改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基中，培養(yǎng)溫度（25±1）℃，培養(yǎng)46h，將上述培養(yǎng)物用0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液制成每1毫升含菌數(shù)為50～100cfu的菌懸液。接種黑曲霉的新鮮培養(yǎng)物至改良馬丁瓊脂斜面培養(yǎng)基中，培養(yǎng)溫度（25±1）℃，培養(yǎng)6d，加入4mL含0.05%（mL/mL）聚山梨酯80的0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液，將孢子洗脫，吸出孢子懸液至無(wú)菌試管內(nèi)，用含0.05%（mL/mL）聚山梨酯80的0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液制成每1毫升含孢子數(shù)50～100cfu的孢子懸液。
2.2 供試品溶液制備[1-12]
氯達(dá)軟膏、利唑軟膏供試液：取氯達(dá)軟膏10.12g、利唑軟膏9.95g，分別加至含20mL無(wú)菌十四烷酸異丙酯和無(wú)菌玻璃珠的二個(gè)三角瓶中，充分振搖使供試品溶解后，各加入45℃的pH=7.0的無(wú)菌氯化鈉一蛋白胨緩沖液100mL，振搖6min，靜置使油水明顯分層，取其水層，作為1∶10的供試液。
硫磺軟膏供試液：取硫磺軟膏5.05g，加至含溶化的（溫度不超過(guò)45℃）5g司盤(pán)80、3g單硬脂酸甘油酯、10g聚山梨酯80無(wú)菌混合物的燒杯中，用無(wú)菌玻棒攪拌成團(tuán)后，加入45℃ 的pH=7.0的無(wú)菌氯化鈉一蛋白胨緩沖液至100mL，邊加邊攪拌，使供試品充分乳化，作為120的供試液。
2.3 細(xì)菌、霉菌及酵母菌計(jì)數(shù)驗(yàn)證[1-12]
試驗(yàn)組：取按“2.2”項(xiàng)下制備的供試品溶液1mL和試驗(yàn)菌液1mL按常規(guī)法：取供試液1mL注皿；培養(yǎng)基稀釋法：取供試品溶液1mL注入10個(gè)平皿（0.1mL/皿）；離心法：取一定量的供試品溶液，以500 r/min離心5min，取上清液試驗(yàn)；薄膜過(guò)濾法：取供試品溶液1mL，采用薄膜過(guò)濾法，依法檢查，以pH=7.0的無(wú)菌氯化鈉一蛋白胨緩沖液為沖洗液。
菌液組：取1mL試驗(yàn)組中相同稀釋級(jí)的菌懸液，同法測(cè)定其菌數(shù)，得出試驗(yàn)組中加入的菌數(shù)。每株試驗(yàn)菌平行制備2個(gè)平皿，計(jì)算平均菌落數(shù)。
供試品對(duì)照組：取與試驗(yàn)組同一供試品溶液和方法，不加菌液，測(cè)定樣品本底菌。
稀釋劑對(duì)照組：用pH=7.0的無(wú)菌氯化鈉一蛋白胨緩沖液替代供試品，加入試驗(yàn)菌，按試驗(yàn)組的方法測(cè)定其菌落數(shù)。
計(jì)算公式：
結(jié)果判斷：稀釋劑對(duì)照組的菌數(shù)回收率應(yīng)均不低于70%，若3次獨(dú)立平行試驗(yàn)中試驗(yàn)組的菌數(shù)回收率均不低于70%，則說(shuō)明可照該供試品溶液制備方法和計(jì)數(shù)方法測(cè)定該供試品的細(xì)菌、霉菌及酵母菌數(shù)。若任一次試驗(yàn)中試驗(yàn)組的菌數(shù)回收率低于70%，則說(shuō)明所采用的方法不可行，應(yīng)改用其他方法（離心法、中和法、薄膜過(guò)濾法等）消除供試品的抑菌作用，并重新進(jìn)行方法驗(yàn)證。驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1（表中薄膜過(guò)濾法：沖洗量為100mL×3次。）
上表試驗(yàn)結(jié)果表明，3個(gè)樣品中的枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌和大腸埃希菌3個(gè)菌株回收率試驗(yàn)，氯達(dá)軟膏、利唑軟膏抑菌作用較強(qiáng)，需采用離心法+薄膜過(guò)濾法聯(lián)用消除供試品的抑菌活性；而硫磺軟膏則用培養(yǎng)基稀釋法0.1mL/皿，回收率能達(dá)到70%以上；氯達(dá)軟膏、利唑軟膏白色念珠菌和黑曲霉的回收率試驗(yàn)需用離心法+薄膜過(guò)濾法聯(lián)用、硫磺軟膏用培養(yǎng)基稀釋法（0.1mL/皿）回收率才能達(dá)到70%以上。
