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微生物培養(yǎng)基報告范文第1篇

【關(guān)鍵詞】生活飲用水；微生物檢驗；質(zhì)量控制

隨著新國標的全面實施和實驗室資質(zhì)認定工作的持續(xù)開展，質(zhì)量控制和管理工作越來越受到重視。由于微生物的不穩(wěn)定性，全國城市供水水質(zhì)監(jiān)測機構(gòu)質(zhì)量控制考核已經(jīng)開展了12次，但一直缺少微生物項目。微生物檢驗?zāi)軌蚍从成铒嬘盟l(wèi)生狀況，有效控制生活飲用水微生物風險，保證水質(zhì)安全。為了保證檢驗結(jié)果的可靠性，開展質(zhì)量控制是十分必要的。而GB/T5750-2006《生活飲用水標準檢驗方法》水質(zhì)分析質(zhì)量控制，主要是針對理化指標的，對微生物檢驗質(zhì)量控制基本沒有涉及。本文從采樣、環(huán)境、儀器、培養(yǎng)基、人員和檢驗操作等幾個方面淺析了生活飲用水微生物檢驗質(zhì)量控制，對供水企業(yè)微生物的日常檢驗有一定的借鑒意義。

1 微生物樣品采樣的質(zhì)量控制[1]

一個有效的質(zhì)量控制程序必須從樣品的采集開始。微生物樣品采集除了滿足GB/T5750-2006《生活飲用水標準檢驗方法》的要求，還要注意以下兩點：一、應(yīng)放水數(shù)分鐘直至兩次渾濁度測得值一致，確保排除滯留水和生物膜的影響；二、采樣后要及時在0℃～4℃避光保存（帶冰袋的保溫箱），且在4h以內(nèi)檢驗。

2 微生物檢驗環(huán)境的質(zhì)量控制

潔凈室的操作環(huán)境對檢驗結(jié)果的質(zhì)量影響很大，操作區(qū)域潔凈度應(yīng)達到百級。檢驗操作時應(yīng)遵循無菌操作要求。防止檢驗環(huán)境和人員對檢驗樣品的污染，以及樣品之間的交叉污染。

（1）微生物實驗室布局應(yīng)合理，分區(qū)清晰。要有準備室、潔凈室和培養(yǎng)室等，并與實驗流程相符合，盡量降低往返和迂回的概率。

（2）潔凈室應(yīng)定期檢查沉降菌并記錄。如不符合要求應(yīng)及時清洗、更換高效過濾器和紫外燈，再檢查沉降菌直至滿足要求。

（3）應(yīng)制定潔凈室的清潔、消毒、滅菌、使用和應(yīng)急處理程序。

（4）培養(yǎng)室

3 儀器設(shè)備的質(zhì)量控制

高壓滅菌器和干燥箱（能穩(wěn)定達到160℃）是微生物檢驗必不可少的滅菌器，是保證微生物檢驗結(jié)果可靠性的前提條件。無論是滅菌還是培養(yǎng)，溫度和持續(xù)時間是關(guān)鍵參數(shù)。

（1）高壓鍋、培養(yǎng)箱、干燥箱、天平、移液器等應(yīng)定期檢定，保證儀器設(shè)備在檢定有效期內(nèi)使用。

（2）培養(yǎng)箱應(yīng)有良好的隔熱效果，保證一年四季培養(yǎng)溫度變化在±1℃內(nèi)。培養(yǎng)箱和冰箱要有早晚兩次溫控記錄。

（3）高壓滅菌鍋應(yīng)采用適宜的方式做滅菌效果檢查。

（4）已滅菌的培養(yǎng)基和采樣瓶等應(yīng)明確標示，并注明保質(zhì)期。

4 培養(yǎng)基的質(zhì)量控制

（1）購買通過ISO9000質(zhì)量管理體系認證的廠家的產(chǎn)品。

（2）每到一批營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基用水源水檢驗，與近期已驗收的培養(yǎng)基作對比。乳糖蛋白胨培養(yǎng)基用含少量大腸埃希菌的水樣采用15管法檢驗，應(yīng)有陽性管和陰性管。

（3）培養(yǎng)基的滅菌處理應(yīng)按GB/T5750-2006《生活飲用水標準檢驗方法》嚴格執(zhí)行，特別是含糖類的培養(yǎng)基，應(yīng)采用115℃維持20min高壓滅菌。

（4）要有培養(yǎng)基配制記錄。保證培養(yǎng)基在有效期內(nèi)使用，結(jié)塊的培養(yǎng)基不得使用。

5 微生物檢測操作的質(zhì)量控制

微生物檢驗操作每一動作步驟都關(guān)系結(jié)果的可靠性，均需嚴格執(zhí)行無菌操作技術(shù)，防止人為污染、環(huán)境污染和樣品交叉污染。另外，應(yīng)特別注意以下幾個方面：