2.4 控制菌檢查法的驗(yàn)證
試驗(yàn)組： 取 “2.2”項(xiàng)下制備的供試品溶液10mL和50～100cfu試驗(yàn)菌加入增菌培養(yǎng)基中，依相應(yīng)控制菌檢查法進(jìn)行檢查。
陰性對(duì)照組： 除菌液為大腸埃希氏菌1mL（10～100cfu），方法同試驗(yàn)組。
上表試驗(yàn)結(jié)果表明，氯達(dá)軟膏與利唑軟膏因其抑菌作用較強(qiáng)，只能采用離心法+薄膜過(guò)濾法檢查金黃色葡萄球菌及銅綠假單胞菌；硫磺軟膏用培養(yǎng)基稀釋法檢查金黃色葡萄球菌（200mL）及常規(guī)法檢查銅綠假單胞菌。
3 討論
上述細(xì)菌、霉菌及酵母菌計(jì)數(shù)驗(yàn)證及控制菌檢查法的驗(yàn)證數(shù)據(jù)表明，3種醫(yī)院外用軟膏制劑均不能按常規(guī)法檢查微生物限度， 抑菌作用較強(qiáng)的品種氯達(dá)軟膏和利唑軟膏需要采用離心法+薄膜過(guò)濾法進(jìn)行微生物限度檢查，而硫磺軟膏則用培養(yǎng)基稀釋法可進(jìn)行微生物限度檢查。
軟膏劑供試品的制備一直比較繁瑣，筆者采用中國(guó)藥典規(guī)定非水溶性供試品的兩種制備方法，發(fā)現(xiàn)平皿法測(cè)定供試品時(shí)，用藥典規(guī)定的方法1更適合；方法2的十四烷酸異丙酯容易與一次性塑料培養(yǎng)皿發(fā)生反應(yīng)，使培養(yǎng)皿表面變白，難以計(jì)數(shù)。因此，在2.2 供試品溶液制備中采用了兩種供試品溶液制備方法。
采用藥典規(guī)定非水溶性供試品的方法2時(shí)，如供試品難溶，可嘗試用勻漿儀低速檔混溶，在供試品的沖洗液中加入1%無(wú)菌聚山梨酯80[13]，可以明顯減少薄膜上藥物的殘留，使計(jì)數(shù)更準(zhǔn)確。
[參考文獻(xiàn)]
[1] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（二部）[S].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：附錄107-116.
[2] 中國(guó)藥品生物制品檢定所.中國(guó)藥品檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范[M].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：351-382.
[3] 賓馳，顏棟林.4種醫(yī)院制劑微生物限度檢查方法驗(yàn)證[J].中國(guó)醫(yī)藥指南，2011，9（22）：226-227.
[4] 鐘國(guó)慶，劉大偉.21種醫(yī)院外用制劑微生物限度檢查方法學(xué)驗(yàn)證[J].中國(guó)藥品標(biāo)準(zhǔn)，2010，11（6）：461-463，476 .
[5] 鐘國(guó)慶，劉大偉，劉華，等.26種醫(yī)院外用制劑微生物限度檢查方法的建立[J].中國(guó)藥品標(biāo)準(zhǔn)，2011，12（4）：307-310.
[6] 黃璐敏，劉杜妙，徐文英，等.2種醫(yī)院軟膏制劑微生物限度檢查方法學(xué)驗(yàn)證[J].中國(guó)藥業(yè)，2012，21（18）：47-49.
[7] 李曉東，李娟，郭朝暉，等.幾種醫(yī)院外用中藥制劑微生物限度檢查方法的建立[J].西部中醫(yī)藥，2012，25（2）：25-27.
[8] 黃依玲.醫(yī)院制劑微生物限度檢查方法的重新驗(yàn)證[J].中國(guó)現(xiàn)代藥物應(yīng)用，2013，7（9）：3-4.
[9] 柳冬梅，殷生楠.10種醫(yī)院制劑微生物限度檢查法驗(yàn)證[J].醫(yī)學(xué)理論與實(shí)踐，2010，23（1）：1-3.
[10] 盧文斌，郭瑜蓉.硝酸咪康唑乳膏微生物限度檢查方法學(xué)驗(yàn)證[J].海峽藥學(xué)，2009，21（9）：48-49.
[11] 游龍.諾氟沙星膠囊微生物限度檢測(cè)方法的驗(yàn)證[J].海峽藥學(xué)，2010，22（12）：77-78.
[12] 張靜華.食品的微生物限度檢驗(yàn)方法驗(yàn)證的研究初探[J].中國(guó)民族民間醫(yī)藥，2012，21（12）：58-59，61.
微生物研究方法范文第3篇
【關(guān)鍵詞】
復(fù)方丹參片；微生物限度檢查；方法學(xué)
復(fù)方丹參片屬于中藥復(fù)方制劑，臨床用于心絞痛（冠心?。?、高血壓、頸椎病以及胸中憋悶等病癥，處方中丹參和冰片兩種中藥材，均含有抑菌物質(zhì)，對(duì)某些細(xì)菌的生長(zhǎng)繁殖有一定的抑制作用，常規(guī)法和培養(yǎng)基稀釋法不能有效檢出該藥品污染存活的細(xì)菌數(shù)量，結(jié)果不能準(zhǔn)確反映該藥品品種的微生物質(zhì)量。根據(jù)《中國(guó)藥典》2010 年版二部附錄微生物限度檢查法的規(guī)定[1]，參照近年來(lái)相關(guān)文獻(xiàn)[2]，本文對(duì)該品種的微生物限度檢查方法進(jìn)行了方法學(xué)研究，通過(guò)研究，采用薄膜過(guò)濾法，可以消除藥品中抑菌成分的干擾，準(zhǔn)確檢出藥品中污染存活的細(xì)菌數(shù)量。
1儀器與材料
1.1儀器LS-B50L 立式滅菌鍋；JJ200 電子天平；JT-B電動(dòng)勻漿儀；MJX-250B-Z霉菌培養(yǎng)箱；SPX-250B-Z 生化培養(yǎng)箱；ZSD-A1160 生化培養(yǎng)箱；格蘭仕微波爐；BJ-2 cD凈化工作臺(tái)；AC2-4S1 ESCO生物安全柜。
1.2培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基 批號(hào)： 100408；玫瑰紅鈉培養(yǎng)基 批號(hào)：100921；營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基 批號(hào)：110406；膽鹽乳糖增菌液 批號(hào)：110121；MUG培養(yǎng)基 批號(hào)：111012；pH7.0氯化鈉蛋白胨緩沖液 批號(hào)：100603；曙紅亞甲藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基 批號(hào)：1011222生產(chǎn)單位：北京三藥科技開(kāi)發(fā)公司。
1.3驗(yàn)證用菌種大腸埃希菌[CMCC（B）44102]；枯草芽孢桿菌[CMCC（B）63501]；金黃色葡萄球菌[CMCC（B）26003]；白色念珠菌[CMCC（F）98001]；黑曲霉菌[CMCC（F）98003]來(lái)源：中國(guó)食品藥品檢定研究院。
1.4菌液制備取經(jīng)35℃培養(yǎng)18～24 h的金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌與枯草芽孢桿菌肉湯液體培養(yǎng)物0.1 ml加入9 ml 0.9%氯化鈉溶液中，10倍稀釋至10.-4～10.-6約為50～100 cfu/ml，做活菌計(jì)數(shù)備用。取經(jīng)25℃培養(yǎng)18～24 h的白色念珠菌液體培養(yǎng)物0.1 ml加入9 ml 0.9%氯化鈉溶液中，10倍稀釋至10.-4～10.-6約為50～100 cfu/ml，做活菌計(jì)數(shù)備用。取經(jīng)培養(yǎng)一周的黑曲霉斜面培養(yǎng)物，加0.9%氯化鈉溶液3 ml，洗下霉菌孢子，取0.1 ml加入9 ml 0.9%氯化鈉溶液中，10倍稀釋至10.-5～10.-7約為50～100 cfu/ml，做活菌計(jì)數(shù)備用。
2細(xì)菌、霉菌及酵母菌計(jì)數(shù)方法的驗(yàn)證
2.1供試液制備取本品10 g 置錐形瓶中，加入pH7.0無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液100 ml，以4000轉(zhuǎn)/分開(kāi)機(jī)1分，即為1：10的供試液。
2.2回收率測(cè)定
2.2.1供試品對(duì)照組①培養(yǎng)基稀釋法：取1∶10的供試液2份，每份1 ml分別注入5個(gè)平皿中，傾注營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基和玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基各約15 ml，點(diǎn)計(jì)菌落數(shù)。②薄膜過(guò)濾法：取供試液1 ml過(guò)濾，用pH7.0無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液沖洗濾膜2次，每次100 ml，取出濾膜菌面朝上貼于營(yíng)養(yǎng)瓊脂和玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基平板上，測(cè)定供試品本底的菌數(shù)。結(jié)果見(jiàn)表1。
2.2.2試驗(yàn)組取供試液1 ml按供試品對(duì)照組同法操作，同時(shí)加入50～100 cfu相應(yīng)試驗(yàn)菌1 ml，置規(guī)定溫度培養(yǎng)，觀察結(jié)果并計(jì)數(shù)，結(jié)果見(jiàn)表1。
2.2.3菌液組分別取菌液1 ml，注入平皿中傾注瓊脂培養(yǎng)基，待凝固后，置規(guī)定溫度培養(yǎng)，觀察結(jié)果，測(cè)定所加入的試驗(yàn)菌數(shù)，結(jié)果見(jiàn)表1 。
微生物研究方法范文第4篇