（1）要有操作手冊包括檢驗方法和無菌操作規(guī)程，并嚴格遵守。質(zhì)量監(jiān)督員應(yīng)對無菌操作進行重點監(jiān)督并記錄。

（2）每批飲用水檢測，應(yīng)有陽性和陰性對照?？梢圆捎门囵B(yǎng)基空白、滅菌水和水源水檢測作對照。

（3）即使在百級潔凈區(qū)檢測，仍然要在酒精燈火焰上方無菌操作。

（4）試管、燒瓶和樣品瓶，開塞或蓋之前要對口部進行消毒。操作后應(yīng)及時蓋好塞子或瓶蓋，切忌口部向上和長時間暴露于空氣中。

（5）取樣和傾注培養(yǎng)基一定要充分搖勻。正確認識微生物在水中的聚集狀態(tài)，采取無規(guī)則的振搖手勢充分混勻。

6 檢驗人員的要求

由于微生物檢驗采取的是活菌培養(yǎng)法，具有不穩(wěn)定性和隨機性，微生物檢驗人員除了要具備水質(zhì)分析基礎(chǔ)知識和技能以外，還要能正確理解和運用無菌操作技術(shù)，避免環(huán)境、人員和樣品的相互污染；還要能認識到檢驗微生物與檢驗均質(zhì)樣品的不同本質(zhì)，盡量減少取樣的隨機性。

（1）要具備微生物檢驗的專業(yè)基礎(chǔ)知識和熟練的檢驗操作技能，最好是全日制大專以上微生物相關(guān)專業(yè)畢業(yè)，并持證上崗。

（2）要不斷地學習飲用水微生物檢驗知識和技能，并有培訓和考核記錄。

7 平行誤差控制

微生物檢驗的平行誤差不能簡單的以相對誤差來評判。微生物檢驗結(jié)果是以一定的置信水平為基礎(chǔ)的，涉及生物統(tǒng)計學知識，對于微生物專業(yè)人員較缺乏的供水企業(yè)來說是難以掌握的。長期的菌落總數(shù)檢驗結(jié)果表明：當平皿計數(shù)大于300時，平行檢測結(jié)果在一個數(shù)量級；當平皿計數(shù)在150～300時，相對誤差在20%之內(nèi)；當平皿計數(shù)在60～150時，相對誤差在15%之內(nèi)；當平皿計數(shù)20～60時，絕對誤差在10以內(nèi)；當平皿計數(shù)小于20時，絕對誤差在5以內(nèi)。當檢測結(jié)果超出上述規(guī)律時，需追溯每個檢驗過程和步驟，從采樣、環(huán)境、儀器、培養(yǎng)基、人員和檢驗操作等幾個方面逐步控制。

8 實驗室間比對

通過有效的比對，找出不足和差距，不斷提高實驗室技術(shù)水平。可以利用每次的本地衛(wèi)生監(jiān)督檢查做實驗室間的比對。

9 結(jié)語

微生物檢驗質(zhì)量控制是一項長期、艱苦、細致而又繁瑣的工作，貫穿于從樣品的采集到檢驗報告的發(fā)出的整個過程[5 ]。隨著人們對飲用水質(zhì)量的要求越來越高，要求我們更好地做好質(zhì)量控制工作，提供客觀可靠的檢驗數(shù)據(jù)。只要我們在日常工作中從采樣、環(huán)境、儀器、培養(yǎng)基、人員和檢驗操作等幾個方面著手，并形成記錄實現(xiàn)檢驗結(jié)果可追溯，就能做好微生物檢驗質(zhì)量控制工作。

參考文獻：

[1]GB/T 5750-2006 生活飲用水標準檢驗方法[S].

[2]GB/T 27450-2008實驗室質(zhì)量控制規(guī)范―食品微生物檢測[S].

[3]中國城鎮(zhèn)供水協(xié)會編.水質(zhì)檢驗工[M].中國建筑工業(yè)出版社，2005.

微生物培養(yǎng)基報告范文第2篇

【關(guān)鍵詞】調(diào)味品；微生物檢驗；無菌操作

調(diào)味品是指包括醬油、醬類和醋等以豆類為原料發(fā)酵而制成的食品，是人們生活必備食品之一。由于調(diào)味品通常是利用微生物發(fā)酵工藝制得，如工藝控制不當，滅菌處理不徹底很容易造成微生物的殘留和繁殖，影響產(chǎn)品的品質(zhì)甚至危及人們的身體健康。食品微生物檢驗的目的就是要為生產(chǎn)出安全、衛(wèi)生、符合產(chǎn)品標準的食品提供科學依據(jù)，因而對食品微生物進行檢驗至關(guān)重要。食品衛(wèi)生微生物學檢驗的標準都制定了菌落總數(shù)、大腸菌群和致病菌等微生物指標來控制產(chǎn)品質(zhì)量，國家標準中也對調(diào)味品的微生物學檢驗方法、步驟做了具體規(guī)定，但在實際工作中還存在著許多復(fù)雜因素，忽視這些因素很可能給檢驗結(jié)果帶來偏差，甚至錯誤。本人就調(diào)味品微生物檢驗中應(yīng)注意的幾個環(huán)節(jié)談幾點認識。

1人的因素

實驗室應(yīng)該由具有一定資質(zhì)的微生物學或相近專業(yè)的人來操作，必須經(jīng)考核合格后持證上崗，檢驗人員必須有強烈的責任意識，嚴格遵守操作規(guī)程，具有較熟練的操作技能。微生物檢驗人員不僅要有嚴謹?shù)墓ぷ鲬B(tài)度，還要具有質(zhì)量意識，有發(fā)現(xiàn)問題!解決問題的能力"不僅要掌握微生物學的有關(guān)基礎(chǔ)知識，還要掌握國家食品衛(wèi)生微生物檢驗方法［1］GB/T4789-2003!調(diào)味品的國家標準!行業(yè)標準，熟悉標準化法!計量法規(guī)的相關(guān)知識，熟悉調(diào)味品的生產(chǎn)工藝。