目的：建立陳香露白露片微生物限度檢查方法。方法：根據(jù)該樣品的微生物限度標(biāo)準(zhǔn)，按《中國(guó)藥典》2005年版一部附錄微生物限度檢查法的驗(yàn)證試驗(yàn)指導(dǎo)原則，用委托廠家3個(gè)批號(hào)的陳香露白露片進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)，以考察確定陳香露白露片微生物限度的檢查方法。首先用常規(guī)法進(jìn)行預(yù)試驗(yàn)，初步考察該樣品對(duì)試驗(yàn)菌檢測(cè)的影響，然后根據(jù)預(yù)試驗(yàn)結(jié)果，用離心沉淀集菌法進(jìn)行再試驗(yàn)。結(jié)果：常規(guī)法試驗(yàn)時(shí)，大腸埃希菌、白色念珠菌的回收率均大于70%，而金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌的回收率小于70%，控制菌檢查檢出試驗(yàn)菌。采用離心沉淀集菌法試驗(yàn)時(shí)，可以有效消除抑菌作用，使金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌的回收率大于70%。結(jié)論：采用離心沉淀集菌法可以有效消除抑菌作用，簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確。
【關(guān)鍵詞】 微生物限度檢查 驗(yàn)證試驗(yàn) 離心沉淀集菌法
Validation of Microbial Limit Test for Chenxianglubailu Tablets
YIN Chunrong， SUN Ping， XIAO Juli
（The Institute of Food and Drug Control， Yunnan Chuxiong 675000， China; Yunnan Longfa Pharmaceutical Limited Company， Yunnan Chuxiong 675000， China）
［Abstract］ Objective: To establish a microbial limit test method for Chenxianglubailu tablets. Methods: The microbial limit test for Chenxianglubailu tablets was studied according to the guidance of the microbial limit standard for this product and the principle of the validation of microbiological test in “Chinese Pharmacopoeia” (2005)， and tested in three batches of Chenxianglubailu tablets. The test was conducted with routine and centrifugal precipitation methods. Results: When doing routine test the rate of recovery of escherichia coli and candida albicans was over 70%， but the rate of recovery of staphylococcus aureus and bacillus subtilis was below 70%. Test organism was obtained by controlled bacteria detection test. The results showed that centrifugal precipitation test could eliminate bacteriostasis effectively. Conclusions: Centrifugal precipitation test could eliminate bacteriostasis effectively and the test was simple and accurate.
［Key words］ Microbial limit test; Verification test; Centrifugal precipitation methods
陳香露白露片是一復(fù)方中成藥制劑，由川木香、大黃、石菖蒲、陳皮、甘草、次硝酸鉍、氧化鎂、碳酸氫鈉組成，用于胃潰瘍、糜爛性胃炎、胃酸過(guò)多等疾?。?］?！吨袊?guó)藥典》2005年版規(guī)定，在進(jìn)行藥品微生物限度檢查時(shí)，應(yīng)對(duì)所用方法進(jìn)行驗(yàn)證，以確認(rèn)所采用的方法適合于該藥品的微生物限度檢查。為此，筆者對(duì)陳香露白露片的微生物限度檢查方法進(jìn)行了驗(yàn)證試驗(yàn)。
1 試驗(yàn)材料
1.1 樣品
陳香露白露片（云南龍發(fā)制藥有限公司；規(guī)格：100片/瓶；批號(hào)：060401、060402、060403）。
1.2 稀釋劑及培養(yǎng)基
pH 7.0無(wú)菌氯化鈉蛋白胨緩沖液、0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液、TTC營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基、膽鹽乳糖培養(yǎng)基、MUG培養(yǎng)基、膽鹽乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基、營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基、改良馬丁培養(yǎng)基。
1.3 菌種
金黃色葡萄球菌［CMCC（B）26003］、大腸埃希菌［CMCC（B）44102］、枯草芽孢桿菌［CMCC（B）63501］、白色念珠菌［CMCC（F）98001］，均來(lái)源于云南省食品藥品檢驗(yàn)所。
2 驗(yàn)證試驗(yàn)
2.1 試驗(yàn)菌液的制備
接種金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草芽孢桿菌的新鮮培養(yǎng)物至營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，置30～35 ℃培養(yǎng)18～24 h，分別取上述培養(yǎng)物 1 mL，加0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液 9 mL，10倍遞增稀釋，取稀釋液1 mL，加入到1個(gè)平皿中，每種菌的每1個(gè)稀釋級(jí)平行制備2個(gè)平皿，傾注營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，置30～35 ℃培養(yǎng)24～48 h，計(jì)數(shù)，選擇每1 mL含菌數(shù)為50～100 cfu的稀釋級(jí)菌懸液，作為驗(yàn)證試驗(yàn)用菌懸液。接種白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物至改良馬丁培養(yǎng)基中，置23～28 ℃培養(yǎng)24～48 h，取上述培養(yǎng)物1 mL，加0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液9 mL，10倍遞增稀釋，取稀釋液1 mL，加入到1個(gè)平皿中，每1個(gè)稀釋級(jí)平行制備2個(gè)平皿，傾注玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基，置23～28 ℃培養(yǎng)72 h，計(jì)數(shù)，選擇每毫升含菌數(shù)為50～100 cfu的稀釋級(jí)菌懸液，作為驗(yàn)證試驗(yàn)用菌懸液。
2.2 供試液的制備
從兩瓶樣品中取樣品10 g，至滅菌勻漿杯中，加pH 7.0無(wú)菌氯化鈉蛋白胨緩沖液至100 mL，經(jīng)勻漿儀混勻，制成1∶10的供試液。陳香露白露片3個(gè)批號(hào)樣品同法操作。
2.3 細(xì)菌數(shù)、霉菌及酵母菌數(shù)計(jì)數(shù)方法的驗(yàn)證
2.3.1 預(yù)試驗(yàn)（常規(guī)法）
（1）試驗(yàn)組：取1∶10的供試液1 mL，加入到1個(gè)平皿中，同法制備8個(gè)平皿，依次加入金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草芽孢桿菌、白色念珠菌的菌懸液1 mL（含50～100 cfu），每種菌平行制備2個(gè)平皿；取1∶100的供試液1 mL，加入到1個(gè)平皿中，同法制備8個(gè)平皿，依次加入金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草芽孢桿菌、白色念珠菌的菌懸液1 mL（含50～100 cfu），每種菌平行制備2個(gè)平皿；取1∶1 000的供試液1 mL，加入到1個(gè)平皿中，同法制備8個(gè)平皿，依次加入金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草芽孢桿菌、白色念珠菌的菌懸液1 mL（含50～100 cfu），每種菌平行制備2個(gè)平皿。含大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌的試驗(yàn)平皿傾注營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，置30～35 ℃培養(yǎng)48 h，計(jì)數(shù)；白色念珠菌的試驗(yàn)平皿傾注玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基，置23～28 ℃培養(yǎng)72 h，計(jì)數(shù)。
（2）菌液組：分別取已制備好的金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草芽孢桿菌、白色念珠菌的菌懸液1 mL（含50～100 cfu），加入到1個(gè)平皿中，每種菌平行制備2個(gè)平皿。含金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草芽孢桿菌的試驗(yàn)平皿傾注營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，置30～35 ℃培養(yǎng)48 h，計(jì)數(shù)；白色念珠菌的試驗(yàn)平皿傾注玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基，置23～28 ℃培養(yǎng)72 h，計(jì)數(shù)。