2培養(yǎng)基和試劑

培養(yǎng)基和試劑應(yīng)該有供應(yīng)商提品質(zhì)控證書，并以外觀、批號、PH值、滅菌要求、選擇性等進行初步評估，質(zhì)量必須符合有關(guān)的質(zhì)量標準，再按照說明書的貯藏條件保存。培養(yǎng)基應(yīng)在玻璃容器內(nèi)配制，避免與銅、鐵制器皿接觸，配制過程應(yīng)嚴格按GB/T4789-2003及新國標GB4789-2010的相關(guān)內(nèi)容規(guī)定。配制時按規(guī)定的配方和順序添加，不得隨意更改，并使用蒸餾水，以免自來水中的漂白粉、氯氣等抑制微生物生長［2］。培養(yǎng)基配好后，先調(diào)節(jié)PH值，再高壓蒸汽滅菌，并應(yīng)及時使用，即使4℃冰箱存放，也要在2周內(nèi)用完，已開封用過的培養(yǎng)基不得再次使用。有條件可參加國際食品微生物與食品衛(wèi)生委員會（ICFMH）提供的關(guān)于培養(yǎng)基質(zhì)控方法進行質(zhì)控，配制培養(yǎng)基和藥劑應(yīng)有原始記錄，保證檢驗數(shù)據(jù)的可溯源性。

3設(shè)施、環(huán)境

實驗室應(yīng)具有進行微生物檢驗適宜充分的設(shè)施條件，包括檢測設(shè)施（專用于微生物檢測和相關(guān)活動）及輔助設(shè)施（大門、走廊、管理區(qū)、樣品區(qū)、清潔間）特殊的設(shè)備要在特殊的環(huán)境下放置和操作。

3.1無菌實驗室的建設(shè)應(yīng)符合GB19489的規(guī)定，符合無回路的原則，設(shè)有人流和物流通道。

3.2儀器設(shè)備:

微生物檢驗室應(yīng)配備足夠檢驗工作需要的儀器設(shè)備，包括恒溫培養(yǎng)箱、電熱干燥箱、高壓蒸汽滅菌器、天平、恒溫水浴、生物顯微鏡、凈化工作臺及移液管、試管、平皿、廣口瓶等玻璃器皿。 儀器設(shè)備、計量器具應(yīng)由計量檢定部門檢定合格，嚴格按照操作規(guī)程要求使用，填寫儀器設(shè)備的使用記錄。貴重儀器設(shè)備應(yīng)有專人管理。定期對儀器設(shè)備進行維護、校準和做好設(shè)備的期間核查工作，保證儀器設(shè)備處于良好的工作狀態(tài)［3］。用具刷洗徹底、無殘留物，無菌用品使用高壓蒸汽殺菌，并烘干備用。殺菌后物品在一個星期內(nèi)未使用，需重新殺菌。對于容量較大的密閉容器，殺菌前瓶內(nèi)應(yīng)裝入少量水，將容器蓋子略旋開，以使容器內(nèi)部能形成蒸汽進行有效地殺菌。每次殺菌應(yīng)使用橫變試紙檢查殺菌溫度是否達到要求。

4樣品采集

樣品的采集必須具有代表性，要考慮到各種影響樣品質(zhì)量的因素，防止樣品受到外源性污染，防止樣品變質(zhì)和細菌生長，采樣必須在無菌操作下進行，所謂無菌操作是指杜絕任何病原性或非病原性微生物進入樣品。采樣要按照我國食品衛(wèi)生標準方法進行，樣品要登記并注明名稱!數(shù)量!批號!采樣日期等，不同的調(diào)味品要采用不同的運輸和保存方法，可根據(jù)情況參照國際食品規(guī)格委員會(ICMSF)推薦的食品采樣方法和標準建立可靠的質(zhì)量評價方法以保證樣品合格［4］。樣品的采取必須具有代表性 ，一般應(yīng)采取完整未開封的樣品，散裝樣品必須在無菌操作條件下使用無菌器具采集樣品送到實驗室，不應(yīng)超過3~4h，否則應(yīng)置于低溫環(huán)境中待檢。

5檢驗

5.1方法:

檢驗方法是食品微生物實驗室質(zhì)量保證的重要步驟，目前食品微生物檢驗必須按照食品衛(wèi)生檢驗方法微生物學部分所規(guī)定的檢驗方法操作或其他官方認可的方法進行，微生物檢驗必須按無菌操作要求進行。在檢驗過程中還要注意三點:(1)做平行樣，以保證結(jié)果的可比性；(2)設(shè)立空白對照，以防止其它污染而導(dǎo)致的結(jié)果不準確；(3)設(shè)計合適的質(zhì)控頻率，進行質(zhì)控試驗，將質(zhì)控菌株與常規(guī)工作一起進行，不能專人專做，當質(zhì)控標準菌株的內(nèi)在敏感性發(fā)生改變時要更換新的菌種。

5.2操作:

(1)操作人員必須牢固樹立無菌觀念，整個操作均要求無菌操作，盡量靠近火焰，動作要迅速，從微生物的分離、純化到接種，手法規(guī)范，嚴格按照GB/T4789食品微生物檢驗標準中的操作規(guī)程進行檢驗。