（3）供試品對(duì)照組：取1∶10供試液1 mL，加入到1個(gè)平皿中，同法制備4個(gè)平皿。取1∶100供試液1 mL，加入到1個(gè)平皿中，同法制備4個(gè)平皿。取1∶1 000的供試液1 mL，加入到1個(gè)平皿中，同法制備4個(gè)平皿。每一稀釋級(jí)中的2個(gè)平皿傾注營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，置30～35 ℃培養(yǎng)48 h，計(jì)數(shù)；每一稀釋級(jí)中的另2個(gè)平皿傾注玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基，置23～28 ℃培養(yǎng)72 h，計(jì)數(shù)。
（4）試驗(yàn)組菌回收率計(jì)算：菌回收率（%）=（試驗(yàn)組平均菌落數(shù)-供試品對(duì)照組平均菌落數(shù)）∕菌液組平均菌落數(shù)。
（5）結(jié)果：見(jiàn)表1。大腸埃希菌、白色念珠菌在樣品的1∶10、1∶100、1∶1 000供試液中回收率均大于70%；金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌在樣品的1∶1 000供試液中回收率均大于70%，在樣品的1∶10、1∶100供試液中回收率均小于70%。根據(jù)上述情況，筆者采用離心沉淀集菌法進(jìn)行再試驗(yàn)。
表1 陳香露白露片的細(xì)菌數(shù)、霉菌及酵母菌數(shù)常規(guī)方法的驗(yàn)證預(yù)試驗(yàn)結(jié)果（略）
2.3.2 再試驗(yàn)（離心沉淀集菌法）
（1）試驗(yàn)組：從100 mL的1∶10供試液中取上清液10 mL，3 000 r/min離心20 min，棄去上清液，留底部集菌液約2 mL，加pH 7.0無(wú)菌氯化鈉蛋白胨緩沖液補(bǔ)至10 mL，混勻。取其1 mL加入到1個(gè)平皿中，同法制備4個(gè)平皿，依次加入金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌的菌懸液1 mL（含50～100 cfu），每種菌平行制備2個(gè)平皿。另取其1 mL，加入到9 mL pH 7.0無(wú)菌氯化鈉蛋白胨緩沖液中，混勻，即為1∶100供試液。取1∶100供試液1 mL加入到1個(gè)平皿中，同法制備4個(gè)平皿，依次加入金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌的菌懸液l mL（含50～100 cfu），每種菌平行制備2個(gè)平皿。在制備好的平皿中傾注營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，置30～35 ℃培養(yǎng)48 h，計(jì)數(shù)。
（2）菌液組：分別取已制備好的金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌的菌懸液1 mL（含50～100 cfu），加入到1個(gè)平皿中，每種菌平行制備2個(gè)平皿，傾注營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，置30～35 ℃培養(yǎng)48 h，計(jì)數(shù)。
（3）供試品對(duì)照組：取1∶10供試液1 mL，加入到1個(gè)平皿中，同法制備2個(gè)平皿。取1∶100供試液1 mL，加入到1個(gè)平皿中，同法制備2個(gè)平皿。同法制備4個(gè)平皿。傾注營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，置30～35 ℃培養(yǎng)48 h，計(jì)數(shù)。
（4）試驗(yàn)組菌回收率計(jì)算：菌回收率（%）=（試驗(yàn)組平均菌落數(shù)﹣供試品對(duì)照組平均菌落數(shù)）∕菌液組平均菌落數(shù)
（5）結(jié)果：見(jiàn)表2。采用離心沉淀集菌法后，可去除供試液對(duì)金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌的抑菌作用，使菌回收率大于70%。
表2 陳香露白露片的金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌離心沉淀集菌法的驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果（略）
2.4 控制菌檢查方法的驗(yàn)證
2.4.1 大腸埃希菌檢查方法的驗(yàn)證
（1）試驗(yàn)組：取1∶10供試液10 mL和大腸埃希菌的菌懸液1 mL（含50～100 cfu），加入到膽鹽乳糖增菌液100 mL中，置35～37 ℃培養(yǎng)18～24 h，按《中國(guó)藥典》2005年版一部附錄微生物限度檢查法中的大腸埃希菌檢查法進(jìn)行檢查。
（2）陰性對(duì)照組：取1∶10供試液10 mL和金黃色葡萄球菌的菌懸液1 mL（含50～100 cfu），加入到膽鹽乳糖增菌液100 mL中，置35～37 ℃培養(yǎng)18～24 h，按《中國(guó)藥典》2005年版一部附錄微生物限度檢查法中的大腸埃希菌檢查法進(jìn)行檢查。
（3）供試品對(duì)照組：取1∶10供試液10 mL，加入到膽鹽乳糖增菌液100 mL中，置35～37 ℃培養(yǎng)18～24 h，按《中國(guó)藥典》2005年版一部附錄微生物限度檢查法中的大腸埃希菌檢查法進(jìn)行檢查。
（4）結(jié)果：試驗(yàn)組檢出大腸埃希菌，陰性菌對(duì)照組結(jié)果為陰性，供試品對(duì)照組未檢出大腸埃希菌。
2.4.2 大腸菌群檢查方法的驗(yàn)證