(2)進入無菌室從樣品的制備到檢驗都要為防止二次污染采取必要措施，如樣品及器皿擺放整齊便于操作，操作過程熟練。

(3)樣品取樣時用無菌工具無菌操作取樣。

(4)原始記錄要真實準確，不得隨意填寫，按照GB/T4789標準規(guī)定的方法進行數(shù)據(jù)處理及結(jié)果判定。

6結(jié)果與報告

檢測結(jié)果應(yīng)準確、清晰、客觀的在檢驗報告中進行表述，要注意計算、書寫，如有涂改，要以杠改，并簽上檢測人姓名，經(jīng)審核人員核查簽字并蓋章后生效，檢驗原始記錄應(yīng)及時記載，格式要求有足夠的信息量，并具有可朔源性，如有第幾法要求也應(yīng)標注清楚，不應(yīng)混記。

綜上所述，只要我們遵守職業(yè)道德，嚴謹科學態(tài)度，注意以上幾個環(huán)節(jié)就能使我們調(diào)味品微生物檢驗數(shù)據(jù)的準確性得以保證，以把好調(diào)味品衛(wèi)生和安全提供可靠依據(jù)。

參考文獻

［1］GB/T4789-2003，食品衛(wèi)生微生物學檢驗［S］.北京：中國標準出版社，2003。

［2］ 陳劍剛.B/T15481-2000標準在衛(wèi)生檢驗質(zhì)量控制中的應(yīng)用［J］.中國衛(wèi)生檢驗雜志，2002，12（4）：487。

微生物培養(yǎng)基報告范文第3篇

【關(guān)鍵詞】 微生物限度；藥品檢驗；影響因素

保證藥品衛(wèi)生質(zhì)量是藥物質(zhì)量管理的重要內(nèi)容，為了規(guī)范藥品生產(chǎn)企業(yè)和藥品檢驗部門的行為，保證藥品質(zhì)量安全，規(guī)定了藥品微生物限度。微生物限度檢查主要是對非規(guī)定滅菌制劑以及其原、輔料等所受微生物的污染程度進行檢查的一種方法，包括控制菌以及染菌量的檢查。由于微生物限度的檢查程序較為繁瑣，檢查周期較長且操作嚴格，加之檢查過程中存在較多的干擾因素，容易產(chǎn)生檢查結(jié)果誤差，因此難以對生產(chǎn)進行科學和系統(tǒng)的管理[1-3]。本研究分析總結(jié)了微生物限度的檢驗誤差因素以及控制方法?，F(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2011年1月～2013年1月我所檢驗的藥品共1200種。其中，片劑200種，顆粒制劑340種，中藥制劑460種，口服液200種。

1.2 方 法 對上述藥物進行微生物限度檢查，統(tǒng)計影響檢驗的誤差因素及其具體分布。并對誤差影響因素進行分析總結(jié)。

2 結(jié) 果

本組藥品中，共有340例檢驗中發(fā)生誤差，發(fā)生率為28.3%。其中，約有1/3的誤差是由單因素導(dǎo)致的，另外2/3的誤差則是由多因素導(dǎo)致的。影響微生物檢驗的因素主要包括操作環(huán)境因素、培養(yǎng)基因素、設(shè)備因素、藥物自身因素等。詳見表1。

表1 誤差因素及其分布情況

3 討 論

3.1 藥品自身因素 微生物限度的根本影響因素在于藥品本身的特殊性以及藥品中存在的細菌，本組占57.4%。首先，藥品容易受到外界生物污染，且這種污染的種類及程度均存在較強的多樣性。同時，污染存在分布不均勻性，在同一批次的藥品中，部分被污染，而有部分未被污染，被污染的藥品其污染程度也不盡相同。此外，作為檢測對象的微生物存在較大的變異性，這也是影響微生物限度的原因之一[2]。

3.2 檢驗設(shè)備及用具因素 微生物限度檢驗過程中所用的檢驗器具均應(yīng)充分洗滌、滅菌。通常采用高壓蒸汽滅菌，滅菌結(jié)束后切忌立即置于冷處，以免由于急速冷卻而導(dǎo)致藥品內(nèi)的蒸汽冷凝，進而產(chǎn)生負壓易感菌。應(yīng)取出后置于恒溫培養(yǎng)箱中將其烘干待用[3]。此外，各種恒溫恒濕培養(yǎng)箱均應(yīng)定期檢定，并每天觀察其箱內(nèi)的溫度及濕度的變化情況。本組設(shè)備及用具因素占21.2%。

3.3 培養(yǎng)基因素 培養(yǎng)基的質(zhì)量以及穩(wěn)定性對于檢驗結(jié)果具有決定性的意義，本組中占44.4%。目前常采用的培養(yǎng)基大多為商品用的脫水培養(yǎng)基，容易吸潮，若存放不當很容易出現(xiàn)凝塊，導(dǎo)致凝固性降低，應(yīng)嚴格按照相關(guān)說明存放和配置，并應(yīng)在有效期內(nèi)使用。對于滅菌以后的培養(yǎng)基，不宜存放過久，應(yīng)在2～25℃下保存，并在3周內(nèi)用完，避免造成水分喪失和感染細菌。在處理培養(yǎng)基時，應(yīng)作一次性蒸汽滅菌處理，對于已經(jīng)過滅菌處理的固體培養(yǎng)基，應(yīng)采用微波爐或者水浴加熱使之溶化，切忌用電爐直接將其溶化，避免因過度受熱而導(dǎo)致營養(yǎng)成分受損。同時，已經(jīng)溶化的培養(yǎng)基需一次性用完，不應(yīng)使用剩余的培養(yǎng)基。注入平面皿時的溫度應(yīng)控制在45℃，溫度過高容易導(dǎo)致細菌受損或者死亡，溫度過低容易導(dǎo)致細菌凝固，嚴重影響混勻，在使用前應(yīng)采用水浴保溫[1-3]。

3.4 操作環(huán)境因素 藥品微生物限度檢查應(yīng)配備單獨的無菌室進行檢查，環(huán)境潔凈度應(yīng)達到1萬級，而局部潔凈度應(yīng)在100級以上。操作前對操作臺以及可能存在污染的死角進行徹底清洗和消毒殺菌。此外，還應(yīng)采用沉降菌檢測法對空氣中存在的菌落數(shù)進行檢查，并以此來判斷無菌室的潔凈度是否達標。此外，無菌室內(nèi)應(yīng)配備火柴、乙醇燈、剪刀、鑷子等，檢查人員應(yīng)盡量避免頻繁走動，如需要傳遞物品應(yīng)采用傳遞箱，操作人員不得隨意進出無菌室，全面減少污染。微生物鑒別以及菌種處理均應(yīng)在半無菌室內(nèi)完成，嚴禁在清潔室內(nèi)操作，以免實驗室環(huán)境污染或者導(dǎo)致菌種交叉污染等，從而控制檢驗誤差[3]。本組環(huán)境操作因素占47.6%。

3.5 供試液制備因素 供試液的制備過程對于微生物限度檢查結(jié)果的準確性具有重要意義，本組占72.1%。檢驗時應(yīng)先驗證檢驗方法，確保檢驗條件、檢查及驗證方法之間的一致性。整個操作過程必須無菌操作，應(yīng)靠近火焰區(qū)進行，在應(yīng)用滅菌器具時，不得與可能污染的器物相接觸，不得用口吹滅菌吸管。在稀釋供試液以及將供試液注入平面皿時，應(yīng)先振搖然后取均勻試液操作，勿取上清液或者沉淀物，以免濃度變化影響實驗結(jié)果[3]。在制備過程中，如需要采用水浴加溫，應(yīng)控制溫度不高于45℃，且水浴時間不應(yīng)超過30min。整個制備直至加入培養(yǎng)基的時間應(yīng)控制在1h內(nèi)，以免因操作時間過長而使得微生物繁殖或者死亡，進而影響計數(shù)的結(jié)果。在向表面皿中注入培養(yǎng)基時，應(yīng)充分振搖，使其與供試液混合均勻，避免發(fā)生細菌重疊或者成片生長，避免對計數(shù)結(jié)果造成影響。

3.6 菌落計數(shù)因素 當細菌生長較快并且較密集時，容易出現(xiàn)計數(shù)誤差。因此，進行菌落計數(shù)時，必須仔細觀察，必要時可使用放大鏡或者低倍顯微鏡等，從而將小氣泡、藥渣等感染計數(shù)排除。如果無法辨別，則可根據(jù)實際情況適當延長培養(yǎng)的時間[4]。本組菌落計數(shù)因素占14.1%。

總之，藥品微生物限度檢驗的影響因素眾多，檢驗人員應(yīng)強化無菌觀念，全面加強操作規(guī)范，提高操作技術(shù)，并注意操作過程中的細節(jié)問題，減少或者避免發(fā)生藥品微生物限度檢驗誤差。

參考文獻

[1] 陳萬勝.藥品微生物限度檢驗誤差影響因素分析[J].中國當代醫(yī)藥，2011，18（4）：121.

[2] 李佩蓉，范秋汝.藥品微生物限度檢驗的誤差影響因素[J].北方藥學，2011，8（3）：81，119.

微生物培養(yǎng)基報告范文第4篇

高職衛(wèi)生檢驗與檢疫技術(shù)專業(yè)是實踐性很強的專業(yè)，培養(yǎng)的是面向基層衛(wèi)生防疫部門、食品企業(yè)等單位具有較強動手能力的應(yīng)用型人才。衛(wèi)生微生物檢驗技術(shù)是衛(wèi)生檢驗與檢疫技專業(yè)的主要專業(yè)課程之一，也是一門實踐性與技能性很強的課程，實踐操作水平影響學生工作能力的培養(yǎng)。目前我校衛(wèi)生微生物檢驗技術(shù)課程總課時90學時，其中理論40學時，實驗50學時，實驗與理論之比達1.25∶1（如加上學生工學交替、頂崗實習時數(shù)，實驗課比重更是驚人）。如何改革實驗教學方法，培養(yǎng)學生實踐能力、動手能力和創(chuàng)新能力，是目前教學改革中的重要課題之一。如何通過實驗教學使學生的動手能力得到進一步加強，進一步培養(yǎng)學生獨立操作能力、觀察能力、解決問題能力，我們對衛(wèi)生微生物檢驗技術(shù)實驗教學方法進行了探討。