（1）試驗(yàn)組：取1∶10、1∶100、1∶1 000供試液各1 mL和大腸埃希菌的菌懸液1 mL（含50～100 cfu），加入到3支膽鹽乳糖發(fā)酵培養(yǎng)液中，置35～37 ℃培養(yǎng)18～24 h，按《中國(guó)藥典》2005年版一部附錄微生物限度檢查法中的大腸菌群檢查法進(jìn)行檢查。
（2）陰性對(duì)照組：取1∶10、1∶100、1∶1 000供試液各1 mL和金黃色葡萄球菌的菌懸液1 mL（含50～100 cfu），加入到3支膽鹽乳糖發(fā)酵培養(yǎng)液中，置35～37 ℃培養(yǎng)18～24 h，按《中國(guó)藥典》2005版一部附錄微生物限度檢查法中的大腸菌群檢查法進(jìn)行檢查。
（3）供試品對(duì)照組：取1∶10、1∶100、1∶1 000供試液各1 mL，加入到3支膽鹽乳糖發(fā)酵培養(yǎng)液中，置35～37 ℃培養(yǎng)18～24 h，按《中國(guó)藥典》2005版一部附錄微生物限度檢查法中的大腸菌群檢查法進(jìn)行檢查。
（4）結(jié)果：試驗(yàn)組檢出大腸菌群，陰性菌對(duì)照組結(jié)果為陰性，供試品對(duì)照組未檢出大腸菌群。
3 討論
采用常規(guī)法試驗(yàn)時(shí)，該樣品對(duì)大腸埃希菌、白色念珠菌的加菌回收率均大于70%，證明其對(duì)上述2種供試菌無(wú)抑菌作用。該樣品對(duì)金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌有抑菌作用，在1∶10、1∶100的稀釋級(jí)，其加菌回收率小于70%，低于《中國(guó)藥典》2005年版規(guī)定的回收率不得低于70%才視為無(wú)抑菌作用的要求。結(jié)合該樣品的物理特性和常規(guī)法試驗(yàn)結(jié)果，采用離心沉淀集菌法進(jìn)行試驗(yàn)后，金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌的加菌回收率可大于70%。故陳香露白露片的細(xì)菌數(shù)檢查可采用離心沉淀集菌法，霉菌及酵母菌數(shù)的檢查采用常規(guī)法。
由控制菌檢查方法的驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果表明，采用常規(guī)法試驗(yàn)時(shí)，該樣品對(duì)大腸埃希菌、大腸菌群的檢查無(wú)干擾，故陳香露白露片的控制菌檢查可采用常規(guī)法。
因安全原因，黑曲霉［CMCC（F）98003］的驗(yàn)證試驗(yàn)未進(jìn)行。
微生物研究方法范文第5篇
【關(guān)鍵詞】發(fā)散思維 生物教學(xué) 對(duì)策
【中圖分類(lèi)號(hào)】G633.91 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A 【文章編號(hào)】2095-3089（2015）10-0176-02
發(fā)散思維在生物教學(xué)中合理的運(yùn)用能夠激發(fā)學(xué)生學(xué)習(xí)生物的積極性和主動(dòng)性，提高中學(xué)生物教學(xué)質(zhì)量。教師在教學(xué)中要采取相應(yīng)措施激發(fā)學(xué)生的學(xué)習(xí)興趣，培養(yǎng)學(xué)生發(fā)散性思維能力的發(fā)展。學(xué)生發(fā)散思維是在教師合理引導(dǎo)性和教育下進(jìn)行的，因此，教師要構(gòu)建和諧的課堂氛圍，還要對(duì)學(xué)生進(jìn)行知識(shí)講解，與學(xué)生一起進(jìn)行討論學(xué)習(xí)，培養(yǎng)學(xué)生良好的學(xué)習(xí)習(xí)慣和學(xué)習(xí)行為，讓學(xué)生在學(xué)習(xí)中自由的進(jìn)行探索，提高自己對(duì)生物的認(rèn)知能力，拓展自己的思維能力，從根本上促進(jìn)中學(xué)生物教學(xué)質(zhì)量的提高。
1.發(fā)散思維的內(nèi)涵及特點(diǎn)
1.1發(fā)散思維的內(nèi)涵
發(fā)散思維是美國(guó)心理學(xué)家J.P.吉爾福特提出的，也稱為擴(kuò)散性思維。是指在考慮和解決問(wèn)題中通過(guò)自己對(duì)問(wèn)題的分析、判斷，不受外界各種因素的干擾，最終達(dá)到解決問(wèn)題目的的思維方式。發(fā)散思維在中學(xué)教育中非常重要，中學(xué)階段也是學(xué)生思維能力比較活躍的階段，教師通過(guò)對(duì)學(xué)生合理的引導(dǎo)和教育，能夠激發(fā)學(xué)生對(duì)問(wèn)題的想象，拓展自己思維能力的培養(yǎng)，提高自己在學(xué)習(xí)中解決問(wèn)題的能力。
1.2發(fā)散思維的特點(diǎn)
發(fā)散思維具有以下幾個(gè)方面的特征：第一，流暢性。主要是指學(xué)生面對(duì)問(wèn)題時(shí)能夠流暢的發(fā)揮自己的想象力，不受到其它因素的干擾，拓展自己的思維空間，對(duì)問(wèn)題進(jìn)行有效的探究。第二，變通性。發(fā)散思維與一般的思維有很大的不同，要求在對(duì)問(wèn)題的思考中進(jìn)行有效的變通，對(duì)問(wèn)題舉一反三，思考到一般人不能思考的領(lǐng)域。第三，獨(dú)特性。發(fā)散思維與一般思維的區(qū)別就是發(fā)散思維在對(duì)問(wèn)題思考中能夠發(fā)現(xiàn)一般人發(fā)現(xiàn)不了的地方，能夠?qū)?wèn)題進(jìn)行深入本質(zhì)的思考。教師在對(duì)學(xué)生教育過(guò)程中要激發(fā)學(xué)生對(duì)發(fā)散思維的培養(yǎng)，提高學(xué)生的思維能力。