一、正確構(gòu)建教學內(nèi)容

我校采用“校企合作”的方法，經(jīng)過充分調(diào)研，根據(jù)疾病預(yù)防與控制中心微生物科等的崗位能力需求和相應(yīng)工作任務(wù)的要求以及全國微生物檢驗技術(shù)資格考試要求來設(shè)計所必須的教學內(nèi)容。衛(wèi)生微生物檢驗技術(shù)實驗主要由基本技能、常見微生物檢驗技術(shù)、環(huán)境衛(wèi)生微生物檢驗技術(shù)、食品衛(wèi)生微生物檢驗技術(shù)等組成。其中基本技能部分主要包括細菌染色技術(shù)、培養(yǎng)基配制、細菌分離培養(yǎng)技術(shù)、細菌生化反應(yīng)、消毒滅菌技術(shù)等，為學生進行各種標本的微生物檢驗打好基礎(chǔ)。常見微生物檢驗技術(shù)包括常見球菌、腸道桿菌、弧菌、非發(fā)酵菌等檢驗，讓學生對常見微生物的鑒定程序、方法等有所了解。環(huán)境衛(wèi)生微生物檢驗技術(shù)、食品衛(wèi)生微生物檢驗技術(shù)包括各種環(huán)境標本、化妝品標本、食品標本等的微生物檢驗，采用最新的國家標準方法，使學生掌握真實標本的衛(wèi)生微生物檢驗程序、鑒定和報告。

二、改革實驗教學方法，適應(yīng)培養(yǎng)應(yīng)用型衛(wèi)生檢驗與檢疫技術(shù)人才的需要

傳統(tǒng)的實驗教學方法多采用教師講解、演示，學生按部就班操作。實驗課結(jié)束，學生對本次實驗的印象不深，很多學生只是機械操作，對整個實驗存在較大的盲目性。因此，從實驗準備開始就讓學生全程參與。包括培養(yǎng)基、試劑的配制，標本的制備，各種儀器、器材的準備等都由教師指導(dǎo)，學生完成準備。在準備過程中，學生對本次實驗的目的、要求、步驟、方法等已有了解。實驗過程中讓學生對實驗的每一步想想為什么，培養(yǎng)學生獨立分析問題、解決問題的能力。

三、強化生物安全教育

生物安全是完成實驗的基本保障，教師在實驗中要反復(fù)強調(diào)生物安全的重要性。從“非典”突發(fā)事件中暴露的實驗室生物污染問題使學生意識到實驗中生物安全的重要性。因為衛(wèi)生微生物檢驗標本的特殊性(待測菌為可以致病的病原微生物)，如果實驗室本身管理不善或?qū)W生在實驗中操作不規(guī)范，隨時都可能造成病原微生物的感染和擴散。因此，第一堂實驗課就向?qū)W生講授生物安全相關(guān)知識，包括合理正確使用生物安全柜、超凈工作臺和高壓滅菌器等。強調(diào)實驗室規(guī)則，如進入實驗室一律穿好白大褂，嚴禁在實驗室吃東西，不得在實驗室喧嘩，若在實驗過程中出現(xiàn)意外一定要報告實驗老師，不能私自處理。必須嚴格按操作規(guī)程進行實驗，實驗結(jié)束后雙手消毒、清洗干凈后方能離開等。任何實驗材料不得私自帶出實驗室，使學生在校就養(yǎng)成嚴格注意生物安全的習慣。

四、開放實驗室，加強基本技能的培養(yǎng)

基本技能是學生進行專業(yè)實踐操作的基礎(chǔ)，尤其是衛(wèi)生微生物檢驗的基本技能如細菌染色技術(shù)、細菌分離培養(yǎng)技術(shù)等因為沒有基礎(chǔ)課程支撐，學生都是從零開始。由于受課時所限，學生在課堂上無法完全掌握微生物檢驗的各種基本技能。因此需要加大實驗室開放力度，讓學生課余反復(fù)進行培養(yǎng)基配制、細菌分離、染色等訓練，提高學生操作能力。

五、適應(yīng)地方特色，選擇檢驗標本

興趣是學習的有效促進劑。實驗標本的制備是學生實驗成功的基礎(chǔ)，也是培養(yǎng)學生實驗興趣的有效載體。標本的選擇中，也要注重地方特色。如寧波為沿海地區(qū)，海產(chǎn)品豐富，副溶血性弧菌引起的食物中毒較常見，可以選擇蟹糊等本地常見海產(chǎn)品進行檢測。學生拿到富有地方特色的標本，就有興趣考慮這些標本中可以檢測出何種微生物？如何進行檢測……

為了使學生對各種標本的檢驗有陽性結(jié)果，陽性標本制備成功與否是關(guān)鍵。陽性標本制備方法基本有兩種：如果是液體標本，則可直接在標本中添加適量待測菌，混勻即成。如果是固體標本，標本內(nèi)不宜加待測菌，可以事先在增菌培養(yǎng)基中加入適量待測菌。兩種方法最后都能使學生分離到目的菌，使學生掌握從標本的處理、增菌培養(yǎng)、分離培養(yǎng)直至菌種鑒定、結(jié)果報告整個過程。

六、注重與行業(yè)合作，共同培養(yǎng)學生

加強高職教育校企合作是培養(yǎng)高技能應(yīng)用型人才的必由之路。在衛(wèi)生微生物檢驗技術(shù)教學中，學校和行業(yè)共同組建教學團隊，雙方共同完成教學任務(wù)；教學過程中，采用去疾病預(yù)防與控制中心微生物科見習與學校教學交替等形式，充分利用學習資源，給學生提供豐富的實踐機會；實訓課程采用循序漸進的教學模式，通過校內(nèi)實驗、實訓，校外見習至頂崗實習，分階段對學生進行技能訓練，使學生在現(xiàn)場真實工作情景中，達到理論與實踐的融合。

七、重視實驗考核

考試是評價學生對各門課程掌握程度好壞的標準，也是制約學生重視實驗教學的重要手段。通過實驗考核可以使學生重視實驗課，對實驗課的學習由被動變?yōu)橹鲃?。首先，我校教?wù)處明文規(guī)定，學生實踐考核不合格，不得參加該門課程的理論考試，從而使學生在思想上重視實驗課。其次，改革實驗考核方法，注重實驗過程的考核。學生的實驗考核分數(shù)包括平時實驗分和期末實驗考核分。平時實驗分由實驗課出勤率、實驗態(tài)度、參加課外開放實驗率、操作規(guī)范性、實驗報告等方面組成。期末實驗考核包括實驗理論和實驗技能兩部分，實驗技能分基本技能和綜合技能。各種技能考核都制訂完善的考核標準，由學生抽簽考核內(nèi)容，兩位教師打分，盡量做到分數(shù)公正，能正確反映學生的操作技能掌握情況。再次，加大課程總成績中實驗考核分數(shù)比重。高職教育培養(yǎng)的是應(yīng)用型人才，操作技能尤為重要，在課程總成績中實驗考核比重可達40%，甚至50%。

通過以上改革措施，使學生認識到實驗課的重要性，同時也提高了實驗課的地位和學生的學習熱情，使學生由被動轉(zhuǎn)為主動，積極參與實驗準備。也培養(yǎng)了學生獨立分析問題、解決問題的能力，使教學質(zhì)量有較大提高。同時加強了與行業(yè)的聯(lián)系，與行業(yè)共同培養(yǎng)學生，學生的知識水平和操作能力也得到行業(yè)的肯定。

參考文獻：

微生物培養(yǎng)基報告范文第5篇

關(guān)鍵詞：食品 大腸菌群 菌落總數(shù) 檢測 規(guī)范

前言

目前，食品大腸菌群與菌落總數(shù)的檢測標準主要是采用GB/T4789.3-2003食品衛(wèi)生微生物學檢驗 大腸菌群測定[1]、GB4789.3-2010食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 大腸菌群計數(shù)[2]、GB4789.2-2010食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 菌落總數(shù)測定[3]這三個國家標準。但是目前國家標準只給出了實驗的基本操作步驟及計算方法，而在實際的檢驗工作中，還存在一些影響操作可靠性的因素并未給出說明。本文結(jié)合筆者自身檢驗經(jīng)驗，對大腸菌群與菌落總數(shù)的檢測過程中易發(fā)生不規(guī)范操作的部分做出強調(diào)，以期對每個檢驗環(huán)節(jié)精確控制，以獲得穩(wěn)定可信的檢驗結(jié)果。

一、大腸菌群測定的一些要點：

大腸菌群的發(fā)酵試驗中要用到小倒管，主要用來觀察氣泡的出現(xiàn)。但是實驗中經(jīng)常會出現(xiàn)還未接種樣液，小倒管內(nèi)就出現(xiàn)氣泡，這樣會影響結(jié)果的判斷?，F(xiàn)列舉出出現(xiàn)這種現(xiàn)象的幾種原因及對策：

1.小倒管的口太小。在滅菌過程中，高壓會將培養(yǎng)基壓進小倒管，使空氣排出，但如果小倒管開口過小，空氣不容易出來，培養(yǎng)基也不容易進去，容易導(dǎo)致氣泡殘留在管內(nèi)影響觀察，若是這種情況，可以改用開口較大的V形管代替。

2.小倒管里面殘留有水珠。因為小倒管開口很小，清洗后內(nèi)部的水不容易干燥完全。這樣會導(dǎo)致滅菌過程中培養(yǎng)基無法進去，使用時要注意放置小倒管前要將其內(nèi)部的水甩干。

3.硅膠塞將試管口塞得過緊。硅膠塞將試管口塞得過緊，會使在滅菌過程中試管內(nèi)外的壓力不一致，滅菌鍋升溫升壓時，鍋內(nèi)壓力大于試管內(nèi)壓力，壓力不夠?qū)⑴囵B(yǎng)基完全壓進小倒管，于是就會殘留氣泡。塞子過緊還易導(dǎo)致滅菌鍋降溫時，鍋內(nèi)壓力小于試管內(nèi)壓力，容易使試管內(nèi)培養(yǎng)基噴出，培養(yǎng)基報廢。解決的辦法是，硅膠塞不要塞得過緊或者選用更透氣的棉塞。

4.滅菌完畢后太快打開滅菌鍋。當滅菌鍋壓力表示數(shù)為0而溫度表示數(shù)還高與室溫時，不要打開滅菌鍋。因為打開鍋蓋瞬間，鍋內(nèi)大量熱量散出，溫度突然降低，試管內(nèi)溫度也隨著降低，導(dǎo)致管內(nèi)氣壓減小，沸點降低，部分培養(yǎng)基會汽化留在小倒管內(nèi)。解決的辦法是，等滅菌鍋內(nèi)氣壓和溫度都降到與室溫一致或相差不大時再打開滅菌鍋，或者等試管冷卻后放在4℃冰箱內(nèi)，利用溫度差，將小倒管中氣泡排出。另外，滅菌完畢后過早打開滅菌鍋還有可能造成培養(yǎng)基或者其他液體試劑噴濺出來，導(dǎo)致滅菌失敗。