2.提高學(xué)生發(fā)散性思維培養(yǎng)的教學(xué)探索
2.1加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)教學(xué)，培養(yǎng)學(xué)生的發(fā)散性思維
生物教學(xué)與一般科目教學(xué)的差別就在于生物教學(xué)的實(shí)驗(yàn)課程比較多，這就要求學(xué)生不僅要有課堂分析能力，而且要有動(dòng)手能力，互相結(jié)合才能拓展學(xué)生學(xué)習(xí)生物的興趣，激發(fā)學(xué)生對(duì)生物的思維動(dòng)力。中學(xué)生物教師在教學(xué)過(guò)程中要對(duì)學(xué)生進(jìn)行引導(dǎo)，讓學(xué)生自己參與實(shí)驗(yàn)，增加動(dòng)手能力，這樣學(xué)生對(duì)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中遇到的問(wèn)題就會(huì)積極的思考，從而能夠激發(fā)學(xué)生思維能力的培養(yǎng)。
2.2加強(qiáng)引導(dǎo)，充分發(fā)揮學(xué)生的創(chuàng)造潛能
中學(xué)生物教學(xué)離不開(kāi)教師的引導(dǎo)，特別是在實(shí)驗(yàn)教學(xué)過(guò)程中加強(qiáng)教師引導(dǎo)更加能夠促進(jìn)學(xué)生發(fā)散思維能力的培養(yǎng)。比如在實(shí)驗(yàn)教學(xué)中讓學(xué)生對(duì)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行自主設(shè)計(jì)、自己動(dòng)手，分析結(jié)果。教師只是對(duì)實(shí)驗(yàn)遇到的問(wèn)題進(jìn)行有效的引導(dǎo)，對(duì)學(xué)生的思考進(jìn)行啟發(fā)，這樣學(xué)生在教師的啟發(fā)下就能夠?qū)?wèn)題進(jìn)行深入的思考，激發(fā)自己的思維能力，促進(jìn)發(fā)散思維能力的提高。同時(shí)，對(duì)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中產(chǎn)生的異?，F(xiàn)象和結(jié)果要引導(dǎo)學(xué)生進(jìn)行探究式分析，比如為什么會(huì)出現(xiàn)這樣的結(jié)果，導(dǎo)致這些結(jié)果產(chǎn)生的原因是什么，這些結(jié)果與日常生活有沒(méi)有必然的聯(lián)系等等。這些都能夠提高學(xué)生的發(fā)散思維能力。
2.3 教師要提高自身的專業(yè)知識(shí)
專業(yè)的生物知識(shí)文化是教師吸引學(xué)生學(xué)習(xí)興趣，促進(jìn)思維能力發(fā)展的重要因素之一。教師的專業(yè)水平和教學(xué)效果能夠給學(xué)生帶來(lái)積極的影響。因此，教師不僅要具備基本的教學(xué)專業(yè)知識(shí)，而且在教學(xué)過(guò)程中要運(yùn)用心理學(xué)的教學(xué)方法不斷提高學(xué)生學(xué)習(xí)生物的心理素質(zhì)和綜合能力。用心理理論與教學(xué)相關(guān)方法來(lái)指導(dǎo)對(duì)自己的教學(xué)實(shí)踐。因?yàn)閷W(xué)生在學(xué)習(xí)過(guò)程中不僅受自身學(xué)習(xí)能力的影響，而且受到心理因素的影響，所以，教師要對(duì)不同的學(xué)生進(jìn)行不同的教學(xué)。教師只有調(diào)動(dòng)學(xué)生學(xué)習(xí)生物各個(gè)方面的積極性和主動(dòng)性，增加學(xué)生的心理素質(zhì)，中學(xué)學(xué)生才能夠在教師的指導(dǎo)下進(jìn)行有效的學(xué)習(xí)，促進(jìn)自己發(fā)散思維能力的培養(yǎng)。
發(fā)散思維在生物教學(xué)中合理的運(yùn)用能夠激發(fā)學(xué)生學(xué)習(xí)生物的積極性和主動(dòng)性，提高中學(xué)生物教學(xué)質(zhì)量。教師在教學(xué)中要采取相應(yīng)措施激發(fā)學(xué)生的學(xué)習(xí)興趣，培養(yǎng)學(xué)生發(fā)散性思維能力的發(fā)展。在教學(xué)實(shí)際中教師要加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)教學(xué)，培養(yǎng)學(xué)生的發(fā)散性思維；加強(qiáng)引導(dǎo)，充分發(fā)揮學(xué)生的創(chuàng)造潛能；教師要構(gòu)建和諧的課堂氛圍，還要對(duì)學(xué)生進(jìn)行知識(shí)講解，與學(xué)生一起進(jìn)行討論學(xué)習(xí)，培養(yǎng)學(xué)生良好的學(xué)習(xí)習(xí)慣和學(xué)習(xí)行為，讓學(xué)生在學(xué)習(xí)中自由的進(jìn)行探索，提高自己對(duì)生物的認(rèn)知能力，拓展自己的思維能力，從根本上促進(jìn)中學(xué)生物教學(xué)質(zhì)量的提高。
參考文獻(xiàn)：
[1]盧文祥.新課程理念與初中生物課程改革[M].長(zhǎng)春：東北師范大學(xué)出版社，2010