5.滅菌鍋壓力達不到要求。滅菌鍋壓力達不到標準要求，就不能強行將空氣從小倒管中排出，導(dǎo)致氣泡殘留，而壓力達不到，滅菌溫度也相應(yīng)的會降低，會導(dǎo)致滅菌不徹底。解決的辦法是檢查修理滅菌鍋。

6.培養(yǎng)基質(zhì)量也會引起小倒管中殘留氣泡。用裝有水的試管與裝有培養(yǎng)基的試管作對照，若裝有水的試管內(nèi)小倒管正常排氣，則可考慮培養(yǎng)基中含有高溫高壓產(chǎn)氣成分，導(dǎo)致小倒管中殘留氣泡。解決的辦法是更換培養(yǎng)基。

遇到小倒管產(chǎn)氣時要仔細分析原因，切不可將試管大角度傾斜或者顛倒排氣，這樣會導(dǎo)致試管口和試管塞污染及培養(yǎng)基流出。

二、菌落總數(shù)測定的一些要點：

1.稀釋液的選用：國標上列出的稀釋液有生理鹽水和磷酸鹽緩沖液兩種可選用，生理鹽水能維持細胞良好的滲透壓，有利于菌的生長，磷酸鹽緩沖液具有較強的緩沖能力，因此也可為細胞維持一個較為穩(wěn)定的pH環(huán)境，避免細胞受損害。對于一般的樣品可以使用生理鹽水，對于偏酸偏堿的樣品用磷酸鹽緩沖液能防止培養(yǎng)基受樣品酸堿影響從而引起不良的性能。

2.移液管的使用：接種時使用移液管要注意，從吸管筒內(nèi)取出滅菌吸管時，不要將吸管尖端碰著其他仍留在容器內(nèi)的吸管的外露部分；而且吸管在進出裝有稀釋液的玻璃瓶和試管時，也不要觸及瓶口及試管口的外側(cè)部分；因為這些部分都可能接觸過手或其他沾污物。而接種后的廢棄移液管尖端及外壁還有殘留樣品溶液，要立即將尖端插入裝有消毒液的桶內(nèi)，以防止微生物氣溶膠產(chǎn)生，消毒液可選用0.1%的新潔爾滅溶液。

3.空白對照的接種：空白對照分為幾種做法，一種是空白平板，直接加20ml的瓊脂，另一種是先在平板里面加1ml滅菌后稀釋液再加20ml的瓊脂，這樣才能檢驗出平板和稀釋液是否滅菌徹底，直接加瓊脂的是為了監(jiān)測瓊脂是否有污染，先加入1mL稀釋液的是為了監(jiān)測稀釋液有沒有污染。此外還有在操作臺上放置瓊脂平板，將一只裝有培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿蓋打開，直到操作結(jié)束，為檢驗操作過程及環(huán)境中是否污染。還有一種是樣品的空白，樣品空白只針對某些接種后有顆粒狀物質(zhì)的樣品，可以接種樣品后將此平板放置于4℃冰箱內(nèi)，等樣品正常培養(yǎng)后同時取出觀察，計數(shù)時作為空白對照，以區(qū)分菌落和顆粒。另外還有一種區(qū)分食品顆粒與菌落的方法是，在已熔化而保溫在45℃水浴內(nèi)的平板計數(shù)瓊脂中，按100ml加1ml0.5%氯化三苯四氮唑（TTC）水溶液，培養(yǎng)后食品顆粒不變色，細菌為紅色。

4.培養(yǎng)基的傾注：在加入樣液后，應(yīng)在15min內(nèi)傾注培養(yǎng)基，這樣做的原因是，若時間過長，有可能使樣液干燥貼在平板上，傾注培養(yǎng)基后不易搖開，樣液在培養(yǎng)基內(nèi)分布不均，易產(chǎn)生片狀菌落，不易計數(shù)。檢樣與培養(yǎng)基混勻時，可先向一個方向旋轉(zhuǎn)，然后再向相反方向旋轉(zhuǎn)。旋轉(zhuǎn)中應(yīng)防止混合物濺到皿邊的上方。培養(yǎng)基凝固后，應(yīng)盡快將平皿翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)，保持瓊脂表面干燥，以避免菌落蔓延生長，影響計數(shù)。

5.菌落總數(shù)的計算：計算菌落總數(shù)時，如果遇到高稀釋度的平板上菌落比低稀釋度平板上菌落少，則說明檢驗過程存在失誤或是樣品中含有抑菌物質(zhì)，這樣的結(jié)果不可用于報告，應(yīng)綜合判斷后再行檢驗。如果三個稀釋度上菌落數(shù)都超過300，不能以多不可計作為報告，應(yīng)在最高稀釋度的平板上任意選取單位面積，計算菌落數(shù)，然后再乘以平板面積得出平板上的總菌落數(shù)，再乘以稀釋倍數(shù)報告結(jié)果。

結(jié)束語

以上是對食品中大腸菌群和菌落總數(shù)檢驗中經(jīng)常會遇到的幾個問題和需要注意的細節(jié)的總結(jié)，食品微生物的檢測要求檢驗人員具有良好的無菌意識，微生物檢測需要長期積累，細心總結(jié)，規(guī)范操作，保證得到準確的檢驗結(jié)果，為食品衛(wèi)生質(zhì)量做出正確評價。

參考文獻：

[1]GB/T4789.3-2003食品衛(wèi)生微生物學檢驗 大腸菌群測定